2025年艾梅乙技能操作考試試題及答案一、樣本采集與處理操作試題1.患者需同時進(jìn)行HIV抗體、梅毒螺旋體抗體及乙肝表面抗原（HBsAg）檢測，若僅能采集3ml靜脈血，需如何選擇抗凝管并完成樣本處理？請簡述操作步驟及各步驟的關(guān)鍵注意事項(xiàng)?！敬鸢浮浚?）抗凝管選擇：因三項(xiàng)檢測均需血清或血漿（HIV抗體、梅毒抗體檢測常用血清，HBsAg檢測血清/血漿均可），優(yōu)先選擇無抗凝劑的普通促凝管（紅色頭蓋），采集3ml全血，離心后分離血清。若僅能使用抗凝管，可選EDTA-K2抗凝管（紫色頭蓋），但需注意EDTA可能影響部分檢測系統(tǒng)，需確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室SOP。（2）處理步驟及關(guān)鍵注意事項(xiàng)：①采血：嚴(yán)格無菌操作，扎止血帶時間≤1分鐘，避免溶血；采血后顛倒抗凝管（若使用）5-8次，促凝管輕放避免震蕩。②離心：普通促凝管室溫靜置30分鐘待血液凝固，1500-2000g離心10分鐘；EDTA抗凝管可直接離心（2000-3000g，10分鐘）。離心后觀察血清/血漿狀態(tài)（無溶血、脂血、黃疸），若溶血需備注，因溶血可能導(dǎo)致HIV抗體檢測假陽性（血紅蛋白干擾）。③分樣：用移液器吸取上層清液，分裝至3個標(biāo)記清晰的螺口樣本管（標(biāo)記內(nèi)容：姓名、ID號、檢測項(xiàng)目、采集時間），每管保留≥0.5ml（滿足復(fù)檢需求）。剩余樣本按實(shí)驗(yàn)室要求保存（2-8℃保存7天，-20℃長期保存）。2.某樣本采集后因交通延誤，2小時內(nèi)未送達(dá)實(shí)驗(yàn)室，室溫放置4小時后才離心檢測?？赡軐δ男z測項(xiàng)目結(jié)果產(chǎn)生影響？需如何處理？【答案】（1）影響分析：①HIV抗體：室溫放置4小時對抗體穩(wěn)定性影響較?。↖gG抗體在室溫可穩(wěn)定72小時），但需確認(rèn)檢測方法是否對樣本保存時間有特殊要求（如部分快速檢測試劑要求樣本采集后2小時內(nèi)檢測）。②梅毒抗體（非特異性抗體如RPR）：室溫放置可能導(dǎo)致血清中反應(yīng)素（類脂質(zhì)抗體）活性下降，RPR試驗(yàn)可能出現(xiàn)假陰性或滴度降低；特異性抗體（TPPA/TP-ELISA）穩(wěn)定性較好。③HBsAg：HBsAg在血清中室溫可穩(wěn)定7天，影響較小，但需注意樣本若被細(xì)菌污染（長時間室溫）可能導(dǎo)致假陽性（細(xì)菌蛋白干擾）。（2）處理措施：①記錄樣本延遲情況，備注“樣本采集后4小時未離心”；②檢測前觀察樣本是否有渾濁、凝塊，若有需重新離心或過濾；③對梅毒非特異性抗體（RPR）檢測，建議同時用特異性抗體（如化學(xué)發(fā)光法）復(fù)核；④若檢測結(jié)果為臨界值或可疑，需用原樣本重新檢測或采集新樣本復(fù)檢。二、檢測前準(zhǔn)備與設(shè)備操作試題3.實(shí)驗(yàn)室使用化學(xué)發(fā)光法檢測HIV抗體、梅毒螺旋體抗體（TpAb）及HBsAg，檢測前需完成哪些設(shè)備與試劑的準(zhǔn)備工作？請列出具體檢查項(xiàng)目及標(biāo)準(zhǔn)。【答案】（1）設(shè)備檢查：①化學(xué)發(fā)光儀：開機(jī)預(yù)熱（按說明書要求，通常30分鐘），檢查儀器狀態(tài)（顯示屏無故障提示）、管路是否通暢（試劑針、樣本針無堵塞）、清洗液（去離子水或?qū)Ｓ们逑匆海┮何弧?/3，廢液桶≤2/3。②加樣設(shè)備：單道/多道移液器（10μl、100μl、1000μl）校準(zhǔn)狀態(tài)（有效期內(nèi)，標(biāo)記清晰），吸頭與移液器匹配（無漏液），電動移液槍電量≥50%。③恒溫設(shè)備（若有）：孵育箱溫度（37℃±0.5℃）校準(zhǔn)，溫度計(jì)定期驗(yàn)證（每周一次）。（2）試劑準(zhǔn)備：①試劑外觀：檢查HIV、梅毒、乙肝檢測試劑的有效期（剩余有效期≥1個月）、包裝完整性（無破損、漏液）、液體試劑無沉淀/分層（若有需輕輕混勻，避免氣泡）。②試劑參數(shù)：在儀器軟件中核對試劑批號、校準(zhǔn)品/質(zhì)控品批號與實(shí)際一致，確保儀器已加載當(dāng)前批號的定標(biāo)曲線（若為即用型試劑，確認(rèn)定標(biāo)有效期）。③校準(zhǔn)品與質(zhì)控品：取出冷藏的質(zhì)控品（弱陽、陰性），室溫平衡30分鐘（避免冷凝水影響加樣量），漩渦振蕩10秒后離心5秒（去除氣泡）；校準(zhǔn)品按說明書要求復(fù)溶（若為凍干品），記錄復(fù)溶時間。4.操作生物安全柜時，以下哪些行為不符合規(guī)范？請指出錯誤并說明正確操作：（1）將實(shí)驗(yàn)記錄本放入安全柜內(nèi)，與樣本同一水平面；（2）操作過程中頻繁開關(guān)安全柜玻璃門，高度超過20cm；（3）使用后的移液器直接放在安全柜臺面，未消毒；（4）檢測結(jié)束后，用75%酒精擦拭臺面，關(guān)閉風(fēng)機(jī)立即離開?！敬鸢浮浚?）錯誤：實(shí)驗(yàn)記錄本與樣本同一水平面可能導(dǎo)致交叉污染。正確操作：記錄本應(yīng)放在安全柜外或柜內(nèi)邊緣（高于樣本區(qū)），避免與樣本、試劑接觸。（2）錯誤：頻繁開關(guān)玻璃門或高度超過20cm會破壞安全柜氣流平衡，增加氣溶膠暴露風(fēng)險。正確操作：玻璃門開啟高度應(yīng)≤18cm（按設(shè)備說明書），操作時保持穩(wěn)定，避免手臂頻繁進(jìn)出。（3）錯誤：使用后的移液器未消毒可能殘留病原體，污染后續(xù)操作。正確操作：移液器使用后需用75%酒精擦拭槍身（重點(diǎn)是下半部分），若接觸過陽性樣本，需用含氯消毒液（500mg/L）擦拭，再用酒精脫氯。（4）錯誤：關(guān)閉風(fēng)機(jī)后立即離開，未完成安全柜自凈。正確操作：檢測結(jié)束后，用75%酒精擦拭臺面（由內(nèi)向外），開啟紫外燈照射30分鐘，關(guān)閉紫外燈后保持風(fēng)機(jī)運(yùn)行15分鐘（完成空氣凈化），最后關(guān)閉電源。三、檢測操作流程試題5.以HIV抗體快速檢測（膠體金法）為例，簡述從加樣到結(jié)果判讀的完整操作步驟，并列出易導(dǎo)致假陽性/假陰性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。【答案】（1）操作步驟：①樣本準(zhǔn)備：血清/血漿樣本室溫平衡（20-25℃），若為全血需確認(rèn)采血管類型（專用快速檢測采血管），輕輕顛倒混勻。②加樣：用移液器吸取100μl樣本（或按試劑說明書要求體積），垂直滴加至檢測卡加樣孔（避免氣泡，滴加時間≤5秒）。③孵育：將檢測卡水平放置，避免移動，室溫孵育15-20分鐘（嚴(yán)格按說明書時間，超時可能出現(xiàn)非特異性條帶）。④判讀：在白色背景下觀察結(jié)果，C線（質(zhì)控線）必須顯色，否則實(shí)驗(yàn)無效；T線（檢測線）顯色為陽性，無顯色為陰性。（2）易導(dǎo)致假陽性的環(huán)節(jié)：①樣本溶血（血紅蛋白與膠體金顆粒非特異性結(jié)合）；②加樣量過多（超過加樣孔容量，液體溢出污染檢測區(qū)）；③孵育時間過長（超過30分鐘，環(huán)境中的蛋白質(zhì)吸附到檢測線）；④試劑保存不當(dāng)（受潮或高溫導(dǎo)致金標(biāo)抗體變性）。（3）易導(dǎo)致假陰性的環(huán)節(jié)：①樣本量不足（<80μl，無法到達(dá)檢測線）；②窗口期樣本（感染后2-4周，抗體未產(chǎn)生）；③樣本冷藏后未復(fù)溫（低溫導(dǎo)致血清粘稠，擴(kuò)散速度減慢）；④檢測卡過期（金標(biāo)抗體活性下降）。6.某實(shí)驗(yàn)室使用ELISA法檢測HBsAg，實(shí)驗(yàn)流程中“洗板”步驟操作如下：（1）棄去孔內(nèi)液體，用洗板機(jī)注入洗滌液（0.01mol/LPBS-T，pH7.4），每孔350μl；（2）浸泡30秒后棄液，重復(fù)洗滌5次；（3）最后一次洗滌后，將板倒扣在吸水紙上，用力拍干。請指出操作中的錯誤及可能導(dǎo)致的后果?！敬鸢浮浚?）錯誤1：洗滌液選擇可能不當(dāng)。后果：若檢測系統(tǒng)要求專用洗滌液（含特定離子濃度或添加劑），使用自制PBS-T可能導(dǎo)致包被抗體脫落或酶結(jié)合物非特異性吸附，出現(xiàn)假陽性/假陰性。（2）錯誤2：浸泡時間僅30秒（標(biāo)準(zhǔn)通常為1-2分鐘）。后果：未充分洗脫未結(jié)合的酶結(jié)合物，殘留的酶標(biāo)記物與底物反應(yīng)，導(dǎo)致吸光度值偏高（假陽性）。（3）錯誤3：最后一次拍干時用力過猛。后果：可能導(dǎo)致孔內(nèi)殘留的洗滌液濺出污染相鄰孔，或使包被的抗原/抗體脫落，影響檢測結(jié)果的一致性。四、結(jié)果判讀與報告處理試題7.某患者HIV抗體初篩（化學(xué)發(fā)光法）結(jié)果為S/CO=1.2（臨界值1.0），梅毒TpAb（化學(xué)發(fā)光法）S/CO=0.8（臨界值1.0），HBsAg（ELISA）OD=0.15（Cut-off=0.10）。請分析各項(xiàng)目結(jié)果意義，并說明后續(xù)處理流程?！敬鸢浮浚?）結(jié)果分析：①HIV抗體：S/CO=1.2（>1.0），為初篩陽性（需注意化學(xué)發(fā)光法的灰區(qū)范圍，若實(shí)驗(yàn)室設(shè)定灰區(qū)為1.0-1.5，需復(fù)核）。②梅毒TpAb：S/CO=0.8（<1.0），為陰性（若患者有高危行為，需結(jié)合非特異性抗體如RPR結(jié)果，若RPR陽性需考慮窗口期）。③HBsAg：OD=0.15（>0.10），為陽性（需確認(rèn)Cut-off計(jì)算方式，若為CO=0.10+0.05×陰性對照均值，需復(fù)核陰性對照是否符合要求）。（2）后續(xù)處理流程：①HIV抗體：-復(fù)核：用原樣本重新檢測同一方法（若仍≥1.0）或換用另一種原理試劑（如快速檢測）；-若復(fù)核陽性，需送確證實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行HIV抗體確證試驗(yàn)（WB法或核酸檢測）；-記錄初篩陽性結(jié)果，通知臨床醫(yī)生并建議患者隨訪（若處于窗口期）。②梅毒TpAb：-若患者無臨床癥狀，且RPR陰性，報告“梅毒螺旋體抗體陰性”；-若患者有高危行為或RPR陽性（需補(bǔ)做RPR試驗(yàn)），考慮窗口期（感染后2-4周TpAb未產(chǎn)生），建議2-4周后復(fù)檢。③HBsAg：-復(fù)核：用原樣本重新檢測（若仍陽性），確認(rèn)是否為“低水平陽性”；-建議檢測HBVDNA（定量）及肝功能，評估病毒載量；-報告“乙肝表面抗原陽性”，并備注“建議結(jié)合HBVDNA及臨床癥狀綜合判斷”。8.實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)某樣本HIV抗體快速檢測結(jié)果為“C線顯色，T線隱約可見”，判讀為“陽性”；但化學(xué)發(fā)光法檢測S/CO=0.9（臨界值1.0）。如何解釋這種差異？需采取哪些措施？【答案】（1）差異原因分析：①快速檢測（膠體金法）的靈敏度通常高于化學(xué)發(fā)光法（部分快速檢測的最低檢測限為2-5IU/ml，化學(xué)發(fā)光法為1-3IU/ml），但特異性較低（易受非特異性干擾）；②樣本可能處于窗口期（HIV抗體濃度接近檢測下限），快速檢測因靈敏度高顯示陽性，化學(xué)發(fā)光法因未達(dá)到其檢測閾值顯示陰性；③快速檢測的T線“隱約可見”可能為灰區(qū)結(jié)果（需結(jié)合顯色強(qiáng)度判斷），存在假陽性風(fēng)險（如樣本中有類風(fēng)濕因子、異嗜性抗體）。（2）處理措施：①重新采集樣本（避免第一次采樣的誤差），同時檢測快速法、化學(xué)發(fā)光法及HIV核酸（RNA）檢測；②若核酸檢測陽性，確認(rèn)HIV感染（窗口期）；③若核酸陰性，且重復(fù)化學(xué)發(fā)光法S/CO仍<1.0，考慮快速檢測假陽性（可能因樣本干擾），報告“HIV抗體陰性（快速法灰區(qū)，化學(xué)發(fā)光法陰性，核酸陰性）”；④記錄差異原因，分析可能的干擾因素（如樣本類型、保存條件），優(yōu)化實(shí)驗(yàn)室SOP（如快速法灰區(qū)結(jié)果需用兩種不同原理試劑復(fù)核）。五、生物安全與質(zhì)量控制試題9.檢測過程中發(fā)生以下意外，應(yīng)如何處理？（1）加樣時移液器吸頭脫落，HIV陽性樣本濺到實(shí)驗(yàn)服袖口；（2）離心時試管破裂，梅毒陽性血清泄漏至離心機(jī)內(nèi)腔；（3）檢測結(jié)束后，發(fā)現(xiàn)HBsAg陽性樣本未按感染性廢物處理，已混入普通垃圾。【答案】（1）樣本濺到實(shí)驗(yàn)服處理：①立即停止操作，用吸水紙吸去可見液體；②用含氯消毒液（2000mg/L）擦拭污染區(qū)域（作用15分鐘），再用75%酒精脫氯；③更換污染的實(shí)驗(yàn)服，若皮膚接觸（如袖口破損），用肥皂水沖洗15分鐘，擠出血液（若有傷口），涂抹碘伏，報告實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人并登記職業(yè)暴露；④記錄事件經(jīng)過、處理措施及暴露者信息（后續(xù)進(jìn)行HIV、HBV、梅毒檢測隨訪）。（2）離心管破裂處理：①關(guān)閉離心機(jī)電源，靜置30分鐘（讓氣溶膠沉降）；②戴雙層手套、護(hù)目鏡，用鑷子取出破碎管（放入銳器盒），用吸水紙覆蓋泄漏區(qū)，傾倒含氯消毒液（2000mg/L）至完全濕潤，作用30分鐘；③用新的吸水紙包裹污染物（放入感染性廢物袋），用75%酒精擦拭離心機(jī)內(nèi)腔（重點(diǎn)是轉(zhuǎn)頭、內(nèi)壁），開啟離心機(jī)空轉(zhuǎn)5分鐘（排出殘留氣溶膠）；④記錄離心機(jī)編號、污染時間、處理人，標(biāo)記該離心機(jī)“暫停使用”直至清潔驗(yàn)證。（3）陽性樣本混入普通垃圾處理：①立即聯(lián)系保潔人員，說明情況并暫停垃圾轉(zhuǎn)運(yùn)；②戴手套、口罩，從普通垃圾中找出樣本管（若已破損，按泄漏處理）；③確認(rèn)樣本管完整后，放入雙層黃色感染性廢物袋（標(biāo)注“陽性樣本”），用膠帶密封；④若樣本管破損，用含氯消毒液（2000mg/L）噴灑污染的垃圾，作用30分鐘后整體裝入感染性廢物袋；⑤記錄事件責(zé)任人、處理過程，對實(shí)驗(yàn)室人員進(jìn)行生物安全培訓(xùn)（強(qiáng)調(diào)廢物分類的重要性）。10.實(shí)驗(yàn)室需進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制（IQC），請?jiān)O(shè)計(jì)HIV抗體化學(xué)發(fā)光法的IQC方案，包括質(zhì)控品選擇、檢測頻率、失控處理流程及記錄要求。【答案】（1）質(zhì)控品選擇：-至少2個水平（弱陽：S/CO≈1.5-2.0；陰性：S/CO<0.5），需與檢測樣本基質(zhì)一致（血清/血漿），有效期覆蓋檢測周期。（2）檢測頻率：-每批次檢測（包括急診樣本）必須檢測質(zhì)控品；-若一天內(nèi)檢測多批，每批開始時檢測一次；-新開瓶的試劑或更換定標(biāo)曲線后，需額外檢測質(zhì)控品。（3）失控處理流程：①立即停止檢測，檢查質(zhì)控品是否在有效期內(nèi)、