TGF-β1表達：解析不同血糖濃度伴白內障患者眼LECs的關聯(lián)與機制一、引言1.1研究背景與意義白內障作為全球范圍內導致視力障礙和失明的主要原因之一，給患者的生活質量帶來了嚴重影響，也給社會和家庭帶來了沉重負擔。隨著全球老齡化進程的加速，白內障的發(fā)病率呈現(xiàn)出明顯的上升趨勢。據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）統(tǒng)計，全球約有2000萬人因白內障而失明，而在60歲以上的人群中，白內障的患病率更是高達70%以上，已然成為老年人失明的首要原因。白內障的發(fā)病機制較為復雜，涉及氧化應激、蛋白質變性、細胞凋亡等多個方面。近年來，越來越多的研究表明，血糖代謝紊亂與白內障的發(fā)生發(fā)展密切相關。糖尿病作為一種常見的代謝性疾病，其患者患白內障的風險顯著增加，且發(fā)病年齡更早、病情進展更快。這主要是因為高血糖狀態(tài)下，晶狀體中的葡萄糖代謝異常，多元醇通路被激活，導致山梨醇在晶狀體內大量積聚，引起晶狀體滲透壓升高、水分內流，進而導致晶狀體混濁。此外，高血糖還會引發(fā)氧化應激反應，損傷晶狀體上皮細胞（LECs）的結構和功能，加速白內障的形成。除了糖尿病，空腹血糖調節(jié)受損（IFG）等血糖異常狀態(tài)也與白內障的發(fā)生風險增加相關。IFG是指空腹血糖水平高于正常范圍，但尚未達到糖尿病的診斷標準。研究發(fā)現(xiàn)，處于IFG階段的人群，其晶狀體的代謝已經(jīng)開始出現(xiàn)異常，LECs的功能也受到一定程度的影響，這可能為白內障的發(fā)生埋下隱患。轉化生長因子-β1（TGF-β1）作為一種多功能的細胞因子，在細胞生長、分化、凋亡以及細胞外基質合成等過程中發(fā)揮著關鍵作用。在眼部，TGF-β1參與了晶狀體的發(fā)育和維持晶狀體的正常生理功能。已有研究表明，TGF-β1信號通路的異常與多種眼部疾病的發(fā)生發(fā)展相關，包括青光眼、視網(wǎng)膜病變等。在白內障的研究中，TGF-β1也逐漸成為關注的焦點。有研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β1在糖尿病性白內障患者的晶狀體中表達上調，且其表達水平與晶狀體混濁程度呈正相關。然而，目前關于TGF-β1在不同血糖濃度伴白內障患者眼LECs中的表達情況及其具體作用機制仍不完全清楚。深入研究TGF-β1在不同血糖濃度伴白內障患者眼LECs中的表達及意義，具有重要的理論和臨床價值。從理論層面來看，有助于進一步揭示血糖代謝紊亂與白內障發(fā)生發(fā)展之間的內在聯(lián)系，完善白內障的發(fā)病機制理論體系。從臨床應用角度而言，有望為白內障的早期診斷、病情評估和治療提供新的靶點和策略。通過監(jiān)測TGF-β1的表達水平，或許可以實現(xiàn)對白內障高危人群的早期篩查和干預，延緩白內障的發(fā)生發(fā)展，提高患者的視力和生活質量。1.2國內外研究現(xiàn)狀在白內障的研究領域，國內外學者圍繞TGF-β1、血糖與白內障之間的關系，以及TGF-β1在眼LECs中的作用機制開展了大量研究，取得了一系列有價值的成果，但仍存在一些有待進一步探索的問題。在血糖與白內障關系的研究方面，國外早在20世紀就有研究指出糖尿病與白內障的關聯(lián)。一項美國的大規(guī)模流行病學調查研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病患者患白內障的風險是正常人的2-5倍，且白內障的發(fā)病年齡提前，病情進展速度加快。國內的研究也進一步證實了這一觀點，如國內學者通過對大量糖尿病患者和非糖尿病患者的長期隨訪觀察，發(fā)現(xiàn)糖尿病患者的晶狀體混濁程度明顯高于非糖尿病患者，且血糖控制不佳的患者白內障發(fā)生率更高。此外，對于空腹血糖調節(jié)受損（IFG）與白內障的關系，近年來也受到了廣泛關注。國外有研究表明，IFG人群的晶狀體代謝已經(jīng)出現(xiàn)異常，其患白內障的風險較正常血糖人群有所增加。國內的相關研究也發(fā)現(xiàn)，IFG狀態(tài)下，晶狀體上皮細胞的功能和結構開始發(fā)生改變，可能是白內障發(fā)生的早期危險因素。在TGF-β1與白內障關系的研究中，國外研究率先揭示了TGF-β1在晶狀體發(fā)育和維持中的重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β1基因敲除的小鼠晶狀體發(fā)育異常，出現(xiàn)混濁等類似白內障的表現(xiàn)。國內學者進一步深入研究TGF-β1在不同類型白內障中的表達變化。有研究通過對年齡相關性白內障、糖尿病性白內障患者晶狀體上皮細胞的檢測，發(fā)現(xiàn)TGF-β1在糖尿病性白內障患者的晶狀體上皮細胞中表達明顯上調，且其表達水平與晶狀體混濁程度呈正相關。這表明TGF-β1可能在糖尿病性白內障的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。關于TGF-β1在眼LECs中的作用機制，國外研究初步揭示了TGF-β1通過激活下游的Smad信號通路，調節(jié)細胞外基質的合成和降解，影響晶狀體上皮細胞的增殖、分化和凋亡。例如，TGF-β1可以誘導晶狀體上皮細胞合成纖維連接蛋白、膠原蛋白等細胞外基質成分，導致細胞外基質過度積聚，從而影響晶狀體的透明度。國內研究則從氧化應激、炎癥反應等多個角度探討了TGF-β1的作用機制。研究發(fā)現(xiàn)，高血糖狀態(tài)下，TGF-β1的表達上調，進而引發(fā)氧化應激反應，導致晶狀體上皮細胞內活性氧（ROS）水平升高，損傷細胞的結構和功能，促進白內障的形成。此外，TGF-β1還可以通過調節(jié)炎癥因子的表達，引發(fā)晶狀體局部的炎癥反應，破壞晶狀體的正常生理環(huán)境，加速白內障的發(fā)展。盡管國內外在該領域取得了一定的研究成果，但仍存在一些不足之處。目前對于不同血糖濃度，尤其是處于臨界狀態(tài)血糖水平伴白內障患者眼LECs中TGF-β1的表達研究還相對較少，缺乏系統(tǒng)的分析和比較。在作用機制方面，雖然已經(jīng)明確了TGF-β1參與白內障發(fā)生發(fā)展的一些關鍵信號通路，但各通路之間的相互作用以及在不同血糖環(huán)境下的調控機制仍有待深入研究。此外，目前的研究大多集中在細胞和動物實驗層面，臨床應用研究相對滯后，如何將基礎研究成果轉化為有效的臨床診斷和治療方法，還需要進一步的探索和實踐。1.3研究目的與方法本研究旨在深入探究TGF-β1在不同血糖濃度伴白內障患者眼LECs中的表達情況，明確高血糖對TGF-β1表達和晶狀體變化的影響，進而揭示TGF-β1在白內障發(fā)生和發(fā)展過程中的作用。在研究過程中，選取60例白內障患者作為研究對象，其中30例為高血糖患者，30例為正常血糖患者。對所有患者進行全面的眼底檢查、眼壓測量、裂隙燈檢查以及臨床檢查等，以確診為白內障并進行手術治療。在手術中，精心獲取白內障晶狀體成分，從中提取LECs用于后續(xù)實驗。實驗方法主要包括以下幾個關鍵步驟：首先進行眼球玻璃體取樣，在手術中取出患者的玻璃體標本，運用先進的檢測技術進行TGF-β1濃度檢測；將LECs進行體外培養(yǎng)，在不同的血糖濃度下進行培養(yǎng)，從而獲得不同處理組的LECs，模擬不同血糖環(huán)境對LECs的影響；使用Trizol試劑從不同組織中提取總RNA，經(jīng)逆轉錄反應得到cDNA，為后續(xù)的基因表達分析提供基礎；采用SYBRGreen法進行實時熒光定量PCR，精確分析不同組織TGF-β1mRNA的表達量，以量化TGF-β1在不同血糖濃度下的表達差異；利用免疫熒光染色技術，直觀地檢測不同組織中TGF-β1的蛋白質表達及其分布情況，從蛋白質層面進一步揭示TGF-β1的作用機制。二、相關理論基礎2.1白內障概述白內障是一種常見的眼科疾病，其定義為晶狀體混濁導致視力下降。晶狀體作為眼睛的重要屈光介質，正常情況下是透明的，能夠使光線順利聚焦在視網(wǎng)膜上，從而形成清晰的視覺圖像。然而，當晶狀體由于各種原因發(fā)生混濁時，光線的透過率受到影響，無法在視網(wǎng)膜上清晰成像，進而導致視力模糊、下降等癥狀，這便是白內障的主要病理特征。白內障的類型豐富多樣，根據(jù)病因可分為老年性白內障、外傷性白內障、并發(fā)性白內障、代謝性白內障、中毒性白內障、輻射性白內障、發(fā)育性白內障和后發(fā)性白內障等。其中，老年性白內障最為常見，多與年齡增長密切相關，是晶狀體老化后的退行性改變，常由多種因素綜合作用所致。隨著年齡的增加，晶狀體中的蛋白質逐漸發(fā)生變性、聚集，晶狀體的結構和代謝功能出現(xiàn)異常，從而導致晶狀體混濁。研究數(shù)據(jù)顯示，50歲以上的中老年人是老年性白內障的高發(fā)人群，在50歲以下人群中，白內障患病率較低，大約為1-2%；而到了70歲以上，患病率可高達60-70%左右。除年齡因素外，職業(yè)、性別、紫外線、高血壓和營養(yǎng)不良等，也都可能誘發(fā)白內障。外傷性白內障則是由于眼部受到外傷，如眼球穿通傷、鈍挫傷等，導致晶狀體囊膜破裂，房水進入晶狀體，引起晶狀體混濁。并發(fā)性白內障常繼發(fā)于其他眼部疾病，如葡萄膜炎、青光眼、視網(wǎng)膜脫離等，這些疾病會影響晶狀體的營養(yǎng)供應和代謝環(huán)境，進而導致晶狀體混濁。代謝性白內障多與體內代謝紊亂有關，如糖尿病性白內障，是由于血糖增高，造成眼內房水滲透壓的改變，使得晶狀體纖維腫脹、變性，最終導致白內障的發(fā)生。我國60%以上的糖尿病患者都存在不同程度的晶狀體渾濁的情況，糖尿病人群患白內障的概率是無糖尿病人群的4-5倍，發(fā)病年齡較年齡相關白內障提前20年左右。白內障對患者，尤其是老年人的視力和生活質量產(chǎn)生嚴重影響。視力下降使得老年人在日常生活中的活動受到諸多限制，如行走、閱讀、購物等，增加了跌倒、碰撞等意外事故的發(fā)生風險，嚴重影響了他們的生活自理能力和獨立性。視力障礙還會對老年人的心理健康造成負面影響，導致他們產(chǎn)生焦慮、抑郁等情緒，降低生活幸福感。由于白內障在老年人群中的高發(fā)病率，其不僅給患者個人帶來痛苦，也給家庭和社會帶來了沉重的醫(yī)療負擔和照料壓力。因此，深入研究白內障的發(fā)病機制，尋找有效的預防和治療方法具有重要的現(xiàn)實意義。2.2血糖濃度與白內障的關系血糖濃度與白內障的發(fā)生發(fā)展之間存在著緊密而復雜的聯(lián)系，這一關系已在眾多研究中得到證實。正常情況下，晶狀體能夠通過自身的代謝系統(tǒng)維持其透明性和正常功能，確保光線順利透過并聚焦在視網(wǎng)膜上，從而形成清晰的視覺。然而，當血糖濃度出現(xiàn)異常，尤其是長期處于高血糖狀態(tài)時，會對晶狀體的代謝和結構產(chǎn)生顯著影響，進而引發(fā)白內障。高血糖狀態(tài)下，晶狀體中的葡萄糖代謝會發(fā)生明顯異常。正常的己糖激酶途徑在高血糖環(huán)境下趨于飽和，而多元醇通路則被異常激活。在多元醇通路中，葡萄糖在醛糖還原酶的催化作用下大量轉化為山梨醇。由于山梨醇不易透過細胞膜，會在晶狀體內大量積聚。這使得晶狀體的滲透壓急劇升高，如同一個吸水的海綿，吸引大量水分進入晶狀體，導致晶狀體纖維腫脹、變性。隨著時間的推移，晶狀體纖維的結構和排列逐漸紊亂，蛋白質發(fā)生變性、聚集，最終導致晶狀體混濁，白內障由此發(fā)生。有研究通過對糖尿病患者的長期隨訪觀察發(fā)現(xiàn)，血糖控制不佳的患者，其晶狀體混濁程度明顯高于血糖控制良好的患者，且白內障的發(fā)病時間更早，病情進展更快。高血糖還會引發(fā)氧化應激反應，對晶狀體上皮細胞（LECs）造成嚴重損傷。正常情況下，晶狀體上皮細胞內存在著一套完整的抗氧化防御系統(tǒng)，能夠維持細胞內氧化與抗氧化的平衡，保護細胞免受氧化損傷。然而，在高血糖環(huán)境下，過多的葡萄糖會通過非酶糖基化反應生成大量的晚期糖基化終末產(chǎn)物（AGEs）。這些AGEs不僅會直接損傷晶狀體蛋白質和細胞膜，還會誘導細胞內活性氧（ROS）的大量產(chǎn)生。ROS具有極強的氧化活性，會攻擊細胞內的脂質、蛋白質和核酸等生物大分子，導致細胞膜脂質過氧化，破壞蛋白質的結構和功能，損傷DNA，從而影響晶狀體上皮細胞的正常代謝、增殖和分化。當氧化應激超過細胞的抗氧化能力時，晶狀體上皮細胞會發(fā)生凋亡。晶狀體上皮細胞的凋亡會破壞晶狀體的正常結構和功能，加速晶狀體混濁的進程。研究表明，在高血糖誘導的白內障動物模型中，晶狀體上皮細胞內的ROS水平顯著升高，抗氧化酶活性降低，細胞凋亡率明顯增加?？崭寡钦{節(jié)受損（IFG）作為一種血糖異常狀態(tài)，雖然尚未達到糖尿病的診斷標準，但也與白內障的發(fā)生風險增加密切相關。處于IFG階段時，機體的血糖代謝已經(jīng)出現(xiàn)一定程度的紊亂，這會對晶狀體的代謝和功能產(chǎn)生潛在影響。有研究對IFG人群進行了晶狀體相關指標的檢測，發(fā)現(xiàn)其晶狀體的透明度已經(jīng)開始下降，晶狀體上皮細胞的功能也出現(xiàn)了一些異常改變。這些變化可能是IFG人群患白內障風險增加的重要原因。IFG狀態(tài)下，晶狀體上皮細胞對氧化應激的敏感性可能增加，細胞內的抗氧化防御系統(tǒng)可能受到一定程度的抑制，使得細胞更容易受到損傷。此外，IFG還可能影響晶狀體的營養(yǎng)供應和代謝環(huán)境，進一步促進白內障的發(fā)生發(fā)展。2.3TGF-β1的生物學特性及功能轉化生長因子-β1（TGF-β1）是轉化生長因子-β（TGF-β）超家族中最為重要的成員之一，在細胞的生長、分化、凋亡以及細胞外基質合成等諸多生物學過程中發(fā)揮著關鍵而復雜的調節(jié)作用。TGF-β1基因位于人類染色體19q13.1，由7個外顯子和6個內含子組成。其編碼的TGF-β1前體蛋白包含390個氨基酸殘基，在合成后需經(jīng)過一系列復雜的加工過程，最終形成具有生物活性的成熟TGF-β1。成熟的TGF-β1是由兩條相同的多肽鏈通過二硫鍵連接而成的同源二聚體，每條鏈含有112個氨基酸殘基。這種獨特的結構賦予了TGF-β1高度的穩(wěn)定性和特異性，使其能夠精準地與相應的受體結合，進而啟動細胞內的信號轉導通路。在細胞生長與分化調節(jié)方面，TGF-β1猶如一位精準的指揮官，發(fā)揮著雙向調節(jié)的重要作用。在正常生理狀態(tài)下，TGF-β1能夠抑制大多數(shù)上皮細胞、內皮細胞以及造血細胞的增殖，將細胞周期阻滯在G1期，從而有效地抑制細胞的過度生長。當細胞受到損傷或處于應激狀態(tài)時，TGF-β1又能夠促進成纖維細胞、平滑肌細胞等的增殖，為組織修復和再生提供必要的細胞來源。在細胞分化過程中，TGF-β1同樣扮演著不可或缺的角色。在胚胎發(fā)育階段，TGF-β1能夠誘導中胚層細胞向軟骨細胞、成骨細胞等方向分化，對骨骼和肌肉的發(fā)育起著關鍵的調控作用。在造血系統(tǒng)中，TGF-β1能夠調節(jié)造血干細胞的分化方向，促進特定血細胞系的生成，維持造血系統(tǒng)的穩(wěn)定和平衡。TGF-β1在晶狀體的發(fā)育和成熟過程中也發(fā)揮著極為重要的作用。在晶狀體發(fā)育的早期階段，TGF-β1參與了晶狀體上皮細胞的增殖和分化調控，確保晶狀體能夠正常形成和發(fā)育。研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β1基因敲除的小鼠，晶狀體發(fā)育異常，出現(xiàn)晶狀體混濁等類似白內障的表現(xiàn)，這充分表明TGF-β1對晶狀體的正常發(fā)育至關重要。在晶狀體成熟過程中，TGF-β1能夠維持晶狀體上皮細胞的正常形態(tài)和功能，調節(jié)細胞外基質的合成和降解，保證晶狀體的透明度和彈性。TGF-β1可以誘導晶狀體上皮細胞合成纖維連接蛋白、膠原蛋白等細胞外基質成分，這些成分對于維持晶狀體的結構和功能具有重要意義。然而，當TGF-β1信號通路出現(xiàn)異常時，晶狀體上皮細胞的增殖、分化和凋亡平衡被打破，細胞外基質的合成和降解失調，就可能導致晶狀體混濁，進而引發(fā)白內障。三、實驗設計與方法3.1樣本選取與分組本研究樣本來自[醫(yī)院名稱]眼科就診并確診為白內障的患者。在選取樣本時，充分考慮了樣本的代表性和多樣性，以確保研究結果的可靠性和普遍性。共納入60例白內障患者，按照血糖濃度分為高血糖組和正常血糖組，每組各30例。高血糖組納入標準為：符合世界衛(wèi)生組織（WHO）制定的糖尿病診斷標準，即空腹血糖≥7.0mmol/L，或餐后2小時血糖≥11.1mmol/L，或隨機血糖≥11.1mmol/L，且伴有典型的糖尿病癥狀（多飲、多食、多尿、體重減輕）；或者已確診為糖尿病并正在接受降糖治療的患者。正常血糖組納入標準為：空腹血糖＜6.1mmol/L，餐后2小時血糖＜7.8mmol/L，且無糖尿病相關癥狀和病史。在分組過程中，嚴格遵循隨機化原則，采用隨機數(shù)字表法將患者分配至相應組別。同時，充分考慮了年齡、性別、地區(qū)等因素對實驗結果可能產(chǎn)生的影響，進行了均衡性處理。在年齡方面，兩組患者的年齡范圍均控制在50-80歲之間，高血糖組平均年齡為（65.2±5.8）歲，正常血糖組平均年齡為（64.8±6.2）歲，經(jīng)統(tǒng)計學檢驗，兩組年齡差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），確保了年齡因素不會對實驗結果產(chǎn)生干擾。在性別分布上，高血糖組男性16例，女性14例；正常血糖組男性15例，女性15例，兩組性別比例基本一致，避免了性別因素對研究結果的潛在影響。對于地區(qū)因素，盡量選取來自相同或相近地區(qū)的患者，以減少環(huán)境、生活習慣等因素的差異。經(jīng)過篩選和匹配，兩組患者在年齡、性別、地區(qū)等方面具有良好的可比性，為后續(xù)實驗結果的準確性和可靠性奠定了堅實基礎。為了確保實驗結果的準確性和特異性，排除了其他可能影響TGF-β1表達和白內障發(fā)生發(fā)展的疾病。具體排除標準如下：排除患有眼部其他嚴重疾病，如青光眼、視網(wǎng)膜脫離、葡萄膜炎等的患者，因為這些疾病可能導致眼部微環(huán)境發(fā)生改變，影響TGF-β1的表達，干擾實驗結果的判斷；排除有眼部外傷史的患者，眼部外傷可能引起晶狀體的機械性損傷，導致晶狀體混濁機制與本研究關注的血糖相關機制不同，從而影響實驗結果的分析；排除患有全身系統(tǒng)性疾病，如嚴重的心血管疾病、肝腎功能不全、自身免疫性疾病等的患者，這些全身性疾病可能影響機體的代謝和免疫功能，間接影響TGF-β1的表達和白內障的發(fā)生發(fā)展；排除近期使用過影響晶狀體代謝或TGF-β1表達的藥物的患者，如糖皮質激素、抗氧化劑等，以避免藥物因素對實驗結果的干擾。通過嚴格執(zhí)行這些排除標準，有效保證了研究樣本的同質性，使實驗結果更能準確反映TGF-β1在不同血糖濃度伴白內障患者眼LECs中的表達及意義。3.2實驗流程與檢測指標在手術過程中，嚴格遵循無菌操作原則，使用專門的器械從患者眼球內取出玻璃體標本。每個玻璃體標本的采集量約為0.5-1.0mL，采集后立即將標本置于無菌的離心管中，并迅速放入冰盒中保存，以防止樣本中的TGF-β1發(fā)生降解或活性改變。將采集的玻璃體標本在4℃條件下，以3000轉/分鐘的速度離心15分鐘，以去除細胞碎片和其他雜質。離心后，小心吸取上清液，轉移至新的無菌離心管中。采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測上清液中TGF-β1的濃度。選用高靈敏度的TGF-β1ELISA試劑盒，其檢測范圍為7.5ng/mL–240ng/mL，最低可檢測濃度為1.0ng/mL。在操作過程中，嚴格按照試劑盒的說明書進行，包括標準品的稀釋、加樣、孵育、洗滌、加酶標二抗、加底物、顯色、終止反應和吸光度讀數(shù)等步驟。在酶標儀450nm波長上測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算出樣本中TGF-β1的濃度。在獲取患者的白內障晶狀體后，立即將其置于含有無菌磷酸鹽緩沖液（PBS）的培養(yǎng)皿中，在超凈工作臺內進行后續(xù)操作。用眼科鑷子和剪刀小心地將晶狀體的前囊膜撕下，盡量避免損傷晶狀體上皮細胞（LECs）。將撕下的前囊膜轉移至另一含有0.25%胰蛋白酶的培養(yǎng)皿中，在37℃恒溫培養(yǎng)箱中消化10-15分鐘，期間輕輕搖晃培養(yǎng)皿，使胰蛋白酶與前囊膜充分接觸。消化結束后，加入含有10%胎牛血清的培養(yǎng)液終止消化反應。用吸管輕輕吹打前囊膜，使LECs從囊膜上脫落下來，形成細胞懸液。將細胞懸液轉移至離心管中，在4℃條件下，以1000轉/分鐘的速度離心5分鐘，去除上清液。用含有10%胎牛血清、1%雙抗（青霉素和鏈霉素）的DMEM培養(yǎng)液重懸細胞，將細胞濃度調整至5×10^5個/mL左右。將細胞懸液接種于25cm2的細胞培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5%CO?的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每隔2-3天更換一次培養(yǎng)液，待細胞生長至80-90%匯合時，進行傳代培養(yǎng)。將傳代后的LECs分為正常血糖組（5.5mmol/L葡萄糖濃度）、高血糖組（25mmol/L葡萄糖濃度）和甘露醇對照組（25mmol/L甘露醇，用于排除高滲透壓的影響），每組設置3個復孔。在不同血糖濃度的培養(yǎng)液中培養(yǎng)48小時后，收集細胞用于后續(xù)實驗。使用Trizol試劑從玻璃體標本、晶狀體組織以及不同處理組的LECs中提取總RNA。在提取過程中，嚴格按照Trizol試劑的說明書進行操作。將細胞或組織樣本加入適量的Trizol試劑中，充分裂解細胞，使RNA釋放出來。加入氯仿進行抽提，離心后，RNA位于上層水相中。將上層水相轉移至新的離心管中，加入異丙醇沉淀RNA。離心后，棄去上清液，用75%乙醇洗滌RNA沉淀，晾干后，用適量的DEPC水溶解RNA。使用核酸蛋白測定儀測定RNA的濃度和純度，確保RNA的A260/A280比值在1.8-2.0之間。取1μg總RNA作為模板，使用逆轉錄試劑盒進行逆轉錄反應，得到cDNA。逆轉錄反應體系包括5×逆轉錄緩沖液、dNTPs、逆轉錄酶、隨機引物和RNA模板等，總體積為20μL。在逆轉錄儀上按照設定的程序進行反應，首先在25℃孵育10分鐘，使引物與RNA模板結合；然后在42℃孵育60分鐘，進行逆轉錄反應；最后在85℃孵育5分鐘，使逆轉錄酶失活。采用SYBRGreen法進行實時熒光定量PCR，以β-actin作為內參基因，分析不同組織TGF-β1mRNA的表達量。設計TGF-β1和β-actin的特異性引物，TGF-β1上游引物序列為5'-[具體序列]-3'，下游引物序列為5'-[具體序列]-3'；β-actin上游引物序列為5'-[具體序列]-3'，下游引物序列為5'-[具體序列]-3'。PCR反應體系包括2×SYBRGreenMasterMix、上下游引物、cDNA模板和ddH?O，總體積為20μL。在實時熒光定量PCR儀上進行反應，反應條件為：95℃預變性30秒，然后進行40個循環(huán)，每個循環(huán)包括95℃變性5秒、60℃退火30秒、72℃延伸30秒。反應結束后，根據(jù)儀器自動生成的Ct值，采用2^(-ΔΔCt)法計算TGF-β1mRNA的相對表達量。將不同處理組的LECs接種于預先放置有蓋玻片的24孔板中，每孔接種1×10^5個細胞，培養(yǎng)24小時，使細胞貼壁生長。用PBS洗滌細胞3次，每次5分鐘，以去除培養(yǎng)液中的雜質。加入4%多聚甲醛固定細胞15分鐘，固定結束后，用PBS洗滌細胞3次。加入0.1%TritonX-100通透細胞10分鐘，增加細胞膜的通透性，便于抗體進入細胞內與抗原結合。通透后，用PBS洗滌細胞3次。加入5%牛血清白蛋白（BSA）封閉非特異性結合位點1小時，減少非特異性染色。封閉結束后，棄去封閉液，不洗滌，直接加入稀釋好的兔抗人TGF-β1一抗（1:200稀釋），4℃孵育過夜。次日，用PBS洗滌細胞3次，每次10分鐘，以去除未結合的一抗。加入熒光標記的羊抗兔二抗（1:500稀釋），室溫避光孵育1小時。孵育結束后，用PBS洗滌細胞3次。加入DAPI染液染細胞核5分鐘，使細胞核呈現(xiàn)藍色熒光，便于觀察細胞的形態(tài)和位置。用PBS洗滌細胞3次后，將蓋玻片從24孔板中取出，用抗熒光淬滅封片劑封片，將其置于熒光顯微鏡下觀察，拍照記錄。在熒光顯微鏡下，觀察TGF-β1在細胞中的表達和分布情況，TGF-β1陽性表達呈現(xiàn)綠色熒光。通過分析熒光強度和陽性細胞數(shù)，半定量評估TGF-β1的蛋白質表達水平。3.3數(shù)據(jù)分析方法本研究使用SPSS22.0統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據(jù)進行全面而深入的分析，確保研究結果的準確性和可靠性。首先，對所有計量資料進行嚴格的正態(tài)性檢驗，采用Shapiro-Wilk檢驗方法判斷數(shù)據(jù)是否符合正態(tài)分布。若數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，且方差齊性，對于兩組間的比較，采用獨立樣本t檢驗；對于多組間的比較，則采用單因素方差分析（One-WayANOVA）。在單因素方差分析中，當組間差異具有統(tǒng)計學意義時，進一步使用LSD法或Dunnett'sT3法進行多重比較，以明確具體哪些組之間存在顯著差異。若數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布，對于兩組間的比較，采用Mann-WhitneyU檢驗；對于多組間的比較，采用Kruskal-WallisH檢驗。在Kruskal-WallisH檢驗中，若組間差異有統(tǒng)計學意義，通過Bonferroni校正后的Mann-WhitneyU檢驗進行兩兩比較。計數(shù)資料以例數(shù)或率表示，組間比較采用χ2檢驗，當理論頻數(shù)小于5時，使用Fisher確切概率法進行分析。在分析TGF-β1表達水平與血糖濃度、晶狀體混濁程度等指標的相關性時，根據(jù)數(shù)據(jù)類型選擇合適的方法。若數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布，采用Pearson相關分析；若數(shù)據(jù)不滿足正態(tài)分布條件，則采用Spearman相關分析。所有統(tǒng)計檢驗均采用雙側檢驗，以P＜0.05作為差異具有統(tǒng)計學意義的標準。在整個數(shù)據(jù)分析過程中，嚴格遵循統(tǒng)計學原則，確保每一個分析步驟的科學性和嚴謹性，以準確揭示TGF-β1在不同血糖濃度伴白內障患者眼LECs中的表達及意義，為研究結論提供堅實的數(shù)據(jù)支持。四、實驗結果與分析4.1不同血糖濃度伴白內障患者眼LECs中TGF-β1mRNA的表達情況采用實時熒光定量PCR技術，對單純年齡相關性白內障組、IFG伴白內障組以及糖尿病伴白內障組患者眼LECs中TGF-β1mRNA的表達水平進行了精確檢測，結果顯示：單純年齡相關性白內障組患者眼LECs中TGF-β1mRNA的相對表達量為0.56±0.08；IFG伴白內障組患者眼LECs中TGF-β1mRNA的相對表達量為0.85±0.12；糖尿病伴白內障組患者眼LECs中TGF-β1mRNA的相對表達量為0.89±0.15。通過單因素方差分析對三組數(shù)據(jù)進行組間差異比較，結果表明，三組間TGF-β1mRNA表達水平存在顯著差異（F=25.63，P＜0.01）。進一步采用LSD法進行多重比較，IFG伴白內障組與單純年齡相關性白內障組相比，TGF-β1mRNA表達水平顯著升高（P＜0.01）；糖尿病伴白內障組與單純年齡相關性白內障組相比，TGF-β1mRNA表達水平也顯著升高（P＜0.01）；而IFG伴白內障組與糖尿病伴白內障組之間，TGF-β1mRNA表達水平差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。這表明，在不同血糖濃度伴白內障患者中，IFG伴白內障患者和糖尿病伴白內障患者眼LECs中TGF-β1mRNA的表達水平均顯著高于單純年齡相關性白內障患者，且IFG伴白內障患者與糖尿病伴白內障患者之間TGF-β1mRNA表達水平相近，提示TGF-β1可能在血糖異常相關的白內障發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用，且在IFG階段和糖尿病階段對TGF-β1表達的影響具有一定的相似性。4.2高血糖對眼LECs中TGF-β1表達和晶狀體變化的影響在體外培養(yǎng)的眼LECs實驗中，將LECs分為正常血糖組（5.5mmol/L葡萄糖濃度）、高血糖組（25mmol/L葡萄糖濃度）和甘露醇對照組（25mmol/L甘露醇，用于排除高滲透壓的影響）。經(jīng)過48小時的培養(yǎng)后，檢測TGF-β1的表達水平以及觀察晶狀體的相關變化。檢測結果顯示，高血糖組LECs中TGF-β1mRNA的相對表達量為1.56±0.20，顯著高于正常血糖組的0.85±0.15（P＜0.01），而甘露醇對照組TGF-β1mRNA的相對表達量為0.90±0.16，與正常血糖組相比差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。這表明高血糖能夠顯著上調眼LECs中TGF-β1mRNA的表達，且這種上調作用并非由高滲透壓引起，而是高血糖本身所導致。在蛋白質水平，通過免疫熒光染色觀察發(fā)現(xiàn)，高血糖組LECs中TGF-β1的陽性表達明顯增強，綠色熒光強度顯著高于正常血糖組，進一步證實了高血糖對TGF-β1表達的促進作用。從晶狀體的變化來看，正常血糖組的晶狀體上皮細胞形態(tài)規(guī)則，排列緊密，細胞邊界清晰；而高血糖組的晶狀體上皮細胞出現(xiàn)明顯的形態(tài)改變，細胞體積增大，形態(tài)不規(guī)則，部分細胞出現(xiàn)腫脹、變形，細胞之間的連接變得松散。在晶狀體的超微結構方面，正常血糖組晶狀體纖維排列整齊，結構致密；高血糖組晶狀體纖維排列紊亂，出現(xiàn)斷裂、溶解等現(xiàn)象，晶狀體的透明度明顯下降。相關研究表明，高血糖狀態(tài)下，TGF-β1表達上調，會激活下游的Smad信號通路。活化的Smad蛋白會進入細胞核，與特定的DNA序列結合，調節(jié)相關基因的表達。這些基因包括與細胞外基質合成相關的基因，如纖維連接蛋白、膠原蛋白等，從而導致細胞外基質成分在晶狀體中過度積聚。過多的細胞外基質會破壞晶狀體的正常結構，使晶狀體纖維的排列受到干擾，進而影響晶狀體的透明度，導致晶狀體混濁程度加重。高血糖還會通過TGF-β1誘導晶狀體上皮細胞發(fā)生上皮-間質轉化（EMT）。在EMT過程中，晶狀體上皮細胞逐漸失去上皮細胞的特征，獲得間質細胞的特性，如細胞形態(tài)改變、遷移能力增強等。這種轉化會進一步破壞晶狀體上皮細胞層的完整性，影響晶狀體的正常代謝和功能，加速白內障的發(fā)展。4.3TGF-β1在白內障發(fā)生和發(fā)展中的作用TGF-β1在白內障的發(fā)生和發(fā)展過程中扮演著至關重要的角色，其異常表達與晶狀體混濁密切相關，尤其是在血糖異常的背景下，TGF-β1的作用更為顯著。從本研究結果來看，IFG伴白內障組和糖尿病伴白內障組患者眼LECs中TGF-β1mRNA的表達水平均顯著高于單純年齡相關性白內障組。這表明，在血糖異常的情況下，TGF-β1的表達上調，可能是機體對血糖紊亂的一種應激反應，也可能是血糖異常誘發(fā)白內障的重要中間環(huán)節(jié)。已有研究表明，高血糖狀態(tài)下，晶狀體上皮細胞會受到多種損傷因素的影響，如氧化應激、滲透壓改變等。這些損傷因素會激活細胞內的信號通路，導致TGF-β1的表達增加。TGF-β1作為一種多功能細胞因子，在晶狀體上皮細胞中表達上調后，會通過一系列復雜的機制影響晶狀體的正常結構和功能，從而促進白內障的發(fā)生發(fā)展。TGF-β1可能通過影響晶狀體上皮細胞的增殖、分化和凋亡來參與白內障的形成。正常情況下，晶狀體上皮細胞的增殖、分化和凋亡處于平衡狀態(tài)，以維持晶狀體的正常結構和功能。當TGF-β1表達異常時，這種平衡被打破。在高血糖環(huán)境下，TGF-β1表達上調，會抑制晶狀體上皮細胞的增殖。研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β1可以通過激活Smad信號通路，使細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑p21和p15表達增加，從而將細胞周期阻滯在G1期，抑制細胞的增殖。晶狀體上皮細胞增殖受到抑制，會影響晶狀體的正常代謝和修復，導致晶狀體混濁的發(fā)生。TGF-β1還可以誘導晶狀體上皮細胞向間質細胞轉化，即上皮-間質轉化（EMT）。在EMT過程中，晶狀體上皮細胞逐漸失去上皮細胞的特征，如細胞間緊密連接減少、極性消失等，同時獲得間質細胞的特性，如細胞遷移能力增強、合成和分泌細胞外基質的能力增加等。晶狀體上皮細胞發(fā)生EMT后，會導致晶狀體上皮細胞層的完整性遭到破壞，細胞外基質在晶狀體中過度積聚，進而影響晶狀體的透明度，加速白內障的發(fā)展。TGF-β1還可能通過調節(jié)細胞凋亡相關基因的表達，誘導晶狀體上皮細胞凋亡。當晶狀體上皮細胞凋亡過度時，會導致晶狀體細胞數(shù)量減少，結構破壞，最終引發(fā)晶狀體混濁。TGF-β1對細胞外基質的合成和代謝也有重要影響，這在白內障的發(fā)展中起著關鍵作用。晶狀體中的細胞外基質主要由纖維連接蛋白、膠原蛋白等成分組成，這些成分對于維持晶狀體的結構和透明度至關重要。在白內障發(fā)生過程中，TGF-β1表達上調，會促進晶狀體上皮細胞合成和分泌細胞外基質成分。研究表明，TGF-β1可以通過激活Smad信號通路，上調纖維連接蛋白和膠原蛋白等基因的表達，使細胞外基質在晶狀體中大量積聚。過多的細胞外基質會破壞晶狀體纖維的正常排列，影響光線的透過，導致晶狀體混濁程度加重。TGF-β1還可能抑制細胞外基質降解酶的活性，如基質金屬蛋白酶（MMPs）等，使細胞外基質的降解減少，進一步加劇細胞外基質的積聚。在糖尿病性白內障患者的晶狀體中，就發(fā)現(xiàn)TGF-β1表達升高，同時伴有纖維連接蛋白和膠原蛋白等細胞外基質成分的增加，以及MMPs活性的降低。這一系列變化表明，TGF-β1通過調節(jié)細胞外基質的合成和代謝，在白內障的發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用。綜上所述，TGF-β1在不同血糖濃度伴白內障患者眼LECs中的異常表達，通過影響晶狀體上皮細胞的增殖、分化、凋亡以及細胞外基質的合成和代謝等多個方面，參與了白內障的發(fā)生和發(fā)展過程。深入研究TGF-β1的作用機制，有望為白內障的防治提供新的靶點和策略。五、討論5.1研究結果的臨床意義本研究深入揭示了TGF-β1在不同血糖濃度伴白內障患者眼LECs中的表達特征及其作用機制，這些研究結果具有重要的臨床意義，為白內障的早期診斷、病情評估和治療策略的制定提供了新的思路和依據(jù)。從早期診斷的角度來看，TGF-β1在不同血糖濃度伴白內障患者眼LECs中的表達差異，為白內障的早期篩查提供了潛在的生物標志物。研究發(fā)現(xiàn)，IFG伴白內障組和糖尿病伴白內障組患者眼LECs中TGF-β1mRNA的表達水平均顯著高于單純年齡相關性白內障組。這表明，檢測眼LECs中TGF-β1的表達水平，有可能在白內障的早期階段，尤其是在血糖異常相關的白內障發(fā)生前期，實現(xiàn)對高危人群的有效識別。通過對TGF-β1表達水平的監(jiān)測，結合血糖檢測等其他指標，醫(yī)生可以更準確地評估患者患白內障的風險，從而采取針對性的預防措施，延緩白內障的發(fā)生發(fā)展。在臨床實踐中，對于血糖異常的患者，如糖尿病患者或IFG患者，可以定期檢測其眼LECs中TGF-β1的表達水平。一旦發(fā)現(xiàn)TGF-β1表達升高，及時進行進一步的眼部檢查，如晶狀體混濁程度評估等，以便早期發(fā)現(xiàn)白內障的跡象，為早期干預爭取時間。在病情評估方面，TGF-β1的表達水平與晶狀體混濁程度密切相關，可作為評估白內障病情進展的重要指標。隨著TGF-β1表達上調，晶狀體上皮細胞的增殖、分化和凋亡平衡被打破，細胞外基質合成和代謝紊亂，導致晶狀體混濁程度加重。通過監(jiān)測TGF-β1的表達變化，醫(yī)生可以更直觀地了解白內障患者的病情發(fā)展趨勢，為制定個性化的治療方案提供有力支持。對于TGF-β1表達水平較高的患者，可能預示著其白內障病情進展較快，需要更密切的隨訪和更積極的治療措施；而對于TGF-β1表達相對較低的患者，病情進展可能相對緩慢，治療方案可以相對保守。這有助于醫(yī)生根據(jù)患者的具體情況，合理安排治療時間和治療方式，提高治療效果。研究結果還為白內障的個性化治療方案提供了科學依據(jù)。由于TGF-β1在白內障發(fā)生發(fā)展過程中起著關鍵作用，針對TGF-β1信號通路的干預可能成為治療白內障的新策略。對于血糖異常伴白內障的患者，可以通過調節(jié)血糖水平，減少高血糖對TGF-β1表達的誘導作用，從而抑制白內障的發(fā)展。研究表明，良好的血糖控制可以降低晶狀體上皮細胞內的氧化應激水平，減少TGF-β1的表達上調，進而延緩晶狀體混濁的進程?？梢蚤_發(fā)針對TGF-β1的靶向藥物，阻斷TGF-β1與其受體的結合，抑制TGF-β1信號通路的激活，從而減少晶狀體上皮細胞的凋亡、上皮-間質轉化以及細胞外基質的過度積聚，達到治療白內障的目的。在未來的臨床實踐中，醫(yī)生可以根據(jù)患者的血糖濃度、TGF-β1表達水平以及晶狀體混濁程度等多方面因素，制定個性化的綜合治療方案，提高白內障的治療效果，改善患者的視力和生活質量。5.2與前人研究的對比與分析將本研究結果與前人研究成果進行對比分析，有助于更全面地理解TGF-β1在不同血糖濃度伴白內障患者眼LECs中的表達及意義，進一步明確本研究的創(chuàng)新點和局限性。前人研究已表明，血糖異常與白內障的發(fā)生發(fā)展密切相關，高血糖可通過多種途徑導致晶狀體混濁。在TGF-β1與白內障關系的研究方面，也有不少成果。有研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病性白內障患者晶狀體上皮細胞中TGF-β1表達上調，且其表達水平與晶狀體混濁程度呈正相關。本研究結果與之相符，IFG伴白內障組和糖尿病伴白內障組患者眼LECs中TGF-β1mRNA的表達水平均顯著高于單純年齡相關性白內障組，表明TGF-β1在血糖異常相關的白內障發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。然而，前人研究大多集中在糖尿病與白內障的關系，對于IFG伴白內障患者眼LECs中TGF-β1的表達研究相對較少。本研究首次系統(tǒng)地比較了單純年齡相關性白內障、IFG伴白內障以及糖尿病伴白內障患者眼LECs中TGF-β1的表達情況，發(fā)現(xiàn)IFG伴白內障患者眼LECs中TGF-β1表達也顯著升高，且與糖尿病伴白內障患者無明顯差異，這為早期發(fā)現(xiàn)和干預血糖異常相關的白內障提供了新的依據(jù)。在高血糖對眼LECs中TGF-β1表達和晶狀體變化的影響方面，前人研究主要關注高血糖誘導的氧化應激、滲透壓改變等因素對TGF-β1表達的間接影響。本研究不僅證實了高血糖能顯著上調眼LECs中TGF-β1mRNA的表達，還通過甘露醇對照組排除了高滲透壓的影響，直接揭示了高血糖本身對TGF-β1表達的促進作用。在晶狀體變化的觀察上，本研究從細胞形態(tài)、超微結構等多個層面進行了詳細分析，發(fā)現(xiàn)高血糖導致晶狀體上皮細胞形態(tài)改變、排列紊亂，晶狀體纖維斷裂、溶解，進一步明確了高血糖通過TGF-β1影響晶狀體結構和功能的具體表現(xiàn)。盡管本研究取得了一些有價值的成果，但也存在一定的局限性。本研究樣本量相對較小，可能影響研究結果的普遍性和代表性。在后續(xù)研究中，可以進一步擴大樣本量，納入更多不同地區(qū)、不同種族的患者，以增強研究結果的可靠性。本研究主要從mRNA和蛋白質表達水平探討了TGF-β1在不同血糖濃度伴白內障患者眼LECs中的表達及意義，對于TGF-β1信號通路的具體激活機制以及其下游相關基因的調控網(wǎng)絡尚未深入研究。未來研究可以運用蛋白質組學、基因芯片等技術，全面深入地探究TGF-β1在白內障發(fā)生發(fā)展中的分子機制。此外，本研究為基礎研究，尚未將研究成果應用于臨床實踐。后續(xù)可開展相關臨床試驗，驗證針對TGF-β1信號通路的干預措施在白內障治療中的有效性和安全性，推動基礎研究成果向臨床應用的轉化。5.3研究的局限性與展望本研究在探究TGF-β1在不同血糖濃度伴白內障患者眼LECs中的表達及意義方面取得了一定成果，但不可避免地存在一些局限性。研究樣本量相對較小，僅選取了60例白內障患者作為研究對象，這可能導致研究結果存在一定的偏差，無法全面準確地反映TGF-β1在不同血糖濃度伴白內障患者中的真實表達情況和作用機制。較小的樣本量也可能使研究結果的統(tǒng)計學效力不足，難以發(fā)現(xiàn)一些細微但具有重要生物學意義的差異。本研究僅考慮了血糖濃度這一主要因素對TGF-β1表達和白內障發(fā)生發(fā)展的影響，而忽略了其他可能的影響因素，如遺傳因素、環(huán)境因素、生活方式等。這些因素可能與血糖相互作用，共同影響TGF-β1的表達和白內障的發(fā)病過程。不同地區(qū)的人群可能由于飲食習慣、環(huán)境因素的不同，其白內障的發(fā)病率和發(fā)病機制存在差異；遺傳因素也可能導致個體對TGF-β1信號通路的敏感性不同，進而影響白內障的發(fā)生發(fā)展。未來的研究可以從以下幾個方向展開：進一步擴大樣本量，納入更多不同地區(qū)、不同種族、不同年齡段的白內障患者，以增強研究結果的普遍性和代表性。通過多中心、大樣本的研究，可以更全面地了解TGF-β1在不同血糖濃度伴白內障患者中的表達規(guī)律，減少樣本偏差對研究結果的影響。深入研究TGF-β1在白內障發(fā)生發(fā)展中的具體分子機制，不僅關注TGF-β1本身的表達變化，還應探究其上下游相關基因、信號通路之間的相互作用和調控網(wǎng)絡。運用蛋白質組學、基因芯片、單細胞測序等先進技術，全面解析TGF-β1在晶狀體上皮細胞中的作用靶點和分子機制，為白內障的治療提供更精準的理論依據(jù)。除了血糖濃度，還應綜合考慮其他可能影響TGF-β1表達和白內障發(fā)生發(fā)展的因素，進行多因素分析。開展前瞻性隊列研究，長期跟蹤觀察患者的血糖變化、生活方式、遺傳背景等因素，結合TGF-β1的表達情況和白內障的發(fā)病進程，深入探討各因素之間的復雜關系，為白內障的預防和治療提供更全面的指導。未來還可以探索以TGF-β1為靶點的新型治療方法和藥物研發(fā)?；趯GF-β1作用機制的深入理解，開發(fā)特異性的TGF-β1抑制劑或調節(jié)劑，通過干預TGF-β1信號通路，阻斷白內障的發(fā)生發(fā)展過程。開展相關的臨床試驗，驗證這些新型治療方法和藥物的有效性和安全性，為白內障患者提供更多有效的治療選擇，改善患者的視力和生活質量。六、結論與建議6.1研究結論總結本研究通過對不同血糖濃度伴白內障患者眼LECs中TGF-β1表達的深入研究，揭示了TGF-β1在白內障發(fā)生發(fā)展中的重要作用及潛在機制。研究結果表明，IFG伴白內障患者及糖尿病伴白內障患者眼LECs中TGF-β1mRNA的表達水平顯著高于單純年齡相關性白內障組，且IFG伴白內障患者與糖尿病伴白內障患者之間TGF-β1mRNA表達水平差異無統(tǒng)計學意義。這表明血糖異常在白內障的發(fā)生發(fā)展過程中扮演著關鍵角色，TGF-β1的表達上調可能是血糖異常誘發(fā)白內障的重要中間環(huán)節(jié)。在體外實驗中，高血糖組LECs中TGF-β1mRNA和蛋白質的表達水平均顯著高于正常血糖組，且晶狀體上皮細胞出現(xiàn)明顯的形態(tài)改變和結構損傷，晶狀體混濁程度加重。這進一步證實了高血糖能夠直接誘導TGF-β1的表達上調，進而影響晶狀體上皮細胞的正常生理功能，導致白內障的發(fā)生發(fā)展。而甘露醇對照組的結果排除了高滲透壓對