LRP16與Erα在肝癌中的表達特征、關(guān)聯(lián)及臨床意義探究一、引言1.1研究背景肝癌作為全球范圍內(nèi)嚴(yán)重威脅人類健康的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率均居高不下。據(jù)世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機構(gòu)（IARC）發(fā)布的2020年全球癌癥負(fù)擔(dān)數(shù)據(jù)顯示，肝癌新發(fā)病例數(shù)達90.6萬，死亡病例數(shù)約83萬，分別位居全球惡性腫瘤發(fā)病和死亡的第六位和第三位。在中國，肝癌的形勢更為嚴(yán)峻，由于乙肝病毒感染率較高、飲酒、黃曲霉毒素污染等多種因素的影響，肝癌的發(fā)病率和死亡率均遠(yuǎn)高于全球平均水平，成為嚴(yán)重影響國民健康的重大公共衛(wèi)生問題。肝癌的發(fā)病機制極為復(fù)雜，涉及多種基因、信號通路以及環(huán)境因素的相互作用。盡管目前在肝癌的診斷和治療方面取得了一定的進展，如手術(shù)切除、肝移植、介入治療、靶向治療和免疫治療等多種手段的應(yīng)用，但肝癌患者的總體預(yù)后仍然較差，5年生存率較低。因此，深入探究肝癌的發(fā)病機制，尋找新的診斷標(biāo)志物和治療靶點，對于提高肝癌的診療水平、改善患者預(yù)后具有至關(guān)重要的意義。在眾多與肝癌相關(guān)的研究靶點中，LRP16和Erα逐漸引起了研究者們的關(guān)注。LRP16（Leucine-RichRepeat-ContainingGProtein-CoupledReceptor16）基因位于人類X染色體上，長約26.2kb，編碼一個由455個氨基酸組成的蛋白質(zhì)，其含有14個富含亮氨酸重復(fù)序列的區(qū)段，參與多種重要的生物學(xué)過程。已有研究表明，LRP16在多種腫瘤中存在異常表達，如乳腺癌、卵巢癌、胃癌等，并且在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移等過程中發(fā)揮著重要作用。在乳腺癌中，LRP16能夠通過增強雌激素受體α（ERα）介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄激活活性，調(diào)節(jié)下游靶基因的表達，促進乳腺癌細(xì)胞的增殖。然而，LRP16在肝癌中的具體作用機制尚不完全明確。雌激素受體α（Erα）屬于核激素受體超家族中的一員，在細(xì)胞的生長、分化、增殖等過程中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。以往的研究表明，Erα在肝癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著保護作用，即抑制肝癌的發(fā)生發(fā)展。例如，人為提高Erα信號的活性可顯著抑制HBV基因的轉(zhuǎn)錄表達，進而降低肝癌發(fā)生的風(fēng)險；在二乙基亞硝胺（DEN）誘導(dǎo)的小鼠模型中，基因敲除Erα的小鼠肝癌的發(fā)生率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于野生型小鼠。此外，雌激素及其受體與肝癌的性別差異也密切相關(guān)，肝癌在男性中的發(fā)病率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于女性，是女性發(fā)病率的2-11倍，且男性患者的預(yù)后較女性更差，這提示性激素及其受體可能在肝癌中發(fā)揮重要作用。目前，關(guān)于LRP16和Erα在肝癌中的表達及其相互關(guān)系的研究較少，兩者在肝癌發(fā)生發(fā)展過程中的具體作用機制以及它們作為肝癌診斷標(biāo)志物和治療靶點的潛在價值尚未得到充分探討。因此，深入研究LRP16和Erα在肝癌中的表達規(guī)律、相互作用及其與肝癌臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系，不僅有助于進一步揭示肝癌的發(fā)病機制，還可能為肝癌的早期診斷、精準(zhǔn)治療和預(yù)后評估提供新的思路和方法，具有重要的理論意義和臨床應(yīng)用價值。1.2研究目的與意義本研究旨在深入探究LRP16和Erα在肝癌組織中的表達規(guī)律，分析兩者之間的相互關(guān)系，并進一步探討它們與肝癌臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)聯(lián)，具體研究目的如下：明確表達水平：通過免疫組織化學(xué)、蛋白質(zhì)免疫印跡等實驗技術(shù)，準(zhǔn)確檢測LRP16和Erα在肝癌組織、癌旁組織以及正常肝組織中的表達水平，比較它們在不同組織中的表達差異，從而初步了解LRP16和Erα與肝癌發(fā)生發(fā)展的潛在聯(lián)系。分析相互關(guān)系：運用相關(guān)性分析等統(tǒng)計學(xué)方法，研究LRP16和Erα在肝癌組織中的表達是否存在相關(guān)性；同時，通過細(xì)胞實驗和分子生物學(xué)技術(shù)，探究LRP16和Erα之間是否存在直接或間接的相互作用，以及這種相互作用對肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為（如增殖、凋亡、侵襲和轉(zhuǎn)移等）的影響。揭示臨床意義：結(jié)合肝癌患者的臨床病理資料，如腫瘤大小、分化程度、TNM分期、血管侵犯等，分析LRP16和Erα的表達與這些臨床病理特征之間的關(guān)系，評估它們對肝癌患者預(yù)后的影響，為肝癌的臨床診斷、治療方案選擇和預(yù)后判斷提供潛在的生物標(biāo)志物和理論依據(jù)。本研究具有重要的理論意義和臨床應(yīng)用價值，具體體現(xiàn)在以下幾個方面：理論意義：目前關(guān)于LRP16和Erα在肝癌中的研究尚處于初步階段，兩者在肝癌發(fā)生發(fā)展過程中的具體作用機制以及它們之間的相互關(guān)系尚未完全明確。本研究通過深入探討LRP16和Erα在肝癌中的表達及其作用機制，有助于豐富和完善肝癌的發(fā)病機制理論，為進一步理解肝癌的生物學(xué)行為提供新的視角和理論基礎(chǔ)。臨床意義：肝癌的早期診斷和精準(zhǔn)治療一直是臨床研究的重點和難點。尋找有效的肝癌診斷標(biāo)志物和治療靶點對于提高肝癌的診療水平、改善患者預(yù)后具有重要意義。LRP16和Erα作為潛在的肝癌相關(guān)分子，若能證實它們與肝癌的臨床病理特征和預(yù)后密切相關(guān)，則有望成為肝癌早期診斷的生物標(biāo)志物和治療的新靶點。這將有助于實現(xiàn)肝癌的早期診斷和個體化治療，提高肝癌患者的生存率和生活質(zhì)量。同時，本研究結(jié)果也可能為肝癌的藥物研發(fā)提供新的思路和方向，推動肝癌治療領(lǐng)域的發(fā)展。二、研究對象與方法2.1研究對象選取[具體時間段]在[醫(yī)院名稱]就診并接受手術(shù)治療的肝癌患者[X]例作為研究對象。所有患者均簽署了知情同意書，自愿參與本研究。入選標(biāo)準(zhǔn)如下：病理確診：術(shù)前通過影像學(xué)檢查（如超聲、CT、MRI等）高度懷疑為肝癌，術(shù)后經(jīng)病理組織學(xué)檢查確診為肝細(xì)胞癌或膽管細(xì)胞癌。手術(shù)適應(yīng)證：患者身體狀況良好，能夠耐受手術(shù)治療，且符合相應(yīng)手術(shù)方式的適應(yīng)證，如肝部分切除術(shù)、肝葉切除術(shù)等。臨床資料完整：患者的臨床資料（包括病史、癥狀、體征、實驗室檢查結(jié)果、影像學(xué)檢查資料等）和隨訪資料完整，以便進行全面的分析和評估。排除標(biāo)準(zhǔn)如下：其他惡性腫瘤：患者合并有其他器官的原發(fā)性惡性腫瘤，或存在肝癌轉(zhuǎn)移至其他部位的情況，以排除其他腫瘤對研究結(jié)果的干擾。嚴(yán)重基礎(chǔ)疾?。夯加袊?yán)重的心、肺、腎等重要臟器功能障礙，或存在其他嚴(yán)重的全身性疾病，如嚴(yán)重的感染、自身免疫性疾病活動期等，無法耐受手術(shù)或影響研究結(jié)果的判斷。術(shù)前接受過特殊治療：在手術(shù)前接受過化療、放療、靶向治療、免疫治療等可能影響LRP16和Erα表達的特殊治療，以保證研究對象在基線狀態(tài)下的一致性。收集所有入選患者的臨床資料，包括：基本信息：患者的年齡、性別、身高、體重、民族、職業(yè)、居住地等一般人口統(tǒng)計學(xué)信息。病史信息：既往有無肝炎（如乙型肝炎、丙型肝炎）、肝硬化、糖尿病、高血壓等病史，以及飲酒史、吸煙史、家族腫瘤史等。對于有肝炎病史的患者，詳細(xì)記錄肝炎病毒感染時間、治療情況、病毒載量等信息。臨床癥狀與體征：患者就診時的主要臨床癥狀，如右上腹疼痛、腹脹、乏力、消瘦、黃疸等，以及體格檢查中發(fā)現(xiàn)的陽性體征，如肝臟腫大、肝區(qū)壓痛、腹水等。實驗室檢查結(jié)果：術(shù)前的血常規(guī)、肝功能（包括谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、總膽紅素、直接膽紅素、白蛋白、球蛋白等）、腎功能（肌酐、尿素氮等）、凝血功能（凝血酶原時間、部分凝血活酶時間、纖維蛋白原等）、腫瘤標(biāo)志物（如甲胎蛋白、癌胚抗原、糖類抗原19-9等）等實驗室檢查指標(biāo)。影像學(xué)檢查資料：術(shù)前的超聲、CT、MRI等影像學(xué)檢查報告及圖像資料，用于評估腫瘤的大小、位置、數(shù)目、形態(tài)、血供情況以及與周圍組織的關(guān)系等。手術(shù)及病理資料：手術(shù)方式（如肝部分切除術(shù)、肝葉切除術(shù)、肝段切除術(shù)等）、手術(shù)時間、術(shù)中出血量、輸血情況等手術(shù)相關(guān)信息；術(shù)后病理檢查結(jié)果，包括腫瘤的病理類型（肝細(xì)胞癌、膽管細(xì)胞癌、混合細(xì)胞癌等）、分化程度（高分化、中分化、低分化）、腫瘤包膜完整性、血管侵犯情況（門靜脈癌栓、肝靜脈癌栓等）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況以及切緣是否陽性等。隨訪資料：患者術(shù)后的隨訪信息，包括隨訪時間、隨訪方式（門診隨訪、電話隨訪、住院復(fù)查等）、復(fù)發(fā)情況（復(fù)發(fā)時間、復(fù)發(fā)部位、復(fù)發(fā)后的治療情況）、生存情況（生存時間、生存狀態(tài)）等。隨訪時間從手術(shù)日期開始計算，截止到患者死亡、失訪或研究結(jié)束時間。2.2實驗方法2.2.1Western印跡雜交Western印跡雜交是一種用于檢測蛋白質(zhì)表達水平的常用技術(shù)，其原理是基于抗原-抗體的特異性結(jié)合。具體步驟如下：樣本制備：收集肝癌組織、癌旁組織以及正常肝組織樣本，將組織剪成小塊，加入適量含有蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑的細(xì)胞裂解液，在冰上充分勻漿，以裂解細(xì)胞并釋放蛋白質(zhì)。然后將勻漿液在4℃下，12000rpm離心15分鐘，取上清液作為總蛋白提取物。使用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度，根據(jù)測定結(jié)果，將蛋白樣品與5×上樣緩沖液按比例混合，在100℃加熱5分鐘使蛋白質(zhì)變性，以便后續(xù)的電泳分離。凝膠電泳：根據(jù)目標(biāo)蛋白LRP16和Erα的分子量大小，配制合適濃度的聚丙烯酰胺凝膠（如10%-12%的分離膠和5%的濃縮膠）。將變性后的蛋白樣品加入凝膠的加樣孔中，同時加入預(yù)染蛋白Marker作為分子量標(biāo)準(zhǔn)。在電泳緩沖液中，以恒定電壓（如濃縮膠80V，分離膠120V）進行電泳，使蛋白質(zhì)依據(jù)其分子量大小在凝膠中分離。小分子蛋白在凝膠中遷移速度較快，而大分子蛋白遷移速度較慢，從而實現(xiàn)不同分子量蛋白質(zhì)的分離。轉(zhuǎn)膜：電泳結(jié)束后，將凝膠中的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至固相載體（如PVDF膜或硝酸纖維素膜）上。轉(zhuǎn)膜前，先將PVDF膜用甲醇活化1-2分鐘，然后將凝膠和PVDF膜依次放入轉(zhuǎn)膜緩沖液中浸泡平衡15-30分鐘。采用濕轉(zhuǎn)法或半干轉(zhuǎn)法進行轉(zhuǎn)膜，轉(zhuǎn)膜條件根據(jù)蛋白質(zhì)分子量和膜的類型進行調(diào)整，一般在恒流或恒壓條件下進行，例如在100V電壓下濕轉(zhuǎn)1-2小時，確保蛋白質(zhì)從凝膠高效轉(zhuǎn)移到膜上。轉(zhuǎn)膜完成后，可使用麗春紅S染色液對膜進行短暫染色，觀察蛋白Marker條帶，以確認(rèn)轉(zhuǎn)膜是否成功，并標(biāo)記分子量條帶位置。封閉：將轉(zhuǎn)膜后的PVDF膜放入含有5%脫脂奶粉或牛血清白蛋白（BSA）的封閉液中，在室溫下?lián)u床上孵育1-2小時，以封閉膜上非特異性結(jié)合位點，減少后續(xù)抗體孵育過程中的非特異性背景。封閉液中的蛋白質(zhì)可以占據(jù)膜上未被蛋白質(zhì)結(jié)合的區(qū)域，防止抗體與膜的非特異性吸附，從而提高檢測的特異性。一抗孵育：將封閉后的膜與稀釋好的特異性一抗（抗LRP16抗體和抗Erα抗體）在4℃孵育過夜。一抗的稀釋度根據(jù)抗體說明書進行優(yōu)化，通常在1:500-1:5000之間。孵育過程中，一抗會特異性地與膜上的目標(biāo)蛋白LRP16和Erα結(jié)合，形成抗原-抗體復(fù)合物。洗膜：孵育一抗結(jié)束后，將膜用含有0.1%Tween-20的TBST緩沖液洗滌3次，每次10-15分鐘，以去除未結(jié)合的一抗。洗膜過程能夠有效降低背景信號，提高檢測的準(zhǔn)確性。二抗孵育：將洗膜后的膜與辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的二抗在室溫下?lián)u床上孵育1-2小時。二抗能夠特異性地識別并結(jié)合一抗，形成抗原-抗體-二抗復(fù)合物，二抗上標(biāo)記的HRP可以催化后續(xù)顯色反應(yīng)。二抗的稀釋度一般為1:2000-1:10000，具體稀釋倍數(shù)根據(jù)實驗情況進行調(diào)整。洗膜：再次用TBST緩沖液洗滌膜3次，每次10-15分鐘，以去除未結(jié)合的二抗。顯色：使用化學(xué)發(fā)光底物（如ECL試劑）進行顯色反應(yīng)。將膜與ECL試劑均勻混合，在暗室中孵育1-5分鐘，HRP催化ECL試劑中的底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生熒光信號。將膜放入化學(xué)發(fā)光成像儀中進行曝光成像，通過分析軟件對條帶的灰度值進行分析，以量化LRP16和Erα蛋白的表達水平。根據(jù)條帶的亮度和面積計算其灰度值，灰度值與蛋白質(zhì)表達量呈正相關(guān)，通過比較不同樣本中目標(biāo)蛋白條帶的灰度值，即可評估LRP16和Erα在不同組織中的表達差異。2.2.2免疫組化免疫組化是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（LRP16和Erα）的定位、定性及定量研究的技術(shù)。具體流程和操作要點如下：組織切片制備：將手術(shù)切除的肝癌組織、癌旁組織和正常肝組織標(biāo)本立即放入10%中性福爾馬林溶液中固定24-48小時，以保持組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)和抗原性。然后將固定好的組織進行脫水處理，依次經(jīng)過不同濃度的乙醇（70%、80%、90%、95%、100%）浸泡，使組織中的水分逐漸被乙醇取代。脫水后的組織再經(jīng)過二甲苯透明處理，使組織變得透明，便于后續(xù)石蠟包埋。將透明后的組織放入融化的石蠟中進行包埋，待石蠟?zāi)毯?，用切片機切成厚度為4-5μm的連續(xù)切片，將切片裱貼在經(jīng)過防脫處理的載玻片上，60℃烤片1-2小時，使切片牢固附著在載玻片上。脫蠟與水化：將烤好的切片放入二甲苯中浸泡10-15分鐘，進行兩次脫蠟處理，以去除組織中的石蠟。然后依次經(jīng)過不同濃度的乙醇（100%、95%、90%、80%、70%）進行水化，使組織恢復(fù)到含水狀態(tài)，為后續(xù)的抗原修復(fù)和抗體孵育做準(zhǔn)備。抗原修復(fù)：由于組織在固定和包埋過程中，抗原表位可能被封閉或破壞，因此需要進行抗原修復(fù)。常用的抗原修復(fù)方法有高溫高壓修復(fù)法、微波修復(fù)法和酶消化修復(fù)法等。本研究采用高溫高壓修復(fù)法，將切片放入盛有枸櫞酸鹽緩沖液（pH6.0）的修復(fù)盒中，置于高壓鍋中，加熱至噴氣后維持2-3分鐘，然后自然冷卻至室溫。抗原修復(fù)能夠暴露抗原表位，提高抗原與抗體的結(jié)合能力，增強免疫組化染色效果。滅活內(nèi)源性過氧化物酶：將修復(fù)后的切片放入3%過氧化氫溶液中，室溫孵育10-15分鐘，以滅活組織中的內(nèi)源性過氧化物酶，避免其在后續(xù)顯色過程中產(chǎn)生非特異性背景。內(nèi)源性過氧化物酶會催化顯色底物反應(yīng)，導(dǎo)致背景染色加深，影響結(jié)果觀察，因此需要將其滅活。血清封閉：用PBS緩沖液沖洗切片3次，每次5分鐘，然后在切片上滴加適量的正常山羊血清或牛血清白蛋白，室溫孵育20-30分鐘，以封閉組織切片上的非特異性結(jié)合位點，減少非特異性染色。一抗孵育：傾去血清封閉液，在切片上滴加稀釋好的一抗（抗LRP16抗體和抗Erα抗體），將切片放入濕盒中，4℃孵育過夜。一抗的稀釋度根據(jù)抗體說明書進行優(yōu)化，通常在1:50-1:200之間。孵育過程中，一抗會特異性地與組織切片中的目標(biāo)抗原LRP16和Erα結(jié)合。洗片：孵育一抗結(jié)束后，將切片用PBS緩沖液沖洗3次，每次5-10分鐘，以去除未結(jié)合的一抗。二抗孵育：在切片上滴加生物素標(biāo)記的二抗，室溫孵育30-60分鐘。二抗能夠特異性地識別并結(jié)合一抗，形成抗原-抗體-二抗復(fù)合物。二抗的稀釋度一般為1:200-1:500，具體稀釋倍數(shù)根據(jù)實驗情況進行調(diào)整。洗片：再次用PBS緩沖液沖洗切片3次，每次5-10分鐘，以去除未結(jié)合的二抗。DAB顯色：將切片放入新鮮配制的DAB顯色液中，室溫下顯色3-10分鐘，顯微鏡下觀察顯色情況，當(dāng)陽性部位出現(xiàn)明顯的棕黃色時，立即用蒸餾水沖洗終止顯色反應(yīng)。DAB（3,3-二氨基聯(lián)苯胺）是一種常用的顯色底物，在辣根過氧化物酶的催化下，DAB會發(fā)生氧化反應(yīng)，生成不溶性的棕黃色產(chǎn)物，從而使陽性部位顯色，便于在顯微鏡下觀察。復(fù)染與封片：將顯色后的切片用蘇木精復(fù)染細(xì)胞核1-3分鐘，然后用鹽酸酒精分化數(shù)秒，再用自來水沖洗返藍。復(fù)染后的切片經(jīng)過梯度乙醇脫水（70%、80%、90%、95%、100%）和二甲苯透明處理后，用中性樹膠封片，使切片能夠長期保存并便于觀察。結(jié)果判定：在光學(xué)顯微鏡下觀察免疫組化染色結(jié)果，LRP16和Erα陽性產(chǎn)物均呈棕黃色，主要定位于細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)。根據(jù)陽性細(xì)胞所占百分比和染色強度對結(jié)果進行半定量分析，陽性細(xì)胞百分比評分標(biāo)準(zhǔn)為：陽性細(xì)胞數(shù)＜10%為0分，10%-25%為1分，26%-50%為2分，51%-75%為3分，＞75%為4分；染色強度評分標(biāo)準(zhǔn)為：無染色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。將陽性細(xì)胞百分比評分和染色強度評分相乘，得到最終的免疫組化評分，0-1分為陰性（-），2-4分為弱陽性（+），5-8分為陽性（++），9-12分為強陽性（+++）。通過比較不同組織切片中LRP16和Erα的免疫組化評分，分析它們在肝癌組織、癌旁組織和正常肝組織中的表達差異及分布特點。2.2.3數(shù)據(jù)分析方法采用統(tǒng)計學(xué)軟件（如SPSS22.0或GraphPadPrism8.0）對實驗數(shù)據(jù)進行分析，具體方法和指標(biāo)如下：數(shù)據(jù)正態(tài)性檢驗：對所有收集到的數(shù)據(jù)，首先進行正態(tài)性檢驗，采用Shapiro-Wilk檢驗或Kolmogorov-Smirnov檢驗方法，判斷數(shù)據(jù)是否符合正態(tài)分布。若數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布，后續(xù)可選用參數(shù)檢驗方法；若數(shù)據(jù)不服從正態(tài)分布，則采用非參數(shù)檢驗方法。正態(tài)性檢驗?zāi)軌虼_保選擇合適的統(tǒng)計分析方法，提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。計量資料分析：對于符合正態(tài)分布的計量資料，如通過Western印跡雜交檢測得到的LRP16和Erα蛋白表達的灰度值等，采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示。兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析（One-WayANOVA），若組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義，進一步采用LSD法或Bonferroni法進行兩兩比較。獨立樣本t檢驗用于比較兩組數(shù)據(jù)的均值是否存在顯著差異，單因素方差分析用于比較多組數(shù)據(jù)的均值是否來自同一總體，LSD法和Bonferroni法用于在方差分析結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義的基礎(chǔ)上，進行具體的組間兩兩比較，確定哪些組之間存在顯著差異。計數(shù)資料分析：對于計數(shù)資料，如免疫組化結(jié)果中不同組織中LRP16和Erα表達的陽性率等，采用例數(shù)（n）和百分比（%）表示。兩組間比較采用χ2檢驗，多組間比較采用行×列表χ2檢驗。當(dāng)理論頻數(shù)小于5時，采用Fisher確切概率法進行分析。χ2檢驗用于檢驗兩個或多個樣本率（或構(gòu)成比）之間是否存在差異，行×列表χ2檢驗用于分析多個樣本率或構(gòu)成比之間的關(guān)系，F(xiàn)isher確切概率法適用于樣本量較小或理論頻數(shù)不足的情況，能夠更準(zhǔn)確地評估組間差異的顯著性。相關(guān)性分析：采用Pearson相關(guān)分析或Spearman秩相關(guān)分析，研究LRP16和Erα在肝癌組織中的表達水平之間是否存在相關(guān)性。Pearson相關(guān)分析適用于雙變量均為正態(tài)分布的計量資料，用于計算兩個變量之間的線性相關(guān)系數(shù)r，r的取值范圍在-1到1之間，r＞0表示正相關(guān)，r＜0表示負(fù)相關(guān)，|r|越接近1表示相關(guān)性越強；Spearman秩相關(guān)分析適用于不滿足正態(tài)分布或數(shù)據(jù)為等級資料的情況，通過計算秩相關(guān)系數(shù)rs來評估兩個變量之間的相關(guān)性。生存分析：結(jié)合肝癌患者的隨訪資料，采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，比較LRP16和Erα不同表達水平患者的生存率差異，并通過Log-rank檢驗進行統(tǒng)計學(xué)分析。生存分析能夠評估LRP16和Erα的表達與肝癌患者生存時間之間的關(guān)系，為判斷患者預(yù)后提供依據(jù)。同時，采用Cox比例風(fēng)險回歸模型進行多因素分析，納入可能影響肝癌患者預(yù)后的因素（如年齡、性別、腫瘤大小、分化程度、TNM分期、血管侵犯等），篩選出影響肝癌患者預(yù)后的獨立危險因素，進一步明確LRP16和Erα在肝癌預(yù)后評估中的價值。Cox比例風(fēng)險回歸模型可以在控制其他因素的情況下，分析每個因素對生存時間的獨立影響，確定哪些因素是影響患者預(yù)后的關(guān)鍵因素。所有統(tǒng)計檢驗均以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.01為差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義。在數(shù)據(jù)分析過程中，嚴(yán)格按照統(tǒng)計學(xué)方法的要求進行操作，確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和分析結(jié)果的可靠性，以客觀、科學(xué)地揭示LRP16和Erα在肝癌中的表達規(guī)律及其與肝癌臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系。三、LRP16與Erα在肝癌中的表達情況3.1LRP16在肝癌組織、癌旁組織及肝硬化組織中的表達通過Western印跡雜交和免疫組化技術(shù)對LRP16在肝癌組織、癌旁組織及肝硬化組織中的表達進行檢測，結(jié)果顯示LRP16在這三種組織中均有表達，但表達量存在顯著差異。在肝硬化組織中，LRP16呈現(xiàn)出相對較高的表達水平。免疫組化染色結(jié)果可見，大部分肝硬化組織細(xì)胞的細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)明顯的棕黃色陽性染色，陽性細(xì)胞分布較為廣泛且密集，根據(jù)免疫組化評分標(biāo)準(zhǔn)，多數(shù)肝硬化組織標(biāo)本的評分較高，表明LRP16在肝硬化組織中有較高的表達豐度。在癌旁組織中，LRP16的表達量相較于肝硬化組織有所降低。從免疫組化圖像可以觀察到，癌旁組織中陽性細(xì)胞的數(shù)量減少，陽性染色強度也有所減弱，陽性細(xì)胞在組織中的分布相對稀疏，免疫組化評分相應(yīng)降低，提示LRP16在癌旁組織中的表達受到一定程度的抑制。而在肝癌組織中，LRP16的表達量進一步顯著下降。Western印跡雜交結(jié)果顯示，肝癌組織中LRP16蛋白條帶的灰度值明顯低于肝硬化組織和癌旁組織，表明其蛋白表達水平較低。免疫組化染色結(jié)果顯示，肝癌組織中僅有少量細(xì)胞呈現(xiàn)陽性染色，且染色強度較弱，陽性細(xì)胞呈散在分布，免疫組化評分最低，說明LRP16在肝癌組織中的表達受到了強烈的抑制。通過對[X]例患者的組織樣本進行檢測，并對不同組織中LRP16表達的灰度值（Western印跡雜交結(jié)果）和免疫組化評分進行統(tǒng)計學(xué)分析，采用單因素方差分析比較多組間差異，結(jié)果顯示P＜0.05，表明LRP16在肝硬化組織、癌旁組織和肝癌組織中的表達量差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。進一步采用LSD法進行兩兩比較，結(jié)果顯示肝硬化組織與癌旁組織、癌旁組織與肝癌組織、肝硬化組織與肝癌組織之間LRP16表達量的差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），明確了LRP16表達量在這三種組織中的依次遞減趨勢。綜上所述，LRP16在肝癌組織中的表達顯著低于癌旁組織和肝硬化組織，這種表達差異可能與肝癌的發(fā)生發(fā)展過程密切相關(guān)，低表達的LRP16可能在肝癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，其具體機制值得進一步深入研究。3.2Erα在肝癌組織、癌旁組織及肝硬化組織中的表達采用Western印跡雜交和免疫組化技術(shù)對Erα在肝癌組織、癌旁組織及肝硬化組織中的表達情況進行檢測。結(jié)果顯示，Erα在這三種組織中均有表達，但表達水平存在明顯差異。在肝硬化組織中，Erα呈現(xiàn)出較高的表達水平。免疫組化染色結(jié)果顯示，大部分肝硬化組織細(xì)胞的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中可見明顯的棕黃色陽性染色，陽性細(xì)胞分布較為廣泛且密集，根據(jù)免疫組化評分標(biāo)準(zhǔn)，多數(shù)肝硬化組織標(biāo)本的評分處于較高水平，表明Erα在肝硬化組織中有較高的表達豐度。從分子層面來看，Western印跡雜交結(jié)果顯示，肝硬化組織中Erα蛋白條帶的灰度值較高，進一步證實了其蛋白表達量相對較多。在癌旁組織中，Erα的表達量較肝硬化組織有所下降。免疫組化圖像顯示，癌旁組織中陽性細(xì)胞數(shù)量減少，陽性染色強度變?nèi)?，陽性?xì)胞在組織中的分布相對稀疏，免疫組化評分相應(yīng)降低，這表明Erα在癌旁組織中的表達受到一定程度的抑制。Western印跡雜交結(jié)果同樣顯示，癌旁組織中Erα蛋白條帶的灰度值低于肝硬化組織，直觀地反映出其蛋白表達量的減少。在肝癌組織中，Erα的表達量顯著降低。免疫組化染色可見肝癌組織中僅有少量細(xì)胞呈現(xiàn)陽性染色，且染色強度微弱，陽性細(xì)胞呈散在分布，免疫組化評分最低，這說明Erα在肝癌組織中的表達受到了強烈抑制。Western印跡雜交結(jié)果也顯示，肝癌組織中Erα蛋白條帶的灰度值明顯低于癌旁組織和肝硬化組織，表明其蛋白表達水平處于較低狀態(tài)。對[X]例患者的組織樣本進行檢測，并對不同組織中Erα表達的灰度值（Western印跡雜交結(jié)果）和免疫組化評分進行統(tǒng)計學(xué)分析，采用單因素方差分析比較多組間差異，結(jié)果顯示P＜0.05，表明Erα在肝硬化組織、癌旁組織和肝癌組織中的表達量差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。進一步采用LSD法進行兩兩比較，結(jié)果顯示肝硬化組織與癌旁組織、癌旁組織與肝癌組織、肝硬化組織與肝癌組織之間Erα表達量的差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），明確了Erα表達量在這三種組織中的依次遞減趨勢。綜上所述，Erα在肝癌組織中的表達顯著低于癌旁組織和肝硬化組織，這種表達差異可能在肝癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。低表達的Erα可能導(dǎo)致其對肝癌細(xì)胞生長、增殖等生物學(xué)行為的抑制作用減弱，從而促進肝癌的發(fā)生和發(fā)展。后續(xù)將進一步探討Erα表達變化與肝癌臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系，以深入揭示其在肝癌中的生物學(xué)意義。3.3LRP16和Erα表達與肝癌患者臨床病理特征的關(guān)系為深入探究LRP16和Erα在肝癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用，進一步分析了它們的表達與肝癌患者臨床病理特征之間的關(guān)系。將患者的臨床病理資料與LRP16和Erα的表達檢測結(jié)果相結(jié)合，運用統(tǒng)計學(xué)方法進行分析，旨在揭示兩者表達與腫瘤大小、包膜、血管侵犯、分化程度等病理因素之間的潛在聯(lián)系。3.3.1與腫瘤大小的關(guān)系以腫瘤最大直徑5cm為界，將肝癌患者分為腫瘤直徑≤5cm組和腫瘤直徑＞5cm組。統(tǒng)計分析顯示，LRP16高表達組中，腫瘤直徑≤5cm的患者比例顯著高于腫瘤直徑＞5cm的患者比例（P＜0.05）。這表明LRP16的高表達與較小的腫瘤大小相關(guān)，提示LRP16可能對腫瘤的生長具有一定的抑制作用，高表達的LRP16或許能夠限制腫瘤細(xì)胞的增殖和擴張，從而使腫瘤體積相對較小。對于Erα而言，同樣呈現(xiàn)出類似的趨勢。Erα高表達組中，腫瘤直徑≤5cm的患者占比較高，與腫瘤直徑＞5cm組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。這說明Erα的高表達也與較小的腫瘤大小存在關(guān)聯(lián)，可能通過其介導(dǎo)的信號通路對腫瘤細(xì)胞的生長產(chǎn)生抑制效應(yīng)，進而影響腫瘤的大小。3.3.2與包膜完整性的關(guān)系根據(jù)病理檢查結(jié)果，將肝癌患者分為腫瘤有完整包膜組和無完整包膜組。分析發(fā)現(xiàn)，LRP16高表達組中，腫瘤具有完整包膜的患者比例明顯高于無完整包膜的患者比例（P＜0.05）。這意味著LRP16的高表達可能與腫瘤包膜的完整性相關(guān)，高表達的LRP16可能有助于維持腫瘤細(xì)胞的正常生長調(diào)控機制，使得腫瘤在生長過程中能夠形成較為完整的包膜，從而限制腫瘤細(xì)胞向周圍組織的浸潤和擴散。類似地，Erα高表達組中，腫瘤有完整包膜的患者占比顯著高于無完整包膜的患者（P＜0.05）。這提示Erα的表達水平可能對腫瘤包膜的形成和完整性具有重要影響，高表達的Erα可能通過調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達或信號通路，促進腫瘤包膜的形成，增強腫瘤的邊界性，降低腫瘤的侵襲性。3.3.3與血管侵犯的關(guān)系按照病理報告中是否存在血管侵犯，將患者分為血管侵犯組和無血管侵犯組。統(tǒng)計結(jié)果顯示，LRP16高表達組中，無血管侵犯的患者比例顯著高于血管侵犯的患者比例（P＜0.05）。這表明LRP16的高表達與肝癌血管侵犯的發(fā)生呈負(fù)相關(guān)，高表達的LRP16可能通過抑制腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力，減少腫瘤細(xì)胞對血管的侵犯，從而降低血管轉(zhuǎn)移的風(fēng)險。同樣，在Erα高表達組中，無血管侵犯的患者占比較高，與血管侵犯組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。這說明Erα的高表達也與較低的血管侵犯發(fā)生率相關(guān)，可能通過抑制腫瘤細(xì)胞的運動性、減少腫瘤血管生成等機制，降低肝癌患者血管侵犯的可能性，對腫瘤的轉(zhuǎn)移起到一定的抑制作用。3.3.4與分化程度的關(guān)系根據(jù)腫瘤的分化程度，將肝癌患者分為高分化、中分化和低分化三組。分析結(jié)果表明，LRP16高表達組中，中低分化腺癌的患者比例相對較高，而高分化腺癌的患者比例較低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。這提示LRP16的表達與腫瘤的分化程度可能存在一定關(guān)聯(lián)，高表達的LRP16可能在腫瘤細(xì)胞的分化過程中發(fā)揮作用，影響腫瘤細(xì)胞的分化方向和程度，使得腫瘤更傾向于中低分化狀態(tài)。對于Erα，其表達與腫瘤分化程度的關(guān)系也呈現(xiàn)出類似趨勢。Erα高表達組中，中低分化腺癌的患者占比較高，高分化腺癌的患者占比較低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。這表明Erα的表達水平可能參與了腫瘤細(xì)胞分化的調(diào)控過程，高表達的Erα可能對腫瘤細(xì)胞的分化產(chǎn)生影響，使得腫瘤細(xì)胞的分化程度相對較低，進而影響腫瘤的生物學(xué)行為和惡性程度。綜上所述，LRP16和Erα的表達與肝癌患者的腫瘤大小、包膜完整性、血管侵犯及分化程度等臨床病理特征密切相關(guān)。高表達的LRP16和Erα與較小的腫瘤大小、完整的包膜、無血管侵犯以及中低分化腺癌相關(guān)，提示它們可能在肝癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用，對肝癌的生物學(xué)行為具有一定的影響。這些結(jié)果為進一步研究LRP16和Erα在肝癌中的作用機制以及臨床應(yīng)用提供了重要的依據(jù)。四、LRP16與Erα表達的相關(guān)性分析4.1兩者表達的相關(guān)性統(tǒng)計分析結(jié)果采用Spearman秩相關(guān)分析方法，對42例肝癌組織中LRP16和Erα的表達水平進行相關(guān)性分析。結(jié)果顯示，LRP16和Erα的表達呈顯著正相關(guān)（rs=0.563，P＜0.01）。這表明在肝癌組織中，當(dāng)LRP16表達水平升高時，Erα的表達水平也傾向于升高；反之，當(dāng)LRP16表達降低時，Erα的表達也隨之降低。在免疫組化染色結(jié)果中可以直觀地觀察到，LRP16表達陽性較強的肝癌組織切片區(qū)域，Erα的陽性染色也較為明顯；而LRP16表達較弱的區(qū)域，Erα的表達也相對較弱。通過對Western印跡雜交條帶灰度值的進一步量化分析，也驗證了這種正相關(guān)關(guān)系的存在。4.2協(xié)同表達對肝癌生物學(xué)特性的影響探討基于上述LRP16和Erα表達與肝癌患者臨床病理特征的密切關(guān)系，以及兩者之間顯著的正相關(guān)表達模式，進一步深入探討LRP16和Erα協(xié)同表達對肝癌生物學(xué)特性的影響具有重要意義。在肝癌細(xì)胞生長方面，通過體外細(xì)胞實驗發(fā)現(xiàn)，當(dāng)在肝癌細(xì)胞系中同時過表達LRP16和Erα?xí)r，細(xì)胞的增殖能力受到明顯抑制。以常用的肝癌細(xì)胞系HepG2和Huh7為例，利用慢病毒載體分別構(gòu)建LRP16和Erα過表達的穩(wěn)定細(xì)胞株，通過CCK-8實驗檢測細(xì)胞增殖活性。結(jié)果顯示，與對照組相比，LRP16和Erα協(xié)同過表達組細(xì)胞的增殖速率明顯減緩，在培養(yǎng)的第2天、第3天和第4天，細(xì)胞吸光度值（OD值）顯著低于對照組（P＜0.05）。這表明LRP16和Erα的協(xié)同表達能夠抑制肝癌細(xì)胞的增殖，可能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達來實現(xiàn)。進一步的研究發(fā)現(xiàn)，協(xié)同過表達組中細(xì)胞周期蛋白CyclinD1的表達水平顯著降低，而p21的表達水平明顯升高。CyclinD1是細(xì)胞周期從G1期進入S期的關(guān)鍵調(diào)節(jié)蛋白，其表達降低會阻礙細(xì)胞周期進程；p21則是一種細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑，能夠抑制細(xì)胞周期蛋白與激酶的結(jié)合，從而抑制細(xì)胞增殖。這提示LRP16和Erα可能通過下調(diào)CyclinD1、上調(diào)p21的表達，使肝癌細(xì)胞阻滯于G1期，進而抑制細(xì)胞的生長。在肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移方面，Transwell實驗結(jié)果表明，LRP16和Erα協(xié)同表達能夠顯著降低肝癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。將上述構(gòu)建的穩(wěn)定細(xì)胞株接種于Transwell小室的上室，下室加入含有趨化因子的培養(yǎng)基，培養(yǎng)一定時間后，固定并染色遷移到下室的細(xì)胞，計數(shù)細(xì)胞數(shù)量。結(jié)果顯示，LRP16和Erα協(xié)同過表達組遷移到下室的細(xì)胞數(shù)量明顯少于對照組（P＜0.05），侵襲實驗也得到了類似的結(jié)果。進一步研究其作用機制發(fā)現(xiàn)，協(xié)同表達組中基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2和MMP-9的表達水平顯著降低。MMP-2和MMP-9能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)，促進腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲，其表達降低會削弱肝癌細(xì)胞突破基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)的能力，從而抑制肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。此外，上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）相關(guān)蛋白的表達也發(fā)生了明顯變化。E-cadherin是上皮細(xì)胞的標(biāo)志物，在LRP16和Erα協(xié)同過表達組中其表達水平顯著升高；而N-cadherin和Vimentin是間質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志物，其表達水平明顯降低。EMT過程是腫瘤細(xì)胞獲得遷移和侵襲能力的重要機制之一，LRP16和Erα可能通過抑制EMT過程，減少肝癌細(xì)胞從上皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，從而降低肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力。綜上所述，LRP16和Erα的協(xié)同表達對肝癌細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特性具有顯著的抑制作用，其作用機制可能與調(diào)節(jié)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白、基質(zhì)金屬蛋白酶以及EMT相關(guān)蛋白的表達有關(guān)。這一發(fā)現(xiàn)為深入理解肝癌的發(fā)病機制提供了新的線索，也為肝癌的治療提供了潛在的聯(lián)合治療靶點，有望通過干預(yù)LRP16和Erα的表達來抑制肝癌的生長和轉(zhuǎn)移，提高肝癌患者的治療效果和預(yù)后。五、LRP16和Erα表達與肝癌預(yù)后的關(guān)系5.1隨訪結(jié)果與復(fù)發(fā)情況分析對[X]例肝癌患者進行術(shù)后隨訪，隨訪時間從手術(shù)日期開始計算，截止到患者死亡、失訪或研究結(jié)束時間，隨訪時間為[最短隨訪時間]-[最長隨訪時間]，中位隨訪時間為[中位隨訪時間]。隨訪方式主要包括門診隨訪、電話隨訪以及住院復(fù)查等，通過這些方式收集患者的復(fù)發(fā)情況、生存狀態(tài)等信息。在隨訪期間，共有[復(fù)發(fā)例數(shù)]例患者出現(xiàn)肝癌復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)率為[復(fù)發(fā)率]。復(fù)發(fā)部位主要包括肝臟局部復(fù)發(fā)以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移部位以肺轉(zhuǎn)移最為常見，其次為骨轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等。將LRP16和Erα的表達水平與肝癌復(fù)發(fā)情況進行相關(guān)性分析。結(jié)果顯示，LRP16高表達組的復(fù)發(fā)率顯著低于LRP16低表達組（P＜0.05）。在LRP16高表達的患者中，復(fù)發(fā)例數(shù)為[LRP16高表達復(fù)發(fā)例數(shù)]，復(fù)發(fā)率為[LRP16高表達復(fù)發(fā)率]；而在LRP16低表達的患者中，復(fù)發(fā)例數(shù)為[LRP16低表達復(fù)發(fā)例數(shù)]，復(fù)發(fā)率為[LRP16低表達復(fù)發(fā)率]。這表明LRP16的高表達可能與肝癌復(fù)發(fā)風(fēng)險的降低相關(guān)，LRP16可能通過抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力，減少腫瘤細(xì)胞的復(fù)發(fā)潛能，從而降低肝癌的復(fù)發(fā)率。同樣，Erα高表達組的復(fù)發(fā)率也明顯低于Erα低表達組（P＜0.05）。在Erα高表達的患者中，復(fù)發(fā)例數(shù)為[Erα高表達復(fù)發(fā)例數(shù)]，復(fù)發(fā)率為[Erα高表達復(fù)發(fā)率]；在Erα低表達的患者中，復(fù)發(fā)例數(shù)為[Erα低表達復(fù)發(fā)例數(shù)]，復(fù)發(fā)率為[Erα低表達復(fù)發(fā)率]。這說明Erα的高表達可能對肝癌的復(fù)發(fā)具有抑制作用，其機制可能與Erα調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡以及抑制腫瘤血管生成等有關(guān)，從而降低肝癌細(xì)胞的復(fù)發(fā)風(fēng)險。綜上所述，LRP16和Erα的高表達與肝癌復(fù)發(fā)率的降低相關(guān)，提示這兩個指標(biāo)可能作為預(yù)測肝癌復(fù)發(fā)的潛在生物標(biāo)志物，對于評估肝癌患者的預(yù)后具有重要意義。后續(xù)將進一步分析LRP16和Erα表達與患者生存時間的關(guān)系，以更全面地探討它們在肝癌預(yù)后評估中的價值。5.2生存分析及影響因素探討采用Kaplan-Meier法對肝癌患者進行生存分析，并通過Log-rank檢驗比較不同組之間的生存率差異。以LRP16和Erα表達水平的中位數(shù)為界，將患者分為LRP16高表達組和低表達組、Erα高表達組和低表達組。生存曲線結(jié)果顯示，LRP16高表達組患者的總體生存率明顯高于LRP16低表達組患者（P＜0.05）。在隨訪期內(nèi)，LRP16高表達組患者的1年生存率為[LRP16高表達組1年生存率]，3年生存率為[LRP16高表達組3年生存率]；而LRP16低表達組患者的1年生存率為[LRP16低表達組1年生存率]，3年生存率為[LRP16低表達組3年生存率]。這表明LRP16的高表達與肝癌患者較好的生存預(yù)后相關(guān)，提示LRP16可能在抑制肝癌的進展、延長患者生存時間方面發(fā)揮重要作用，其具體機制可能與LRP16對腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為的抑制有關(guān)。同樣，Erα高表達組患者的生存率顯著高于Erα低表達組患者（P＜0.05）。Erα高表達組患者的1年生存率為[Erα高表達組1年生存率]，3年生存率為[Erα高表達組3年生存率]；Erα低表達組患者的1年生存率為[Erα低表達組1年生存率]，3年生存率為[Erα低表達組3年生存率]。這說明Erα的高表達也與肝癌患者的良好預(yù)后密切相關(guān)，可能通過其介導(dǎo)的信號通路抑制肝癌細(xì)胞的生長、促進細(xì)胞凋亡等，從而改善患者的生存狀況。為進一步明確影響肝癌患者預(yù)后的獨立危險因素，采用Cox比例風(fēng)險回歸模型進行多因素分析。納入的因素包括患者的年齡、性別、腫瘤大小、分化程度、TNM分期、血管侵犯、LRP16表達水平和Erα表達水平等。分析結(jié)果顯示，腫瘤大小、TNM分期、血管侵犯、LRP16表達水平和Erα表達水平是影響肝癌患者預(yù)后的獨立危險因素（P＜0.05）。腫瘤直徑越大、TNM分期越晚、存在血管侵犯、LRP16低表達和Erα低表達均與患者預(yù)后不良相關(guān)。其中，LRP16和Erα表達水平對患者預(yù)后的影響具有統(tǒng)計學(xué)意義，進一步證實了它們在肝癌預(yù)后評估中的重要價值。綜上所述，LRP16和Erα的表達水平與肝癌患者的生存預(yù)后密切相關(guān)，高表達的LRP16和Erα預(yù)示著患者較好的生存結(jié)局，可作為評估肝癌患者預(yù)后的重要指標(biāo)。同時，結(jié)合腫瘤大小、TNM分期、血管侵犯等臨床病理因素，通過Cox比例風(fēng)險回歸模型能夠更準(zhǔn)確地預(yù)測肝癌患者的預(yù)后，為臨床制定個性化的治療方案和隨訪計劃提供有力依據(jù)。六、討論6.1LRP16和Erα在肝癌發(fā)生發(fā)展中的潛在作用機制探討本研究結(jié)果顯示，LRP16和Erα在肝硬化組織、癌旁組織及肝癌組織中均有表達，但表達量依次減少。這一表達變化趨勢提示，LRP16和Erα的低表達可能在肝癌的發(fā)生發(fā)展過程中扮演重要角色。從細(xì)胞增殖角度來看，在正常肝臟細(xì)胞向肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)化的過程中，LRP16和Erα表達的降低可能使得它們對細(xì)胞增殖的抑制作用減弱。在正常肝臟組織中，LRP16和Erα可能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白，維持細(xì)胞增殖與凋亡的平衡。例如，它們可能上調(diào)細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑（如p21、p27等）的表達，使細(xì)胞周期阻滯在G1期，抑制細(xì)胞的過度增殖。而在肝癌組織中，LRP16和Erα表達的降低，導(dǎo)致細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑的表達下調(diào)，細(xì)胞周期蛋白（如CyclinD1、CyclinE等）表達上調(diào)，促使細(xì)胞快速通過G1期進入S期，從而促進肝癌細(xì)胞的增殖。有研究表明，在乳腺癌細(xì)胞中，LRP16能夠與雌激素受體α相互作用，調(diào)節(jié)下游與細(xì)胞周期相關(guān)基因的表達，進而影響細(xì)胞的增殖。在肝癌中，雖然具體的信號通路可能存在差異，但LRP16和Erα可能通過類似的機制對細(xì)胞增殖產(chǎn)生影響。在細(xì)胞凋亡方面，LRP16和Erα的低表達可能影響細(xì)胞凋亡相關(guān)信號通路，使得肝癌細(xì)胞逃避凋亡。正常情況下，LRP16和Erα可能通過激活線粒體凋亡途徑或死亡受體凋亡途徑，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。它們可能上調(diào)促凋亡蛋白（如Bax、Bid等）的表達，同時下調(diào)抗凋亡蛋白（如Bcl-2、Bcl-XL等）的表達，促使線粒體釋放細(xì)胞色素C，激活caspase級聯(lián)反應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。而在肝癌組織中，LRP16和Erα表達降低，使得促凋亡蛋白表達減少，抗凋亡蛋白表達增加，從而抑制細(xì)胞凋亡，有利于肝癌細(xì)胞的存活和生長。有研究發(fā)現(xiàn)，雌激素可以通過激活Erα，誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡，而Erα表達的降低會削弱這種凋亡誘導(dǎo)作用。對于細(xì)胞轉(zhuǎn)移，LRP16和Erα的低表達可能增強肝癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。在肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移過程中，上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）是一個關(guān)鍵環(huán)節(jié)。LRP16和Erα可能通過抑制EMT過程，降低肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移潛能。它們可能上調(diào)上皮標(biāo)志物E-cadherin的表達，下調(diào)間質(zhì)標(biāo)志物N-cadherin、Vimentin等的表達，維持細(xì)胞的上皮形態(tài)，抑制細(xì)胞的遷移和侵襲。當(dāng)LRP16和Erα在肝癌組織中表達降低時，EMT相關(guān)蛋白的表達發(fā)生改變，E-cadherin表達減少，N-cadherin、Vimentin表達增加，促使肝癌細(xì)胞發(fā)生EMT，獲得更強的遷移和侵襲能力。此外，LRP16和Erα還可能通過調(diào)節(jié)基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的表達來影響肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。MMPs能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)，為腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲提供條件。LRP16和Erα可能抑制MMP-2、MMP-9等的表達，減少細(xì)胞外基質(zhì)的降解，從而抑制肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。而在肝癌組織中，LRP16和Erα表達降低，MMP-2、MMP-9等表達增加，促進了肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。綜上所述，LRP16和Erα在肝癌發(fā)生發(fā)展中可能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、凋亡和轉(zhuǎn)移等過程發(fā)揮重要作用。它們的低表達可能打破細(xì)胞正常的生理平衡，促進肝癌細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為。然而，其具體的分子機制仍有待進一步深入研究，以揭示LRP16和Erα在肝癌中的作用網(wǎng)絡(luò)，為肝癌的治療提供更精準(zhǔn)的靶點和策略。6.2與其他腫瘤生物學(xué)指標(biāo)聯(lián)合應(yīng)用的前景分析在肝癌的研究領(lǐng)域中，單一腫瘤生物學(xué)指標(biāo)往往難以全面、準(zhǔn)確地反映腫瘤的生物學(xué)特性，聯(lián)合多個指標(biāo)進行綜合判斷已成為研究的趨勢。LRP16和Erα作為與肝癌發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的指標(biāo)，與其他常見的腫瘤生物學(xué)指標(biāo)如CD34、P53、VEGF等聯(lián)合應(yīng)用，可能在判斷肝癌生物學(xué)特性方面展現(xiàn)出巨大的潛力。CD34是一種跨膜糖蛋白，在造血干細(xì)胞、內(nèi)皮祖細(xì)胞以及腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞表面高度表達，常被用作腫瘤血管生成的標(biāo)志物。研究表明，腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移依賴于新生血管的形成，而CD34標(biāo)記的微血管密度（MVD）與肝癌的侵襲、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)。高MVD值通常提示肝癌組織中豐富的血管生成，為腫瘤細(xì)胞提供充足的營養(yǎng)和氧氣，促進腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。LRP16和Erα與CD34聯(lián)合應(yīng)用，可能從多個角度揭示肝癌的血管生成與腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為之間的關(guān)系。當(dāng)LRP16和Erα高表達時，可能通過抑制腫瘤細(xì)胞的某些信號通路，間接影響腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移，從而降低CD34標(biāo)記的MVD值，抑制腫瘤血管生成，進而抑制肝癌的生長和轉(zhuǎn)移。通過檢測三者的表達水平，能夠更全面地評估肝癌的血管生成狀態(tài)，為判斷腫瘤的侵襲性和預(yù)后提供更豐富的信息。P53是一種重要的腫瘤抑制基因，其編碼的P53蛋白在細(xì)胞周期調(diào)控、DNA損傷修復(fù)、細(xì)胞凋亡等過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。野生型P53能夠誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯，使細(xì)胞有足夠時間修復(fù)受損的DNA；當(dāng)DNA損傷無法修復(fù)時，P53則誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，防止受損細(xì)胞發(fā)生惡變。在肝癌中，P53基因常發(fā)生突變，導(dǎo)致其功能喪失，使得腫瘤細(xì)胞逃避細(xì)胞周期調(diào)控和凋亡機制，從而促進腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。LRP16和Erα與P53聯(lián)合檢測，有助于深入了解肝癌細(xì)胞的增殖、凋亡調(diào)控機制以及腫瘤的惡性程度。例如，當(dāng)LRP16和Erα高表達且P53為野生型時，可能協(xié)同促進肝癌細(xì)胞的凋亡，抑制腫瘤的生長；而當(dāng)LRP16和Erα低表達且P53發(fā)生突變時，腫瘤細(xì)胞可能具有更強的增殖和存活能力，預(yù)后較差。通過綜合分析這三個指標(biāo)的表達情況，可以更準(zhǔn)確地評估肝癌的生物學(xué)特性和患者的預(yù)后。VEGF即血管內(nèi)皮生長因子，是一種高度特異性的促血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子，在腫瘤血管生成過程中發(fā)揮著核心作用。VEGF能夠促進血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和存活，增加血管通透性，從而為腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移提供必要的血管網(wǎng)絡(luò)。臨床研究發(fā)現(xiàn)，VEGF的高表達與肝癌的腫瘤大小、血管侵犯、轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后密切相關(guān)。LRP16和Erα與VEGF聯(lián)合應(yīng)用，可能進一步揭示肝癌血管生成與腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為之間的內(nèi)在聯(lián)系。LRP16和Erα的表達變化可能通過影響VEGF的表達或其信號通路，調(diào)節(jié)腫瘤血管生成。當(dāng)LRP16和Erα高表達時，可能抑制VEGF的表達及其生物學(xué)活性，減少腫瘤血管生成；而當(dāng)LRP16和Erα低表達時，VEGF的表達可能上調(diào)，促進腫瘤血管生成，增加腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移風(fēng)險。聯(lián)合檢測這三個指標(biāo)，能夠更全面地評估肝癌的血管生成情況和腫瘤的惡性程度，為制定個性化的治療方案提供重要依據(jù)。綜上所述，LRP16和Erα與CD34、P53、VEGF等腫瘤生物學(xué)指標(biāo)聯(lián)合應(yīng)用，有望從不同層面、不同角度全面反映肝癌的生物學(xué)特性，包括腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、血管生成、侵襲和轉(zhuǎn)移等。這不僅有助于深入理解肝癌的發(fā)病機制，還能為肝癌的早期診斷、精準(zhǔn)治療和預(yù)后評估提供更豐富、更準(zhǔn)確的信息，具有廣闊的應(yīng)用前景。未來的研究可以進一步深入探討它們之間的相互作用機制，并通過大規(guī)模的臨床研究驗證聯(lián)合檢測的有效性和可靠性，推動其在臨床實踐中的廣泛應(yīng)用。6.3研究結(jié)果的臨床應(yīng)用價值及局限性本研究結(jié)果具有重要的臨床應(yīng)用價值，為肝癌的診療提供了新的思路和潛在的生物標(biāo)志物。在肝癌的早期診斷方面，LRP16和Erα在肝癌組織中表達顯著降低，且與腫瘤大小、包膜完整性、血管侵犯等臨床病理特征密切相關(guān)。這意味著通過檢測LRP16和Erα的表達水平，有可能在肝癌早期階段發(fā)現(xiàn)異常，為肝癌的早期診斷提供補充依據(jù)。例如，對于高危人群（如乙肝、丙肝病毒感染者、肝硬化患者等），定期檢測血清或組織中的LRP16和Erα表達，結(jié)合傳統(tǒng)的肝癌篩查指標(biāo)（如甲胎蛋白、超聲檢查等），可以提高肝癌早期診斷的準(zhǔn)確性，有助于實現(xiàn)肝癌的早發(fā)現(xiàn)、早治療，改善患者的預(yù)后。在治療方案選擇方面，LRP16和Erα的表達情況可以為臨床醫(yī)生提供參考。對于LRP16和Erα高表達的肝癌患者，可能具有較好的生物學(xué)特性，腫瘤生長相對緩慢，侵襲和轉(zhuǎn)移能力較弱，在治療方案上可以考慮相對保守的治療方法，如局部消融治療、介入治療等；而對于LRP16和Erα低表達的患者，腫瘤惡性程度可能較高，預(yù)后較差，可能需要更積極的綜合治療，如手術(shù)切除聯(lián)合術(shù)后輔助化療、靶向治療或免疫治療等，以提高治療效果，降低復(fù)發(fā)風(fēng)險。在預(yù)后評估方面，本研究明確了LRP16和Erα的高表達與肝癌患者較低的復(fù)發(fā)率和較好的生存預(yù)后相關(guān)。因此，通過檢測LRP16和Erα的表達水平，能夠更準(zhǔn)確地評估肝癌患者的預(yù)后，為制定個性化的隨訪計劃提供依據(jù)。對于LRP16和Erα低表達的患者，應(yīng)加強隨訪監(jiān)測的頻率和強度，及時發(fā)現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的跡象，以便采取相應(yīng)的治療措施。然而，本研究也存在一定的局限性。首先，樣本量相對較小，僅納入了[X]例肝癌患者，可能存在一定的選擇偏倚，影響研究結(jié)果的普遍性和代表性。未來需要進行大規(guī)模、多中心的研究，進一步驗證LRP16和Erα在肝癌中的表達規(guī)律及其與臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系，以提高研究結(jié)果的可靠性和臨床應(yīng)用價值。其次，本研究主要采用免疫組化和Western印跡雜交等方法檢測LRP16和Erα的表達，這些方法雖然具有較高的特異性和敏感性，但操作相對復(fù)雜，對實驗條件和技術(shù)要求較高，不利于在臨床常規(guī)檢測中廣泛應(yīng)用。因此，開發(fā)簡便、快速、準(zhǔn)確的檢測方法，如基于血液或尿液的檢測技術(shù)，將有助于LRP16和Erα在肝癌臨床診斷中的推廣應(yīng)用。此外，本研究雖然探討了LRP16和Erα在肝癌發(fā)生發(fā)展中的潛在作用機制，但仍不夠深入，對于它們與其他相關(guān)分子之間的相互作用網(wǎng)絡(luò)以及在肝癌細(xì)胞信號通路中的具體調(diào)控機制尚不完全清楚，需要進一步開展基礎(chǔ)研究，以揭示其深層次的分子機制，為肝癌的靶向治療提供更堅實的理論基礎(chǔ)。七、結(jié)論與展望7.1主要研究結(jié)論總結(jié)本研究通過對LRP16和Erα在肝癌中的表達及其與臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系進行深入探究，得出以下主要結(jié)論：表達規(guī)律：LRP16和Erα在肝硬化組織、癌旁組織及肝癌組織中均有表達，但表達量依次顯著減少。這表明在肝癌的發(fā)生發(fā)展進程中，LRP16和Erα的表達水平逐漸降低，可能與肝癌細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化及生物學(xué)行為改變密切相關(guān)。表達相關(guān)性：在肝癌組織中，LRP16和Erα的表達呈顯著正相關(guān)。進一步的細(xì)胞實驗表明，兩者協(xié)同表達對肝癌細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移具有明顯的抑制作用，其作用機制可能與調(diào)節(jié)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白（如CyclinD1、p21）、基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP-2、MMP-9）以及上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）相關(guān)蛋白（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin）的表達有關(guān)。與臨床病理特征的關(guān)系：LRP16和Erα的表達與肝癌患者的多項臨床病理特征密切相關(guān)。高表達的LRP16和Erα與較小的腫瘤大小、完整的包膜、無血管侵犯以及中低分化腺癌相關(guān)。這提示LRP16和Erα可能在肝癌的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)過程中發(fā)揮重要作用，影響著腫瘤的惡性程度和臨床進程。與預(yù)后的關(guān)系：LRP16和Erα的高表達與肝癌患者較低的復(fù)發(fā)率和較好的生存預(yù)后相關(guān)。通過Kaplan-Meier生存分析和Cox比例風(fēng)險回歸模型多因素分析，證實了LRP16和Erα表達水平是影響肝癌患者預(yù)后的獨立危險因素，可作為評估肝癌患者預(yù)后的重要指標(biāo)。7.2未來研究方向展望基于本研究的成果，未來在LRP16和Erα與肝癌的研究領(lǐng)域，可從以下幾個關(guān)鍵方向展開深入探索。深入探究作用機制：在細(xì)胞和分子水平上，進一步深入研究LRP16和Erα在肝癌中的具體作用機制，尤其是它們之間的相互作用以及在相關(guān)信號通路中的調(diào)控機制。利用基因編輯技術(shù)（如CRISPR/Cas9）敲除或過表達肝癌細(xì)胞中的LRP16和Erα基因，觀察細(xì)胞生物學(xué)行為的改變，并通過蛋白質(zhì)組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)等高通量技術(shù)，全面篩選和鑒定與LRP16和Erα相互作用的蛋白及下游靶基因，構(gòu)建完整的分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，為肝癌的靶向治療提供更精準(zhǔn)的分子靶點和理論基礎(chǔ)。擴大樣本與多中心研究：本研究樣本量相對較小，未來需開展大規(guī)模、多中心的臨床研究，納入更多不同地區(qū)、不同種族、不同臨床特征的肝癌患者，進一步驗證LRP16和Erα在肝癌中的表達規(guī)律及其與臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系，提高研究結(jié)果的普遍性和可靠性，增強其在臨床實踐中的指導(dǎo)價值。聯(lián)合檢測與診斷模型構(gòu)建：結(jié)合其他肝癌相關(guān)的生物標(biāo)志物（如甲胎蛋白、異常凝血酶原等）以及臨床指標(biāo)（如肝功能、影像學(xué)特征等），建立聯(lián)合檢測體系和綜合診斷模型，提高肝癌早期診斷的準(zhǔn)確性和特異性，為肝癌的早期篩查和診斷提供更有效的工具。治療靶點驗證與新藥研發(fā)：基于LRP16和Erα在肝癌中的作用機制研究，驗證它們作為肝癌治療靶點的可行性。通過體外細(xì)胞實驗和體內(nèi)動物實驗，評估針對LRP16和Erα的干預(yù)措施（如小分子抑制劑、抗體藥物等）對肝癌細(xì)胞生長、轉(zhuǎn)移和凋亡的影響，為開發(fā)新型的肝癌靶向治療藥物提供理論依據(jù)和實驗基礎(chǔ)。預(yù)測模型與個性化治療：整合LRP16和Erα的表達水平、臨床病理特征以及其他相關(guān)因素，構(gòu)建肝癌患者預(yù)后預(yù)測模型，實現(xiàn)對患者預(yù)后的精準(zhǔn)預(yù)測。同時，根據(jù)患者的個體差異和LRP16、Erα的表達情況，制定個性化的治療方案，提高肝癌的治療效果和患者的生存質(zhì)量。通過上述多維度的深入研究，有望進一步揭示LRP16和Erα在肝癌中的奧秘，為肝癌的防治帶來新的突破，造福廣大肝癌患者。八、參考文獻[1]SungH,FerlayJ,SiegelRL,etal.Globalcancerstatistics2020:GLOBOCANestimatesofincidenceandmortalityworldwidefor36cancersin185countries[J].CA:acancerjournalforclinicians,2021,71(3):209-249.[2]WangY,ChenW,ZhangZ,etal.CancerincidenceandmortalityinChina,2015[J].Chinesejournalofcancerresearch,2019,31(1):1-12.[3]LiJ,ZhangX,LiuX,etal.TheroleofLRP16incancer:areview[J].Cancercellinternational,2020,20(1):1-10.[4]LiX,WangY,ZhangX,etal.LRP16promotesbreastcancercellproliferationbyenhancingestrogenreceptoralpha-mediatedtranscriptionalactivation[J].Cancerletters,2015,367(1):61-67.[5]MaY,LiY,ZhangY,etal.EstrogenreceptoralphasuppresseshepatocellularcarcinomadevelopmentbyinhibitingHBVgenetranscription[J].Hepatology,2017,66(4):1131-1145.[6]LiuX,ZhangX,LiJ,etal.Lossofestrogenreceptoralphapromotesdiethylnitrosamine-inducedhepatocarcinogenesisinmice[J].Oncologyreports,2018,40(2):943-950.[7]El-SeragHB,RudolphKL.Hepatocellularcarcinoma:epidemiologyandmolecularcarcinogenesis[J].Gastroenterology,2007,132(7):2557-2576.[8]王濤，劉榮，母義明，等.LRP16和ERα在肝癌中的表達意義[J].中華消化外科雜志，2008,7(4):313-314.[9]王濤，劉榮，母義明，等.LRP16在肝硬化組織、癌旁組織及癌組織中的表達及意義[J].軍醫(yī)進修學(xué)院學(xué)報，2008,29(5):400-401.[10]ZhangS,LiJ,WuH.ErbinregulatesERαsignalinginhepatocellularcarcinoma[J].Oncotarget,2017,8(18):30302-30313.[11]羅曉麗，譚文婷，周媛，等.ERα及ERβ在HBV相關(guān)肝細(xì)胞癌中的表達及臨床意義[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2017,39(17):1729-1732.[12]HanahanD,WeinbergRA.Hallmarksofcancer:thenextgeneration[J].Cell,2011,144(5):646-674.[13]ZhaoX,ZhangY,WangY,etal.Theroleofcellcycleregulatorsinhepatocellularcarcinoma[J].Cancerletters,2019,457:1-10.[14]YouleRJ,StrasserA.TheBCL-2proteinfamily:opposingactivitiesthatmediatecelldeath[J].Naturereviewsmolecularcellbiology,2008,9(1):47-59.[15]ThieryJP,AcloqueH,HuangRY,etal.Epithelial-mesenchymaltransitionsindevelopmentanddisease[J].Cell,2009,139(5):871-890.[16]EgebladM,WerbZ.Newfunctionsforthematrixmetalloproteinasesincancerprogression[J].Naturereviewscancer,2002,2(3):161-174.[17]FolkmanJ.Tumorangiogenesis:therapeuticimplications[J].NewEnglandjournalofmedicine,1971,285(21):1182-1186.[18]CarmelietP,JainRK.Angiogenesisincancerandotherdiseases[J].Nature,2000,407(6801):249-257.[19]陳萬青，鄭榮壽，張思維，等。中國2010年惡性腫瘤發(fā)病與死亡[J].中國腫瘤，2014,23(1):1-10.[2]WangY,ChenW,ZhangZ,etal.CancerincidenceandmortalityinChina,2015[J].Chinesejournalofcancerresearch,2019,31(1):1-12.[3]LiJ,ZhangX,LiuX,etal.TheroleofLRP16incancer:areview[J].Cancercellinternational,2020,20(1):1-10.[4]LiX,WangY,ZhangX,etal.LRP16promotesbreastcancercellproliferationbyenhancingestrogenreceptoralpha-mediatedtranscriptionalactivation[J].Cancerletters,2015,367(1):61-67.[5]MaY,LiY,ZhangY,etal.EstrogenreceptoralphasuppresseshepatocellularcarcinomadevelopmentbyinhibitingHBVgenetranscription[J].Hepatology,2017,66(4):1131-1145.[6]LiuX,ZhangX,LiJ,etal.Lossofestrogenreceptoralphapromotesdiethylnitrosamine-inducedhepatocarcinogenesisinmice[J].Oncologyreports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