專題十五生物技術(shù)實踐專題十五生物技術(shù)實踐考向預(yù)測考向預(yù)測1.近五年的考題中，對微生物的分離和培養(yǎng)的考查尤為突出，側(cè)重考查微生物的培養(yǎng)、分離、計數(shù)、無菌技術(shù)等基本知識，對傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的發(fā)酵原理、制作流程等的考查頻度也在不斷提高。對植物組織培養(yǎng)、胡蘿卜素的提取僅進(jìn)行了兩次考查，前者側(cè)重考查營養(yǎng)條件及有關(guān)植物激素的作用等；后者側(cè)重考查胡蘿卜素的萃取劑的選擇等。2．本專題以非選擇題的形式考查。常借助某一特定的微生物的分離和培養(yǎng)考查微生物的營養(yǎng)、接種方法等；對于生物技術(shù)在食品加工中的應(yīng)用，常借助發(fā)酵實例考查，填充內(nèi)容多為教材中一些結(jié)論性語句等。植物組織培養(yǎng)技術(shù)、植物有效成分的提取的考查也多以教材基礎(chǔ)知識為主。3．考綱新變化：（1）刪去了”植物組織培養(yǎng)”，增加了“某種微生物數(shù)量的測定”，將“利用微生物進(jìn)行發(fā)酵來生產(chǎn)特定的產(chǎn)物”改為“利用微生物進(jìn)行發(fā)酵來生產(chǎn)特定的產(chǎn)物以及微生物在其他方面的應(yīng)用”。2018年備考時應(yīng)特別關(guān)注這些變化，在備考時，可以從以下幾個方面來把握：(1)掌握大腸桿菌的純化原理、主要方法及菌種的保存方法。(2)認(rèn)真分析教材中兩個微生物分離與計數(shù)的實例，并掌握微生物的篩選及技術(shù)方法。(3)利用比較法歸納總結(jié)并掌握常見傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的原理、流程及影響因素等。(4)列表比較玫瑰精油、橘皮精油及胡蘿卜素的提取方法、原理、實驗步驟等異同。知識框架知識框架知識與技巧的梳理知識與技巧的梳理考點一微生物的培養(yǎng)、分離與計數(shù)1.消毒和滅菌的比較2.平板劃線法每次灼燒的目的3.純化微生物的接種方法項目平板劃線法稀釋涂布平板法原理通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作,將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線后培養(yǎng),可以分離到由一個細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子胞群體,即菌落將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋,然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面,進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里,聚集在一起的微生物將被分散成單個細(xì)胞,從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落優(yōu)點可以觀察菌落特征,對混合菌進(jìn)行分離可以計數(shù),可以觀察菌落特征缺點不能計數(shù)吸收量較少,較麻煩,平板不干燥效果不好,容易蔓延4.選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基的比較例1.某研究小組的同學(xué)用所學(xué)的微生物的實驗室培養(yǎng)的方法進(jìn)行“變質(zhì)牛奶中金黃色葡萄球菌的分離和計數(shù)實驗”，部分實驗處理和結(jié)果如圖所示。(注：培養(yǎng)皿旁的數(shù)字代表菌落數(shù)目；實驗條件適宜；實驗操作規(guī)范等)請回答相關(guān)問題：(1)在實驗室培養(yǎng)微生物，一方面需要為培養(yǎng)的微生物提供合適的________和________條件；另一方面需要確保無處不在的其他微生物無法混入。(2)據(jù)圖，研究小組采用的是____________法分離和計數(shù)金黃色葡萄球菌。由樣品到4號試管的操作中，第一步，將分別盛有9mL生理鹽水的4支試管________，并編號1～4號；第二步，用移液管從樣品中吸取1mL牛奶，注入1號試管中，充分搖勻；第三步，重復(fù)第二步驟操作，以此類推。4號試管的稀釋倍數(shù)是________。(3)資料顯示，金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性，可在10%～15%NaCl肉湯中生長。本實驗可配制含10%氯化鈉的培養(yǎng)基，使之成為____________培養(yǎng)基，以利于金黃色葡萄球菌生長，抑制或阻止其他微生物的生長。(4)在統(tǒng)計菌落數(shù)目時，需按照菌落計數(shù)的要求計數(shù)，以保證計數(shù)結(jié)果準(zhǔn)確。據(jù)圖可得出1mL牛奶樣品中金黃色葡萄球菌的活菌數(shù)為____________個?！窘馕觥?1)實驗室培養(yǎng)微生物，既要為微生物提供營養(yǎng)和適宜溫度等環(huán)境條件，還要防止被其他微生物污染。(2)圖示所用的分離方法是稀釋涂布平板法；圖示中每一次稀釋都稀釋了10倍，因此4號試管的稀釋倍數(shù)為104倍。(3)含有較高濃度NaCl的培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。(4)圖示中2號試管和4號試管稀釋度下各有2個和1個培養(yǎng)皿，偶然性較大，應(yīng)以3號試管稀釋度的數(shù)據(jù)進(jìn)行計算，即(32＋39＋37)÷3÷0.1×103＝3.6×105個。【答案】(1)營養(yǎng)環(huán)境(2)稀釋涂布平板滅菌104(3)選擇(4)3.6×105統(tǒng)計菌落數(shù)目方法的比較技巧方法 統(tǒng)計菌落數(shù)目方法的比較技巧方法(1)顯微鏡直接計數(shù)法①原理：利用特定細(xì)菌計數(shù)板或血細(xì)胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量。②方法：用計數(shù)板計數(shù)。③缺點：不能區(qū)分死菌與活菌。(2)間接計數(shù)法(活菌計數(shù)法)①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。②計算公式：每克樣品中的菌株數(shù)＝(C÷V)×M，其中，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)。③操作：設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實驗的說服力與準(zhǔn)確性。同時為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計數(shù)?？键c二傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用5.比較果酒、果醋、腐乳、泡菜的制作項目內(nèi)容果酒和果醋的制作腐乳的制作制作泡菜并檢測亞硝酸鹽含量作用菌種果酒:酵母菌果醋:醋酸菌毛霉乳酸菌原理(1)酵母菌在無氧條件下將葡萄糖氧化成乙醇(2)醋酸菌在有氧條件下將乙醇氧化為醋酸毛霉將蛋白質(zhì)、脂肪分解成小分子有機(jī)物乳酸菌將糖轉(zhuǎn)化為乳酸原料選擇新鮮葡萄(或蘋果)豆腐大白菜、花椰菜等新鮮干凈的蔬菜發(fā)酵條件果酒:前期需氧,后期不需氧果醋:一直需氧一直需氧無氧發(fā)酵溫度果酒:18~25℃果醋:30~35℃15~18℃常溫實驗流程挑選葡萄↓榨汁↓↘酒精發(fā)酵醋酸發(fā)酵↓↓果酒果醋讓豆腐上長出毛霉↓加鹽腌制↓加鹵湯裝瓶↓密封腌制制泡菜：選材配制鹽水↓加調(diào)味料,裝壇↓發(fā)酵↓成品測亞硝酸鹽含量:配制溶液制備標(biāo)準(zhǔn)顯色液→制備樣品處理液→比色例2.將醋酸菌突變體中與耐酸有關(guān)的ALDH基因?qū)雰?yōu)良醋酸菌中，選育出高發(fā)酵速率、耐酸的醋酸菌，用于果醋生產(chǎn)。請分析回答下列問題：(1)對含有ALDH基因的DNA與質(zhì)粒用同種限制酶切割后，通過_____________酶連接形成重組質(zhì)粒。為獲得耐酸的醋酸菌，用_________________________法接種于含高濃度醋酸的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。將篩選純化的菌種用____________的方法長期保存。(2)下圖表示溫度、乙醇濃度對該醋酸菌產(chǎn)酸量的影響。①醋酸菌能將乙醇轉(zhuǎn)變?yōu)開________，再將其轉(zhuǎn)變?yōu)榇姿帷＂谘芯坎煌凭珴舛认碌淖罡弋a(chǎn)酸量時，最好把溫度控制為_________________℃，如溫度過高，醋酸菌代謝緩慢甚至死亡，原因是____________________________________________。③酒精發(fā)酵后通過出料口檢測酒精濃度，將發(fā)酵液中酒精濃度調(diào)節(jié)到_________左右才接種醋酸菌，較高的酒精濃度會使產(chǎn)酸量下降，不適宜接種，原因是__________________________________________________。(3)為檢測發(fā)酵過程中醋酸菌數(shù)量，將1mL發(fā)酵液稀釋100倍后，分別取0.1mL稀釋菌液均勻涂布在4個平板上；經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，4個平板上的菌落數(shù)分別為24、139、140、141，據(jù)此可得出每毫升發(fā)酵液中的活菌數(shù)為____________。【解析】(1)DNA連接酶作用是連接兩條DNA鏈；微生物接種常用方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法；甘油管藏的方法適合長期保存菌種。(2)由圖1，可以看出在35℃，產(chǎn)酸量最多，因此溫度應(yīng)控制在35℃，溫度過高，影響酶的活性，醋酸菌代謝緩慢甚至死亡；由圖2，可以看出在乙醇濃度為4%時，產(chǎn)酸量最高．高濃度的酒精會抑制醋酸菌的生長和代謝。(3)第1個平板的菌落數(shù)為24，與其他平板差別太大，可能由偶發(fā)因素引起的，應(yīng)取菌落數(shù)目介于30～300的計數(shù)，因此取后3個平板菌落數(shù)平均值為(139＋140＋141)/3＝140，那么1mL發(fā)酵液活菌數(shù)目為140×10×100＝1.4×105?！敬鸢浮浚?）DNA連接平板劃線(稀釋涂布平板)甘油管藏（2）①乙醛②35(30～35)溫度過高，影響酶的活性(使酶失活)③4%(較)高濃度的酒精會抑制醋酸菌的生長和代謝（3）1.4×105考點二植物有效成分的提取6.植物有效成分的提取實例(1)玫瑰精油的提取注意：①加入NaCl的目的是增加水層的密度，有利于玫瑰油與水分層。②加入無水Na2SO4的目的是吸收精油中殘留的水分。(2)橘皮精油的提取注意：①為了提高出油率，需要將柑橘皮干燥去水，并用石灰水浸泡，浸泡時間為10h以上。②橘皮要浸透，這樣壓榨時不會滑脫，且出油率高，過濾時不會堵塞篩眼。(3)胡蘿卜素的提取注意：原料顆粒的大小、緊密程度、含水量、萃取的溫度和時間等條件也能影響萃取效率。因此在萃取的過程中，要先將胡蘿卜進(jìn)行粉碎和干燥，使之與萃取劑充分接觸，提高溶解度。例3.請回答下列與實驗室提取芳香油有關(guān)的問題：(1)植物芳香油的提取可采用的方法有壓榨法、________和________。(2)芳香油溶解性的特點是不溶于________，易溶于______，因此可用______作為提取劑來提取芳香油。(3)橘子果實含有芳香油，通?？捎胈_______作為材料提取芳香油，而且提取時往往選用新鮮的材料，理由是________________________________________________________________________。(4)對材料壓榨后可得到糊狀液體，為除去其中的固體物獲得乳狀液可采用的方法是________。(5)得到的乳狀液加入氯化鈉并放置一段時間后，芳香油將分布于液體的______層，原因是________________________________________________________________________。加入氯化鈉的作用是____________________________________________________。(6)從乳狀液中分離得到的芳香油中要加入無水硫酸鈉，此試劑的作用是____________?！窘馕觥?1)植物芳香油的提取可采用的方法有壓榨法、蒸餾法、萃取法。(2)見答案。(3)一般采用新鮮的橘子皮來提取橘皮精油，因為新鮮的橘皮中含芳香油多。(4)除去液體中的固體常用方法是過濾。(5)芳香油密度比水小，且不溶于水，會浮在液體的表面。加入氯化鈉會增加水層密度，使油和水分層。(6)無水硫酸鈉可以吸收芳香油中殘留的水分?！敬鸢浮?1)蒸餾法萃取法(2)水有機(jī)溶劑有機(jī)溶劑(其他合理答案也可)(3)橘子皮芳香油含量較高(4)過濾(其他合理答案也可)(5)上油層的密度比水層小(其他合理答案也可)增加水層密度，使油和水分層(6)吸收芳香油中殘留的水分蒸餾法、壓榨法和萃取法的分析方法技巧方法蒸餾法、壓榨法和萃取法的分析方法技巧方法1.水蒸氣蒸餾法有水中蒸餾、水上蒸餾和水氣蒸餾三種方法，應(yīng)根據(jù)不同的原料選擇不同的蒸餾方法。2.壓榨法必須在常溫條件下進(jìn)行，否則會影響產(chǎn)物的產(chǎn)量和質(zhì)量。3.萃取法就是根據(jù)相似相溶原理，根據(jù)不同物質(zhì)的不同沸點來蒸發(fā)或分液。4.雖然三種方法的原理和操作過程不同，但都有過濾提純這一環(huán)節(jié)。5.在實際生產(chǎn)中要根據(jù)原料特點的不同，采用適宜的提取方法。（4（45分鐘）限時訓(xùn)練經(jīng)典常規(guī)題經(jīng)典常規(guī)題1.（2017江蘇卷）苯酚及其衍生物廣泛存在于工業(yè)廢水中，對環(huán)境有嚴(yán)重危害。小明同學(xué)準(zhǔn)備依據(jù)下圖操作步驟，從處理廢水的活性污泥中分離篩選酚降解高效菌株。請回答下列問題:（1）酚降解菌富集培養(yǎng)基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作為碳源的有_____________。（2）將采集到的樣品接種培養(yǎng)，苯酚用量應(yīng)隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加而逐漸_____________。以達(dá)到富集酚降解菌的目的。若上圖平板中菌落過于密集，應(yīng)進(jìn)一步_____________，以便于菌落計數(shù)與分離。制備平板培養(yǎng)基時除了需要水、營養(yǎng)物質(zhì)外，還必須添加_____________。（3）下圖為連續(xù)劃線法示意圖，在圖中_____________（填圖中序號）區(qū)域更易獲得單菌落。（4）采用比色測定法（使用苯酚顯色劑）檢測降解后的廢水中苯酚殘留量。先制作系列濃度梯度并進(jìn)行顯色反應(yīng)，下表中1~5號比色管的苯酚濃度應(yīng)分別為_____________。管號123456苯酚濃度（mg/L）1如果廢水為50mg/L苯酚溶液，降解后約有21%的苯酚殘留，則需將殘留液稀釋_____________（填序號：①5②10③20）倍后，再進(jìn)行比色。2.（2016天津卷）天津獨流老醋歷史悠久、獨具風(fēng)味，其生產(chǎn)工藝流程如下圖。（1）在糖化階段添加酶制劑需要控制反應(yīng)溫度，這是因為酶_____________________。（2）在酒精發(fā)酵階段，需添加酵母菌。在操作過程中,發(fā)酵罐先通氣，后密閉。通氣能提高_(dá)___________的數(shù)量，有利于密閉時獲得更多的酒精產(chǎn)物。（3）在醋酸發(fā)酵階段，獨流老醋采用獨特的分層固體發(fā)酵法，發(fā)酵30天。工藝如下。①發(fā)酵過程中,定期取樣測定醋酸桿菌密度變化,趨勢如右圖。據(jù)圖分析，與顛倒前相比，B層醋酸桿菌密度變化的特點是，由此推測，B層醋酸桿菌密度變化的主要環(huán)境因素是____________________。=2\*GB3②乳酸含量高是獨流老醋風(fēng)味獨特的重要成因。發(fā)酵過程中，發(fā)酵缸中____________層醋醅有利于乳酸菌繁殖，積累乳酸。③成熟醋醅中乳酸菌的種類明顯減少，主要原因是發(fā)酵后期營養(yǎng)物質(zhì)消耗等環(huán)境因素的變化，加劇了不同種類乳酸菌的____________，淘汰了部分乳酸菌種類。高頻易錯題高頻易錯題3．（2017河北石家莊市級聯(lián)考）β胡蘿卜素可用來治療夜盲癥等疾病，也是常用的食用色素。下圖為從酵母菌中提取胡蘿卜素的基本過程：酵母菌A的篩選→酵母菌A的培養(yǎng)→菌體裂解→離心沉淀→萃取→過濾→濃縮→胡蘿卜素的鑒定（1）培養(yǎng)酵母菌的培養(yǎng)基中一般含有等營養(yǎng)成分。要獲得大量的酵母菌用于胡蘿卜素的提取，應(yīng)選擇___________培養(yǎng)基。篩選酵母菌A時，可采用稀釋涂布平板法接種，涂布前的操作是__________________。（2）胡蘿卜素萃取過程中,萃取的效率主要取決于；萃取過程宜采用方式加熱以防止溫度過高；萃取液濃縮前需進(jìn)行過濾，其目的是。（3）果酒的制作也離不開酵母菌，酒精發(fā)酵時一般要將溫度控制在______℃，可用___________檢測酒精的產(chǎn)生與否。4．（2018貴州黔東南州聯(lián)考）農(nóng)作物秸稈是寶貴的可再生資源，已有多種方案充分利用這類資源?；卮鹣铝袉栴}：（1）秸稈粉碎翻壓還田，就是把作物收獲后的秸稈通過機(jī)械化粉碎、耕地、直接翻壓在土壤里，這主要是利用土壤中的________________（微生物）。（2）實驗室鑒別此類微生物的方法是___________法，一般用_____________（接種法）將該菌接種到鑒別培養(yǎng)基上，經(jīng)過一段時間的培養(yǎng)后，在菌落的周圍應(yīng)該出現(xiàn)_____________。（3）纖維素可在微生物作用下轉(zhuǎn)化為葡萄糖，可再接種_________（微生物）進(jìn)一步發(fā)酵生產(chǎn)酒精。之后還可以通過接種醋酸菌將酒精轉(zhuǎn)化為醋酸，在利用該微生物進(jìn)行液體深層醋酸發(fā)酵時，對氣體的需求情況是____________________。精準(zhǔn)預(yù)測題精準(zhǔn)預(yù)測題5．（2018四川綿陽南山中學(xué)）泡菜的制作容易受環(huán)境條件的影響，溫度過高、食鹽用量過低、腌制時間過短，均會造成細(xì)菌大量繁殖，亞硝酸鹽含量增加。某研究小組以“測定泡菜腌制過程中亞硝酸鹽含量的變化”為課題開展了如下研究。請分析回答：①取3只泡菜壇，分別編號A、B、C。②向3只泡菜壇內(nèi)分別加入調(diào)味料和0.6Kg洗凈的新鮮大白菜。③向A、B、C三只泡菜壇內(nèi)分別加入2L濃度依次為10％、20％、30％的食鹽水。④密封后置于相同的環(huán)境中發(fā)酵。⑤測定亞硝酸鹽的含量。在封壇前進(jìn)行第一次測定，以后定期測定，并將測定的數(shù)據(jù)繪制成曲線圖如下。(1)實驗中食鹽水需煮沸并冷卻后才可使用，原因是。(2)若腌制一段時間后，泡菜的口味是酸而不咸，略帶臭味，則最可能是圖中曲線______測定的結(jié)果。理由是。(3)測定亞硝酸鹽的原理是：在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后，與N1萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成____色染料。用和顯色劑制成顏色深淺不同的系列標(biāo)準(zhǔn)管。用刻度移液管分別吸取一定量的，加到不同的比色管中，然后再加入等量的顯色劑進(jìn)行顯色，得到樣品管。將顯色反應(yīng)后的樣品與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)顯色液進(jìn)行比較，估算泡菜中亞硝酸鹽的含量。(4)某同學(xué)欲用新鮮的泡菜濾液分離純化乳酸菌，需要對泡菜濾液進(jìn)行系列梯度稀釋。在系列梯度稀釋操作中應(yīng)該注意的方面是（至少答兩個不同的方面）。6．（2018江西撫州臨川一中）某學(xué)勻小組同學(xué)為調(diào)查湖水中細(xì)菌的污染情況進(jìn)行相關(guān)的實驗。實驗包括制備培養(yǎng)基、滅菌、接種及培養(yǎng)、菌落觀察計數(shù)。（1）該小組同學(xué)所用培養(yǎng)基中含有的蛋白胨、淀粉分別為細(xì)菌培養(yǎng)提供了__________和__________等營養(yǎng)物質(zhì)。（2）配制培養(yǎng)基時在進(jìn)行稱量、溶解、定容后，還需進(jìn)行的操作是___________，對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，一般采用的方法是____________。采用此方法滅菌的原因是。（3）在整個微生物的分離和培養(yǎng)中，一定要注意在_______________條件下進(jìn)行。（4）圖甲和圖乙是兩種接種方法培養(yǎng)后得到的菌落分布，圖甲的接種方法是___________，圖乙的接種方法是________________。（5）為了盡快觀察到細(xì)菌培養(yǎng)的實驗結(jié)果，應(yīng)將接種了湖水樣品的平板置于恒溫箱中培養(yǎng)、培養(yǎng)的溫度設(shè)定在________℃。要使該實驗所得結(jié)果可靠，還應(yīng)該實施的操作是_________________________?！窘忸}思路】本題考查微生物的分離和培養(yǎng)、培養(yǎng)基對微生物的選擇作用等知識，要求學(xué)生識記培養(yǎng)基的成分、無菌技術(shù)中的滅菌方法和微生物培養(yǎng)的條件，掌握培養(yǎng)基的種類及功能和實驗設(shè)計的原則，再規(guī)范答題，屬于考綱識記層次的考查。微生物的培養(yǎng)基一般都要含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽，如蛋白胨在培養(yǎng)基中主要作為氮源，淀粉在培養(yǎng)基中主要作為碳源。實驗室的滅菌方法一般有灼燒滅菌（適合于接種工具的滅菌）、干熱滅菌（適合于耐高溫的、需要保持干燥的物品的滅菌）、高壓蒸汽滅菌（適合于培養(yǎng)基等物體的滅菌）。（1）蛋白胨來源于動物原料，含有維生素、糖和有機(jī)氮等營養(yǎng)物質(zhì)，在培養(yǎng)基中主要作為氮源；淀粉是糖類，在培養(yǎng)基中主要作為碳源。（2）配制培養(yǎng)基時在進(jìn)行稱量、溶解、定容后，還需進(jìn)行的操作是pH調(diào)整，對培養(yǎng)基的滅菌常采用高壓蒸汽滅菌法，因為此方法既能殺死培養(yǎng)基中的芽孢和孢子，又不破壞培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分。（3）微生物的分離和培養(yǎng)過程中，一定要注意無菌操作，防止雜菌污染。（4）接種方法主要有稀釋涂布平板法和平板劃線法，據(jù)圖分析，圖甲的接種方法是稀釋涂布平板法，圖乙的接種方法是平板劃線法。（5）細(xì)菌的培養(yǎng)的最適溫度是37℃，該實驗還需要設(shè)置對照試驗，即同時在另一平板上接種無菌水作為對照。參考答案1.【解題思路】(1)分析富集培養(yǎng)基的成分可知，培養(yǎng)基中蛋白胨、苯酚中含C，可作為碳源。(2)轉(zhuǎn)接的目的之一是富集降解苯酚能力強(qiáng)的酚降解菌，隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增多，培養(yǎng)基中的苯酚含量應(yīng)逐漸增加。若接種培養(yǎng)后平板中菌落過于密集，應(yīng)繼續(xù)稀釋涂布，以降低平板上菌落密度，便于菌落計數(shù)與分離。稀釋涂布時所用的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，制備平板培養(yǎng)基時除了需要水、營養(yǎng)物質(zhì)外，還必須添加瓊脂等物質(zhì)作為凝固劑。(3)利用連續(xù)劃線法接種時，越在最后劃線區(qū)域，菌落的密度越小，越容易獲得單菌落，所以，圖中③區(qū)域更易獲得單菌落。(4)根據(jù)表中6號比色管中苯酚濃度為1mg/L可以推知，1～5號比色管的苯酚濃度應(yīng)分別為0mg/L、0.2mg/L、0.4mg/L、0.6mg/L、0.8mg/L。根據(jù)題意，廢水為50mg/L苯酚溶液，降解后約有21%的苯酚殘留，要使稀釋后的苯酚殘留液濃度介于0～1mg/L之間，需將殘留液稀釋20倍左右，再進(jìn)行比色?！敬鸢浮?1)蛋白胨、苯酚(2)增加稀釋涂布凝固劑(3)③(4)0、0.2、0.4、0.6、0.8③2.【解題思路】（1）在糖化階段添加酶制劑需要控制反應(yīng)溫度，原因是酶在最適溫度條件下催化能力最強(qiáng)。（2）通氣階段可促進(jìn)酵母菌的有氧呼吸，為酵母菌的繁殖提供能量，從而增加酵母菌數(shù)量。（3)①據(jù)圖分析,與顛倒前相比,B層醋酸杄菌在顛倒后密度變化的特點是先快速增長后趨于穩(wěn)定。B層顛倒后,B層醋酸桿菌獲得的氧氣較為充足,環(huán)境中的營養(yǎng)物質(zhì)和pH也會影響酉酸桿菌的種群密度。②乳酸菌為厭氧菌,顛倒前的B層和顛倒后的A層醋醅有利于乳酸菌的繁殖。③發(fā)酵后期營養(yǎng)物質(zhì)消耗等環(huán)境因素的變化,加劇了不同種類乳酸菌的競爭,淘汰了部分乳酸菌種類,使成熟酯醅中乳酸菌的種類明顯減少?！敬鸢浮浚?）在最適溫度條件下催化能力最強(qiáng)（2）酵母菌（3）①先快速增長后趨于穩(wěn)定氧氣、營養(yǎng)物質(zhì)、PH②顛倒前的B層或顛倒后的A③種間競爭（或競爭）3．【解題思路】本題考查了培養(yǎng)基、微生物的培養(yǎng)和純化、提取胡蘿卜素以及果酒制作方面的知識，要求考生能夠識記微生物培養(yǎng)基的成分、功能，識記微生物純化的方法，以及果酒制作的原理，難度不大，但要注意梳理所學(xué)知識。微生物培養(yǎng)基的成分一般均含有碳源、氮源、無機(jī)鹽、水等；萃取的效率主要取決于萃取劑的性質(zhì)和使用量，同時還受到原料顆粒的大小、緊密程度、含水量、萃取的溫度和時間等條件的影響；萃取液濃縮前需進(jìn)行過濾，以除去萃取液中的不溶物。（1）培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基中一般都含有碳源、氮源、水、無機(jī)鹽等營養(yǎng)成分；液體培養(yǎng)基可用于大量培養(yǎng)微生物或工業(yè)生產(chǎn)，所以要獲得大量的酵母菌用于胡蘿卜素的提取，應(yīng)選擇液體培養(yǎng)基；采用稀釋涂布平板法篩選酵母菌A時，涂布前的操作是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋。（2）胡蘿卜素萃取過程中，萃取的效率主要取決于萃取劑的性質(zhì)和使用量；萃取過程宜采用水浴方式加熱以防止溫度過高；萃取液濃縮前需進(jìn)行過濾，其目的是除去萃取液中的不溶物。（3）在果酒制作過程中，要將溫度嚴(yán)格控制在18～25℃；在酸性條件下，重鉻酸鉀與酒精反應(yīng)呈灰綠色，所以可以用酸性重鉻酸鉀檢測酒精的產(chǎn)生與否?！敬鸢浮浚?）碳源、氮源、水、無機(jī)鹽液體將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋（2）萃取劑的性質(zhì)和使用量水浴除去萃取液中的不溶物（3）18～25酸性重鉻酸鉀4．【解題思路】農(nóng)作物秸稈中主要含大量纖維素，需要纖維素分解菌才能將其分解；鑒別纖維素分解菌常用剛果紅染色法，觀察到平板培養(yǎng)基上菌落生長處出現(xiàn)透明圈即可確認(rèn)。利用葡萄糖發(fā)酵產(chǎn)生酒精是通過酵母菌實現(xiàn)，產(chǎn)生的酒精進(jìn)一步發(fā)酵產(chǎn)生醋酸，需要好氧型醋酸菌實現(xiàn)。（1）農(nóng)作物秸稈中主要含大量纖維素，粉碎后，掩埋在土壤中被分解，顯然需要大量的纖維素分解菌的作用才能達(dá)到目的。（2）實驗室常常用剛果紅染色法鑒別纖維素分解菌。由于鑒別細(xì)菌通常是在平板的固體培養(yǎng)基表面，所以為了便于觀察纖維素分解菌形成的透明圈，一般用稀釋涂布平板法接種在這種培養(yǎng)基上，一段時間的培養(yǎng)后，在菌落生長處出現(xiàn)透明圈，即可確認(rèn)該菌落屬于纖維素分解菌。（3）纖維素水解變成葡萄糖，而酵母菌能將葡萄糖轉(zhuǎn)化為酒精，所以完成酒精發(fā)酵需要接種酵母菌。之后，再接種醋酸菌，利用醋酸菌能將酒精轉(zhuǎn)化為醋酸的原理，由于醋酸菌是好氧型菌，所以需要在發(fā)酵過程中不斷通入（無菌）空氣?！敬鸢浮浚?）纖維素分解菌（2）剛果紅染色稀釋涂布平板法透明圈（3）酵母菌不斷通入（無菌）空氣5．【解題思路】據(jù)圖分析可知，三只泡菜壇內(nèi)亞硝酸鹽的含量變化的絕對數(shù)量雖然不同，但整體變化趨勢卻基本相同，三只泡菜壇中亞硝酸鹽含量在同一時間達(dá)到最高峰，且一定時間后泡菜中的亞硝酸鹽含量明顯下降，可能與其中的微生物有關(guān)。（1）實驗中食鹽水需煮沸并冷卻后才可使用，其中煮沸是為了殺滅雜菌和排除水中的氧氣，冷卻后使用是為了防止高溫殺死乳酸菌等發(fā)酵微生物。（2）若腌制一段時間后，泡菜的口味是酸而不咸，略帶臭味，可能是由于食鹽水濃度低，雜菌多導(dǎo)致蔬菜變質(zhì)發(fā)臭，蔬菜中硝酸鹽會被微生物還原為亞硝酸鹽導(dǎo)致亞硝酸鹽含量高，對應(yīng)圖中的曲線1。（3）在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后，與N1萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料；用不同濃度亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液和顯