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第第頁16.(13分)金黃色葡萄球菌(Sa)可引起肺炎等疾病，不規(guī)范使用抗生素易出現(xiàn)多重抗藥性Sa。為驗證Sa對頭孢霉素的抗性與R基因有關(guān)，進行以下實驗。注：①Y是可被脫水四環(huán)素(不作為抗生素起作用)誘導表達的Sa致死基因：②1kb=1000個堿基對。(1)為獲得R基因的上游、下游兩個片段，設(shè)計了如圖所示的兩組引物分別進行PCR擴增，在每種引物的端應添加相應的限制酶識別序列，其中使用引物組合可擴增得到含R基因和上游片段的DNA，使用另一組引物可擴增得到含R基因和下游片段的DNA。對兩次PCR的產(chǎn)物均用進行酶切，回收上、下游片段，與用SacⅡ酶切質(zhì)粒1所得大片段通過酶連接，最終可以獲得質(zhì)粒2。(2)將質(zhì)粒2與用一定濃度的處理過的具有頭孢霉素抗性、對氯霉素敏感的Sa混合，一段時間后涂布在含的平板上，經(jīng)培養(yǎng)獲得含質(zhì)粒2的Sa單菌落(S1)。(3)質(zhì)粒2與Sa的基因組發(fā)生同源重組，可敲除R基因。將S1多次傳代以增加同源重組敲除R基因的幾率，隨后稀釋涂布在含的平板上，篩選并獲得不再含有質(zhì)粒2的菌落。從這些菌落分別挑取少許菌體，依次接種到含的平板上，若無法增殖，則對應菌落(S2)中細菌的R基因可能被敲除。(4)以S2菌株基因組為模板，分別用引物組合A(引物1+引物4)、B(引物2+引物3、C(引物1+引物3)、D(引物2+引物4)進行PCR,再用技術(shù)鑒定。若僅擴增出長度為的DNA片

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