第50課時匯報人：微生物的培養(yǎng)技術(shù)與應(yīng)用生物大一輪復(fù)習(xí)課標要求1.通過配制培養(yǎng)基、滅菌、接種和培養(yǎng)等實驗操作獲得純化的酵母菌菌落。2.分離土壤中分解尿素的細菌，并進行計數(shù)?？记榉治?.微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)2024·湖南·T6

2024·山東·T15

2022·湖北·T4

2021·天津·T12.微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)2024·黑吉遼·T19

2024·江西·T17

2024·全國甲·T372023·山東·T15

2023·廣東·T10

2023·遼寧·T9

2022·遼寧·T152022·海南·T12

2022·江蘇·T3

2022·河北·T23

2021·山東·T14考點一微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)考點二微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)壹內(nèi)容索引貳課時精練目錄微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)01單擊此處添加章節(jié)副標題必備知識整合1.培養(yǎng)基的配制(1)培養(yǎng)基的概念、用途和類型①概念：人們按照微生物對

的不同需求，配制出的供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。②用途：用以

微生物或積累其代謝物。營養(yǎng)物質(zhì)培養(yǎng)、分離、鑒定、保存培養(yǎng)基種類培養(yǎng)基特點作用

培養(yǎng)基加凝固劑，如_____微生物的分離與鑒定，活菌計數(shù)，保藏菌種半固體培養(yǎng)基容器放倒不致流出，劇烈震動則破散觀察微生物的運動、分類鑒定

培養(yǎng)基不加凝固劑常用于工業(yè)生產(chǎn)、微生物的擴大培養(yǎng)固體瓊脂液體③培養(yǎng)基的種類(按物理性質(zhì)分)微生物乳酸桿菌霉菌細菌厭氧微生物特殊需求添加______一般pH調(diào)至____一般pH調(diào)至_________________(2)培養(yǎng)基的配方①主要營養(yǎng)物質(zhì)：水、

、氮源、

。②其他條件：pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)和氧氣。如表：碳源無機鹽維生素酸性中性或弱堿性無氧2.無菌技術(shù)(1)目的：獲得

的微生物培養(yǎng)物。(2)關(guān)鍵：防止

污染。(3)常用方法：滅菌和消毒。純凈雜菌(4)注意事項①實驗操作時，應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品接觸。②為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應(yīng)在超凈工作臺上并在

附近進行。酒精燈火焰選擇無菌技術(shù)的原則：一要考慮無菌技術(shù)的效果，滅菌的效果比消毒要好；二要考慮操作對象的承受能力，活體生物材料、操作者的手等只能采用消毒，而不能用滅菌。3.微生物的純培養(yǎng)概念辨析濕熱滅菌法4.純培養(yǎng)的過程(以酵母菌為例)接種環(huán)連續(xù)劃線稀釋分散單菌落(1)不含氮源的平板不能用于微生物培養(yǎng)(2023·山東，15A)(

)提示不含氮源的平板可用于固氮菌的培養(yǎng)?！僚袛嗾`(2)可用濕熱滅菌法對實驗中所使用的微量離心管、細胞培養(yǎng)瓶等進行滅菌(2022·湖北，4D)(

)(3)接種后未長出菌落的培養(yǎng)基可以直接丟棄(2023·山東，15C)(

)提示使用后的培養(yǎng)基即使未長出菌落也要在丟棄前進行滅菌處理，不能直接丟棄，以免污染環(huán)境。√×分析微生物平板劃線和培養(yǎng)的具體操作微生物平板劃線和培養(yǎng)的具體操作如圖所示，據(jù)圖回答下列問題：關(guān)鍵能力提升(1)圖示①～⑧中不正確的操作及其原因分別是什么？提示②拔出棉塞后完全握住棉塞會造成雜菌污染，應(yīng)握住棉塞上部；⑥劃線時不能將培養(yǎng)皿完全打開，應(yīng)在火焰附近將培養(yǎng)皿打開一條縫隙，用接種環(huán)在培養(yǎng)基表面迅速劃三至五條平行線，蓋上皿蓋；⑦劃線時第5次的劃線不能與第1次的劃線相連；⑧平板應(yīng)倒置培養(yǎng)。(2)在第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？提示劃線后，線條末端菌種的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使菌種的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個微生物繁殖而來的菌落。(3)在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？提示需要；劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免污染環(huán)境和感染操作者。歸納總結(jié)平板劃線法操作中幾次灼燒接種環(huán)的目的考向一微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)1.(經(jīng)典高考題)為純化菌種，在鑒別培養(yǎng)基上劃線接種纖維素降解細菌，培養(yǎng)結(jié)果如圖所示。下列敘述正確的是A.倒平板后需間歇晃動，以保證表面平整B.圖中Ⅰ、Ⅱ區(qū)的細菌數(shù)量均太多，應(yīng)從Ⅲ區(qū)挑取

單菌落C.該實驗結(jié)果因單菌落太多，不能達到菌種純化的目的D.菌落周圍的纖維素被降解后，可被剛果紅染成紅色√遷移應(yīng)用評價溫度降低后，培養(yǎng)基易凝固，因此倒平板后要及時輕輕晃動，以保持均一性，A錯誤；由題圖可知，隨著劃線次數(shù)增多，細菌密度逐漸減小，Ⅲ區(qū)開始出現(xiàn)單菌落，應(yīng)從Ⅲ區(qū)挑取單菌落，B正確；菌落是由單個微生物細胞或多個同種細胞繁殖到一定程度后形成的，能得到單菌落即可以達到菌種純化的目的，C錯誤；剛果紅能與纖維素形成紅色復(fù)合物，菌落周圍的纖維素被降解后紅色消失，出現(xiàn)透明圈，D錯誤。2.(2024·深圳聯(lián)考)某同學(xué)將5個手指尖在貼有“洗手前”標簽的固體培養(yǎng)基上輕輕按一下，然后用肥皂將該手洗干凈，再將這5個手指尖在貼有“洗手后”標簽的同種培養(yǎng)基上輕輕按一下。將這兩個培養(yǎng)皿放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，發(fā)現(xiàn)貼有“洗手后”標簽的培養(yǎng)皿中菌落較少。下列相關(guān)敘述錯誤的是A.這個實驗中需要進行滅菌處理的材料用具有培養(yǎng)皿和培養(yǎng)基等B.“將手指尖在培養(yǎng)基上輕輕按一下”相當于微生物培養(yǎng)中的接種C.從實驗結(jié)果來看，洗手后的操作不會污染培養(yǎng)基D.培養(yǎng)基中的氮元素是微生物合成蛋白質(zhì)、核酸等物質(zhì)所必需的√返回從實驗結(jié)果看，貼有“洗手后”標簽的培養(yǎng)皿中菌落較少，并不能說明洗手后的操作不會污染培養(yǎng)基，C錯誤。微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)02單擊此處添加章節(jié)副標題種類特點用途舉例選擇培養(yǎng)基允許

，同時_____________________________從眾多微生物中分離所需的微生物以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基分離得到尿素分解菌鑒別培養(yǎng)基根據(jù)微生物的代謝特點在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品，進而產(chǎn)生特定的顏色或其他變化鑒別不同種類的微生物用伊紅—亞甲藍培養(yǎng)基鑒別大腸桿菌必備知識整合特定種類的微生物生長抑制或阻止其他種類微生物生長1.區(qū)分選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基常見選擇培養(yǎng)基舉例：(1)缺少氮源的培養(yǎng)基可以篩選能利用大氣中N2的微生物。(2)含青霉素的培養(yǎng)基可淘汰細菌，篩選出真菌。(3)無有機碳源的培養(yǎng)基可篩選出自養(yǎng)微生物。2.微生物的選擇培養(yǎng)和數(shù)量測定(1)稀釋涂布平板法步驟①系列稀釋操作：該操作常用在將細胞接種到培養(yǎng)基之前，通過液體稀釋的方法分散細胞，隨著稀釋程度的增大，單位體積中的微生物細胞數(shù)量減少，細胞得以分散。操作步驟：酒精冷卻②涂布平板操作步驟(2)微生物的數(shù)量測定方法①顯微鏡直接計數(shù)法顯微鏡直接計數(shù)法本身不能區(qū)分細菌的死活，但是通過一定的輔助處理，可以實現(xiàn)活菌計數(shù)，如在計數(shù)前用臺盼藍染液進行染色，可以通過統(tǒng)計無色細胞的個數(shù)來對活菌進行計數(shù)?；罹?0～300平均值少當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落②活菌計數(shù)法3.土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)的實驗操作(1)實驗原理脲酶尿素(2)實驗流程30～300稀釋涂布平板30～37(3)實驗結(jié)果分析與評價少于30～300選擇性必修3P19“探究·實踐”：本活動初步篩選了能分解尿素的細菌，請進一步借助于生物化學(xué)的方法來鑒定所分離的菌種：分解尿素的細菌合成的脲酶可以將尿素分解成氨，氨會使培養(yǎng)基的

性增強，在培養(yǎng)基中加入

指示劑培養(yǎng)細菌，若指示劑

，可確定該細菌能夠分解尿素。教材隱性知識堿酚紅變紅(1)平板涂布時涂布器使用前必須進行消毒(2023·山東，15B)(

)提示平板涂布時涂布器使用前必須先浸在酒精中，然后在火焰上灼燒，這種操作屬于滅菌。×判斷正誤(2)利用以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物(2023·山東，15D)(

)(3)稀釋涂布平板法和平板劃線法均能得到單菌落，都可用于細菌計數(shù)(2021·浙江6月選考，17C)(

)提示平板劃線法只能用于細菌分離，不能用于細菌計數(shù)。√×(4)血細胞計數(shù)板既可用于酵母菌的數(shù)量測定，也可用于細菌的數(shù)量測定(2023·江蘇，7D)(

)提示血細胞計數(shù)板不適用于微小的細菌計數(shù)?！僚袛嗾`理解微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)的原理某興趣小組從富含纖維素的土壤中取樣，加入選擇培養(yǎng)基中進行振蕩培養(yǎng)，之后接種于鑒別培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，篩選出能夠高效分解纖維素的微生物。請回答下列相關(guān)問題：1.從富含纖維素的土壤中取樣的原因是什么？關(guān)鍵能力提升提示纖維素分解菌大多分布在富含纖維素的環(huán)境中。2.分離出分解纖維素的微生物，應(yīng)該配制以

為唯一碳源的培養(yǎng)基，目的是

。提示④；④形成的透明圈與菌落直徑的比值最大。3.已知剛果紅與纖維素能形成紅色復(fù)合物，當纖維素被分解后，復(fù)合物無法形成，平板上會出現(xiàn)以菌落為中心的透明圈(如圖)，幾號真菌降解纖維素的能力最強，理由是什么？纖維素促進纖維素分解菌生長，抑制其他微生物的生長4.三位同學(xué)用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中細菌數(shù)量，在對應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的稀釋液中各取0.1mL涂平板，得到以下統(tǒng)計結(jié)果：甲同學(xué)涂布了兩個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)是236和260，取平均值248；乙同學(xué)涂布了三個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)是209、240和250，取平均值233；丙同學(xué)涂布了三個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)是21、212和256，取平均值163；在三位同學(xué)的統(tǒng)計中，

同學(xué)的統(tǒng)計是正確的，據(jù)此計算，每克土壤樣品中含細菌

個。2.33×109乙歸納總結(jié)考向二目標微生物的篩選與鑒定3.(2023·廣東，10)研究者擬從堆肥中取樣并篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌。根據(jù)堆肥溫度變化曲線(如圖)和選擇培養(yǎng)基篩選原理來判斷，下列最可能篩選到目標菌的條件組合是A.a點時取樣、尿素氮源培養(yǎng)基B.b點時取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基C.b點時取樣、蛋白胨氮源培養(yǎng)基D.c點時取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基√遷移應(yīng)用評價研究目的是篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌，因此目標菌既要耐高溫，又要能夠高效降解角蛋白，所以應(yīng)在c點時取樣，并且用角蛋白氮源培養(yǎng)基進行選擇培養(yǎng)，D符合題意。4.(2022·江蘇，3)下列是某同學(xué)分離高產(chǎn)脲酶菌的實驗設(shè)計，不合理的是A.選擇農(nóng)田或公園土壤作為樣品分離目的菌株B.在選擇培養(yǎng)基中需添加尿素作為唯一氮源C.適當稀釋樣品是為了在平板上形成單菌落D.可分解酚紅指示劑使其褪色的菌株是產(chǎn)脲酶菌√農(nóng)田或公園土壤中含有較多的產(chǎn)脲酶的微生物，A正確；為了篩選可分解尿素的細菌，配制的培養(yǎng)基應(yīng)選擇尿素作為唯一氮源，能合成脲酶的微生物在該培養(yǎng)基上能生長，B正確；當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，C正確；在細菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會使培養(yǎng)基的pH升高，酚紅指示劑將變紅，因此在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，能對分離的菌種做進一步鑒定，D錯誤?？枷蛉⑸锏姆蛛x與計數(shù)5.(2024·武漢調(diào)研)研究者從溫泉中篩選出能高效產(chǎn)生耐高溫淀粉酶的嗜熱細菌的過程如圖1所示。將得到的嗜熱細菌懸液轉(zhuǎn)接到特定固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到若干菌落后用碘液作顯色處理，結(jié)果如圖2所示。下列說法錯誤的是A.過程①②一般都取

1mL菌液轉(zhuǎn)移B.試管甲、乙都通過無菌水稀釋C.圖2中周圍不顯藍色的菌落含有所需菌種D.過程①②屬于稀釋涂布平板法，能對分離得到的微生物進行計數(shù)√過程①為稀釋過程，一般取1mL菌液轉(zhuǎn)移，過程②為涂布平板過程，一般取0.1mL菌液進行涂布，A錯誤；圖2中周圍不顯藍色的菌落產(chǎn)生的淀粉酶可以在高溫下分解淀粉，所以周圍不顯藍色的菌落含有所需菌種，C正確。項目平板劃線法稀釋涂布平板法分離結(jié)果

關(guān)鍵操作接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線①一系列的梯度稀釋；②涂布平板操作歸納提升兩種純化方法的比較項目平板劃線法稀釋涂布平板法接種用具接種環(huán)涂布器優(yōu)點可以觀察菌落特征，對混合菌進行分離可以計數(shù)，可以觀察菌落特征缺點不能計數(shù)操作復(fù)雜，需要涂布多個平板共同點都要用到固體培養(yǎng)基；都需進行無菌操作；都會在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落，都可用于觀察菌落特征歸納提升6.(經(jīng)典高考題)產(chǎn)脂肪酶酵母可用于含油廢水處理。為篩選產(chǎn)脂肪酶酵母菌株，科研人員開展了相關(guān)研究。請回答下列問題：(1)常規(guī)微生物實驗中，下列物品及其滅菌方法錯誤的是______(填編號)。④編號①②③④物品培養(yǎng)基接種環(huán)培養(yǎng)皿涂布器滅菌方法高壓蒸汽火焰灼燒干熱臭氧(2)稱取1.0g某土壤樣品，轉(zhuǎn)入99mL無菌水中，制備成菌懸液，經(jīng)__________后，獲得細胞密度不同的菌懸液。分別取0.1mL菌懸液涂布在固體培養(yǎng)基上，其中10倍稀釋的菌懸液培養(yǎng)后平均長出了46個酵母菌落，則該樣本中每克土壤約含酵母菌__________________個。等比稀釋4.6×105(或460000)利用稀釋涂布平板法統(tǒng)計活菌數(shù)目時，需要將制備的菌懸液進行等比稀釋，以獲得細胞密度不同的菌懸液，一般來說，菌落數(shù)為30～300的平板最適于計數(shù)。0.1mL菌懸液中含有46個酵母菌落，則1mL菌懸液中含有460個酵母菌落；1.0g土壤樣品首先稀釋100倍，然后稀釋10倍，共稀釋了1000倍，因此樣本中每克土壤約含酵母菌460×1000＝4.6×105(個)。(3)為了進一步提高酵母菌產(chǎn)酶能力，對分離所得的菌株，采用射線輻照進行______育種。將輻照處理后的酵母菌涂布在以______為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時間后，按照菌落直徑大小進行初篩，選擇直徑______的菌落，純化后獲得A、B兩突變菌株。誘變脂肪較大采用射線輻照引起酵母菌基因突變，此種方法屬于誘變育種。檢查誘變酵母菌產(chǎn)脂肪酶的能力，需要把酵母菌接種到以脂肪為唯一碳源的培養(yǎng)基上，按照產(chǎn)生菌落直徑大小進行初步篩選，直徑大的說明產(chǎn)酶能力強，利用的脂肪(碳源)多，直徑小的說明產(chǎn)酶能力弱，利用的脂肪(碳源)少。_____________________________________________。(4)在處理含油廢水的同時，可獲得單細胞蛋白，實現(xiàn)污染物資源化。為評價A、B兩菌株的相關(guān)性能，進行了培養(yǎng)研究，結(jié)果如圖。據(jù)圖分析，應(yīng)選擇菌株_____進行后續(xù)相關(guān)研究，理由是_____________________B該菌株增殖速度快，單細胞蛋白產(chǎn)量高；降解脂肪能力強，凈化效果好通過分析題圖可知，相同時間內(nèi)，菌株B細胞密度大，說明該菌株增殖速度快，單細胞蛋白產(chǎn)量高；相同時間內(nèi)，菌株B利用的脂肪多，脂肪剩余量少，說明該菌株降解脂肪的能力強，凈化效果好。一、過教材1.下列有關(guān)微生物培養(yǎng)基的成分與配制過程的相關(guān)說法，正確的是A.培養(yǎng)基中添加的牛肉膏可為微生物提供碳源、氮源和維生素等B.與液體培養(yǎng)基相比，固體培養(yǎng)基含有瓊脂成分C.培養(yǎng)硝化細菌時，培養(yǎng)基中需要加氮源，不需要加入碳源D.為防止雜菌污染，滅菌后的培養(yǎng)基應(yīng)立即倒入培養(yǎng)皿中并蓋上皿蓋，

待冷卻后倒置E.在培養(yǎng)細菌時，需要將培養(yǎng)基調(diào)至中性或弱酸性F.配制培養(yǎng)基過程中應(yīng)先調(diào)pH再進行高壓蒸汽滅菌√√√√硝化細菌是自養(yǎng)生物，可以利用環(huán)境中的CO2，C正確；剛滅菌的培養(yǎng)基需冷卻到50℃左右才能倒平板，D錯誤；在培養(yǎng)細菌時，需要將培養(yǎng)基調(diào)至中性或弱堿性，E錯誤。2.獲得純凈微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵。下列關(guān)于無菌操作的敘述，錯誤的是A.牛奶可使用巴氏消毒法，其優(yōu)點是能夠殺死全部微生物，保留牛奶風(fēng)味B.在接種箱或超凈工作臺的使用過程中，可用紫外線照射30min來進行消毒C.灼燒滅菌的對象可以是金屬用具和玻璃器皿，在酒精燈火焰充分燃燒層進行D.高壓蒸汽滅菌時的滅菌條件通常是100kPa121℃，15～30minE.若培養(yǎng)皿蓋和培養(yǎng)皿底之間濺有培養(yǎng)基，則不宜用此培養(yǎng)皿培養(yǎng)大腸桿菌F.倒平板時應(yīng)該把培養(yǎng)皿蓋完全打開，以免培養(yǎng)基濺到培養(yǎng)皿蓋上G.倒平板后，對空白培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，可檢測培養(yǎng)基是否被污染H.接種前后接種環(huán)都必須灼燒滅菌I.倒平板和接種操作都需要在酒精燈的火焰附近進行√√√牛奶可使用巴氏消毒法，其優(yōu)點是能夠殺死牛奶中的絕大多數(shù)微生物，并且不破壞牛奶的營養(yǎng)成分，A錯誤；在接種箱或超凈工作臺使用之前，可用紫外線照射30min來進行消毒，B錯誤；為防止空氣中的雜菌落入培養(yǎng)皿中，倒平板時不能把培養(yǎng)皿蓋完全打開，正確的操作是將培養(yǎng)皿打開一條稍大于錐形瓶瓶口的縫隙，F(xiàn)錯誤。3.下列有關(guān)微生物分離、純化、計數(shù)及培養(yǎng)的敘述，錯誤的是A.平板劃線法接種時不能劃破培養(yǎng)基，第3次劃線應(yīng)從第2次劃線的末端

開始B.平板劃線法接種時，若在平板上劃線4個區(qū)，則需灼燒接種環(huán)5次C.用涂布器蘸取少量菌液滴加在培養(yǎng)基表面，涂布時可轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿，使

菌液分布均勻D.在篩選產(chǎn)纖維素酶的微生物時，含纖維素和剛果紅的固體培養(yǎng)基既是

選擇培養(yǎng)基也是鑒別培養(yǎng)基E.接種后需立即倒置培養(yǎng)以避免皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基造成污染√√F.對培養(yǎng)皿進行編號或?qū)N進行標注時，應(yīng)使用記號筆在皿底標記G.菌落的大小、顏色、隆起程度等特征都可作為菌種鑒定的依據(jù)H.同一稀釋度下應(yīng)至少對3個平板進行重復(fù)計數(shù)，然后求平均值I.利用顯微鏡直接計數(shù)，統(tǒng)計的結(jié)果一般是活菌數(shù)和死菌數(shù)的總和J.用平板劃線法和稀釋涂布平板法進行微生物計數(shù)時，所得數(shù)據(jù)往往比

實際數(shù)據(jù)偏小√涂布時，用移液器取0.1mL菌液滴加到培養(yǎng)基表面，而后用涂布器進行涂布，涂布時涂布器可以不動，可轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿，使涂布均勻，C錯誤；接種后需等到菌液被培養(yǎng)基吸收后倒置平板，目的是防止培養(yǎng)皿蓋上的冷凝水滴落，造成污染，同時也能避免培養(yǎng)基中的水分蒸發(fā)過快，E錯誤；因為當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落，故用稀釋涂布平板法進行微生物計數(shù)時，所得數(shù)據(jù)往往比實際數(shù)據(jù)偏小，但用平板劃線法不能對微生物計數(shù)，J錯誤。二、過高考1.(2021·廣東，21節(jié)選)基于菌株H嗜鹽、酸堿耐受能力強等特性，研究人員設(shè)計了一種不需要滅菌的發(fā)酵系統(tǒng)，其培養(yǎng)基鹽濃度設(shè)為60g/L，pH為10，菌株H可正常持續(xù)發(fā)酵60d以上。該系統(tǒng)不需要滅菌的原因是________________________________________________________________________________________________________(答出兩點即可)。2.(2023·全國乙，37節(jié)選)在粉碎的秸稈中接種菌T，培養(yǎng)一段時間后發(fā)現(xiàn)菌T能夠?qū)⒔斩捴械睦w維素大量分解，其原因是

。度為60g/L的條件下，其他雜菌因失水過多而死亡；pH為10的條件下，其他雜菌的酶變性失活，生長繁殖受抑制鹽濃菌T能夠分泌纖維素酶3.(2022·河北，23節(jié)選)枯草芽孢桿菌為好氧微生物，液體培養(yǎng)時應(yīng)采用

(填“靜置”或“搖床震蕩”)培養(yǎng)。培養(yǎng)過程中抽樣檢測活菌數(shù)量時，應(yīng)采用

(填“稀釋涂布平板法”或“顯微鏡直接計數(shù)法”)，其原因是__________________________________________________________________________________________________________________。4.(2022·全國乙，37節(jié)選)用菌株C可產(chǎn)生S，若以制糖廢液作為碳源，為進一步確定生產(chǎn)S的最適碳源濃度，某同學(xué)進行了相關(guān)實驗。請簡要寫出實驗思路：____________________________________________________________________________________________________________________。返回搖床震蕩稀釋涂布平板法

用稀釋涂布平板法在培養(yǎng)基上看到的每一個菌落都來自一個活細胞，而顯微鏡直接計數(shù)法會將死亡的枯草芽孢桿菌也計算在內(nèi)

設(shè)計一系列不同濃度的制糖廢液分別培養(yǎng)菌株C，測定不同濃度制糖廢液中S產(chǎn)量，尋找S產(chǎn)量最大的碳源濃度，確定最適碳源濃度課時精練03單擊此處添加章節(jié)副標題123456789101112答案題號12345678答案ABBDCCCC題號9答案B對一對(1)氮源、無機鹽聚苯乙烯濕熱滅菌(高壓蒸汽滅菌)(2)抑制其他微生物生長的同時保證目的微生物的生長，增加目的微生物的濃度稀釋涂布平板法(3)①YT1、YT2、C1均可降解聚苯乙烯，YT1的降解能力最強，YT2的降解能力最弱②基因重組10.23456789101112答案1(1)高壓蒸汽滅菌在壓力為100kPa、溫度為

121℃的條件下，維持15～30min

(2)搖床振蕩當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個單菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌(3)對含菌株A的發(fā)酵液進行離心上清液和無菌水接種上清液出現(xiàn)抑菌圈，接種無菌水無抑菌圈，則證明菌株A通過分泌某種化學(xué)物質(zhì)來抑制金黃色葡萄球菌的生長繁殖11.23456789101112答案1(1)抗生素會抑制細菌的生長繁殖(2)OFL維生素(3)稀釋涂布平板法菌落數(shù)目穩(wěn)定1.54×1011(4)等量的菌株X，檢測OFL的降解程度12.23456789101112答案1一、選擇題1.(2024·隨州一模)從海水樣本中分離粘質(zhì)沙雷氏菌時，所用的海生菌肉湯培養(yǎng)基的成分如表所示。下列敘述錯誤的是123456789101112答案A.蛋白胨只為粘質(zhì)沙雷氏菌提供碳源，該菌生長需要多種微量元素B.若從牛肉膏、硫酸銨、硝酸鉀中篩選優(yōu)質(zhì)氮源，每次應(yīng)只添加其中一種C.該培養(yǎng)基應(yīng)在滅菌前調(diào)節(jié)pH，其不能用于分離粘質(zhì)沙雷氏菌獲得單菌落D.該培養(yǎng)基添加了NaCl，具有抑制某些微生物生長的作用，屬于選擇培養(yǎng)基蛋白胨5.00g·L－1MgCl25.90g·L－1NaHCO30.16g·L－1酵母提取物1.00g·L－1Na2SO43.24g·L－1KBr0.08g·L－1檸檬酸鐵0.10g·L－1CaCl21.80g·L－1SrCl234.00g·L－1NaCl19.45g·L－1KCl0.55g·L－1H3BO322.00g·L－1√培養(yǎng)基中的蛋白胨可為粘質(zhì)沙雷氏菌提供碳源、氮源和維生素等，A錯誤；篩選最佳氮源時，培養(yǎng)基中每次應(yīng)只添加牛肉膏、硫酸銨、硝酸鉀中的一種，B正確；該培養(yǎng)基應(yīng)在滅菌前調(diào)節(jié)pH，該培養(yǎng)基沒有添加瓊脂，是液體培養(yǎng)基，不能分離出粘質(zhì)沙雷氏菌的單菌落，C正確；選擇培養(yǎng)基是允許特定種類的微生物生長、同時抑制或阻止其他微生物生長的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基中添加了NaCl，能抑制某些不耐鹽的微生物的生長，屬于選擇培養(yǎng)基，D正確。123456789101112答案2.(2024·重慶聯(lián)考)熔噴布的主要成分是聚丙烯，會對環(huán)境造成污染。某科研小組從土壤中分離到一種能分解聚丙烯的細菌。下列說法正確的是A.配制固體培養(yǎng)基時，需要在無菌的環(huán)境中進行B.制備培養(yǎng)基時需要先將培養(yǎng)基的pH調(diào)節(jié)至中性或弱堿性C.從土壤中分離能分解聚丙烯的細菌，可采用平板劃線法進行分離與計數(shù)D.純化培養(yǎng)時，在培養(yǎng)皿皿蓋做標記后倒置在恒溫培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)√123456789101112答案123456789101112配制固體培養(yǎng)基時，不需要在無菌的環(huán)境中進行，因為培養(yǎng)基配制好之后會進行滅菌，A錯誤；平板劃線法只能對微生物進行分離，不能計數(shù)，C錯誤；純化培養(yǎng)時，在培養(yǎng)皿皿底做標記后倒置在恒溫培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)，這樣方便觀察，D錯誤。答案木質(zhì)素降解過程使苯胺藍培養(yǎng)基脫色，脫色圈直徑與菌落直徑比值越大，說明菌落周圍的木質(zhì)素被分解得越多，分解效果越好，B錯誤。3.纖維素、半纖維素、木質(zhì)素參與構(gòu)成植物細胞壁?？蓮陌紫伒哪c道中分離木質(zhì)素分解菌來降解利用木質(zhì)素，已知木質(zhì)素降解過程使苯胺藍培養(yǎng)基脫色。以下說法錯誤的是A.以木質(zhì)素為唯一碳源，用稀釋涂布平板法分離木質(zhì)素分解菌B.脫色圈直徑與菌落直徑比值越小，木質(zhì)素分解菌分解效果越好C.在選擇培養(yǎng)基上挑選出菌落后，再通過平板劃線法進一步純化D.除了白蟻腸道，還可從腐爛的樹皮表面分離出木質(zhì)素分解菌√123456789101112答案組別加入苯濃度/(g·L－1)菌落數(shù)/個菌落密度/(個·L－1)①200幾乎無幾乎無②20601200③2541120④0.2244504.(2024·黃岡一模)某實驗小組通過控制苯濃度，對從污泥處理廠的活性污泥中篩選獲得的苯降解菌進行馴化培養(yǎng)，挑選出合適的培養(yǎng)條件，同時馴化培養(yǎng)出較好的苯降解菌，培養(yǎng)的實驗結(jié)果如表所示。下列有關(guān)敘述錯誤的是123456789101112答案組別加入苯濃度/(g·L－1)菌落數(shù)/個菌落密度/(個·L－1)①200幾乎無幾乎無②20601200③2541120④0.224450A.該實驗中馴化苯降解菌的培養(yǎng)基中應(yīng)該加入適量的瓊脂B.第①組幾乎沒有菌落的原因可能是苯濃度過高對細菌產(chǎn)生了毒性C.第④組菌落數(shù)目少的原因可能是培養(yǎng)基中的碳源的含量不足D.由該實驗可知，20g·L－1的苯濃度是培養(yǎng)苯降解菌的最適濃度123456789101112√答案123456789101112若要培養(yǎng)菌落，通常在培養(yǎng)基中加入適量瓊脂制成固體培養(yǎng)基，A正確；第①組苯濃度過高，可能超出了細菌所能承受的范圍，對細菌產(chǎn)生毒性，抑制其生長和繁殖，導(dǎo)致幾乎沒有菌落，B正確；第④組苯濃度過低，提供的碳源不足，可能無法滿足細菌生長所需，導(dǎo)致菌落數(shù)目少，C正確；僅根據(jù)這幾組實驗數(shù)據(jù)，不能確定20g·L－1的苯濃度就是培養(yǎng)苯降解菌的最適濃度，還需要更多更小濃度梯度的實驗來進一步確定，D錯誤。答案5.(2025·馬鞍山模擬)為檢驗?zāi)称放票ち柚写竽c桿菌含量是否超標，研究小組利用配制的伊紅－亞甲藍瓊脂培養(yǎng)基進行檢測。下列有關(guān)敘述正確的是A.檢測中用到的接種方法為平板劃線法B.配制培養(yǎng)基，高壓蒸汽滅菌后，調(diào)節(jié)pHC.檢測中應(yīng)設(shè)一個不接種的平板作為陰性對照和一個接種大腸桿菌的平

板作為陽性對照D.檢測的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，大腸桿菌在該培養(yǎng)基上會形成紅色且有

金屬光澤的菌落√123456789101112答案123456789101112平板劃線法不能用來計數(shù)，檢測中用到的接種方法為稀釋涂布平板法，A錯誤；配制培養(yǎng)基時，應(yīng)先調(diào)節(jié)pH，再進行高壓蒸汽滅菌，B錯誤；檢測中應(yīng)設(shè)一個不接種的平板作為陰性對照和一個接種大腸桿菌的平板作為陽性對照，以此來對比反映冰激凌中大腸桿菌及其數(shù)量，C正確；檢測的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，大腸桿菌在該培養(yǎng)基上會形成深紫色且有金屬光澤的菌落，D錯誤。答案余垃圾迅速分解為水和二氧化碳。為制備分解有機廚余垃圾的微生物菌劑，某科研小組對兩種菌種進行了最佳接種比例的探究實驗，得出如圖實驗結(jié)果。下列說法錯誤的是6.(2024·三明一模)圓褐固氮菌可獨立固定空氣中的氮氣，且能夠分泌生長素。巨大芽孢桿菌可將有機磷降解為可溶性磷。二者組合可將有機廚123456789101112答案C.處理有機廚余垃圾，兩

種菌種的最佳接種比例

為1∶2D.兩種菌種的組合菌劑還

可制成微生物肥料施用

到土壤中，提高農(nóng)作物

的產(chǎn)量A.圓褐固氮菌和巨大芽孢桿菌在生長過程中都需要氮源B.統(tǒng)計活菌數(shù)量可采用稀釋涂布平板法√123456789101112答案123456789101112答案實驗的因變量是有機垃圾的分解量(以二者的有效菌落數(shù)為指標)，接種量比例為1∶2的有效菌落數(shù)小于接種量為1∶1的有效菌落數(shù)，故接種量比例1∶1時分解有機廚余垃圾的能力強，C錯誤；雖然培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽，圓褐固氮菌的氮源來自空氣中的氮氣，巨大芽孢桿菌的氮源來自培養(yǎng)基，A正確；123456789101112答案芽孢桿菌可將有機磷降解為可溶性磷，二者能為植物提供含N、P的無機鹽和二氧化碳等營養(yǎng)物質(zhì)，故兩菌種的組合菌劑可制成微生物肥料施用到土壤中，提高農(nóng)作物的產(chǎn)量，D正確。植物在生長的過程中要吸收一定量的含N、P的無機鹽和二氧化碳等營養(yǎng)物質(zhì)，圓褐固氮菌可獨立固定空氣中的氮氣，且能夠分泌生長素，巨大7.(2025·四川部分學(xué)校聯(lián)考)工業(yè)生產(chǎn)中常用谷氨酸棒狀桿菌的高絲氨酸營養(yǎng)缺陷型菌作為賴氨酸的發(fā)酵菌株?？蒲腥藛T將紫外線照射處理過的野生谷氨酸棒狀桿菌菌液(原菌液)，經(jīng)過程①(稀釋10倍)接種在培養(yǎng)基甲上培養(yǎng)，菌落數(shù)目不再增加時如圖中甲平板。過程②表示向培養(yǎng)基甲中添加某種物質(zhì)，繼續(xù)培養(yǎng)。下列敘述正確的是123456789101112答案A.菌落A是誘變產(chǎn)生的高絲氨酸營養(yǎng)缺陷型菌種B.培養(yǎng)基甲是一種選擇培養(yǎng)基，過程②向甲中添加賴氨酸C.經(jīng)過程①取0.2mL菌液涂布得到甲平板所示結(jié)果，則原菌液未突變菌

株數(shù)量約為450個/mLD.發(fā)酵結(jié)束后，將過濾得到的固體物質(zhì)進行干燥即可獲得賴氨酸產(chǎn)品√123456789101112答案123456789101112答案野生菌種經(jīng)紫外線照射，與甲平板相比，乙平板上菌落多，說明過程②往培養(yǎng)基中添加的物質(zhì)是絲氨酸，新出現(xiàn)的菌落為高絲氨酸營養(yǎng)缺陷型菌種，即菌落A是野生型菌種，菌落B為高絲氨酸營養(yǎng)缺陷型菌種，A錯誤；結(jié)合圖分析可知，甲平板上只有菌落A，過程②向培養(yǎng)基甲中添加高絲氨酸后出現(xiàn)B菌落，這說明培養(yǎng)基甲中缺少高絲氨酸，是一種選擇培養(yǎng)基，B錯誤；123456789101112答案過程①取0.2mL菌液進行涂布后得到的甲平板上有9個菌落，所以菌液稀釋10倍后每毫升中有未突變的菌株9÷0.2＝45(個)，紫外線照射處理后的菌液中未突變的菌株數(shù)量約為450個/mL，C正確；發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵產(chǎn)品采取適當?shù)奶崛?、分離和純化措施來獲得賴氨酸產(chǎn)品，D錯誤。8.(2024·重慶，13)養(yǎng)殖場糞便是農(nóng)家肥的重要來源，其中某些微生物可使氨氮化合物轉(zhuǎn)化為尿素進而產(chǎn)生NH3，影響畜禽健康。為篩選糞便中能利用氨氮化合物且減少NH3產(chǎn)生的微生物。興趣小組按圖示進行實驗獲得目的菌株，下列敘述正確的是123456789101112答案A.①通常在等比稀釋后用平板

劃線法獲取單個菌落B.②挑取在2種培養(yǎng)基上均能

生長的用于后續(xù)的實驗C.③可通過添加脲酶并檢測活

性，篩選得到甲、乙D.糞便中添加菌株甲比乙更有

利于NH3的減少√123456789101112答案123456789101112答案平板劃線法不需要稀釋，A錯誤；由圖可知，②篩選不能在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上生長，而能在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長的菌株用于后續(xù)的實驗，B錯誤；所篩選出的菌株之所以不能利用尿素，可能是由于不產(chǎn)生脲酶或能分泌脲酶抑制劑，所以③可通過添加脲酶并檢測活性，篩選得到甲、乙，C正確；123456789101112答案由圖可知，甲不產(chǎn)生脲酶而乙可以產(chǎn)生脲酶，且乙同時分泌脲酶抑制劑，糞便中可能還含有其他能產(chǎn)生脲酶的菌株，糞便中添加菌株乙能抑制其他菌株產(chǎn)生的脲酶活性，所以糞便中添加菌株乙比甲更有利于NH3的減少，D錯誤。導(dǎo)致代謝過程中某些合成反應(yīng)不能進行的菌株。如圖是科研人員利用影印法(用無菌絨布輕蓋在已長好菌落的原培養(yǎng)基上，然后不轉(zhuǎn)動任何角度，“復(fù)印”至新的培養(yǎng)基上)初檢某種氨基酸缺陷型菌株的過程。下列相關(guān)說法錯誤的是9.(2024·湖北宜荊荊恩四市聯(lián)考)營養(yǎng)缺陷型菌株是突變后某些酶被破壞，123456789101112答案B.進行②過程的順序是先將絲絨布

“復(fù)印”至完全培養(yǎng)基上，再

“復(fù)印”至基本培養(yǎng)基上C.氨基酸缺陷型菌株應(yīng)從基本培養(yǎng)

基上沒有、完全培養(yǎng)基上對應(yīng)位

置有的菌落中挑選D.統(tǒng)計菌落種類和數(shù)量時要每隔一

定時間觀察統(tǒng)計一次，直到各類

菌落數(shù)目穩(wěn)定為止A.①過程接種方法為稀釋涂布平板法，接種后的培養(yǎng)皿不能立即進行倒置培養(yǎng)123456789101112√答案123456789101112答案進行②過程培養(yǎng)時，為了防止將完全培養(yǎng)基中特定營養(yǎng)成分帶入基本培養(yǎng)基，應(yīng)先將絲絨布“復(fù)印”至基本培養(yǎng)基上，再“復(fù)印”至完全培養(yǎng)基上，B錯誤。二、非選擇題10.(2024·西安一模)聚苯乙烯是一種無色透明的熱塑性塑料，常被用來制作承受開水溫度的一次性容器等。但聚苯乙烯對人體具有一定的致癌性，且聚苯乙烯在自然狀態(tài)下很難被分解，采用填埋的方法對其進行處理會對土壤環(huán)境造成很大的污染。科研人員從黃粉蟲腸道中發(fā)現(xiàn)一些能夠降解聚苯乙烯的微生物，并將之分離出來，相關(guān)過程如圖所示。回答下列問題：123456789101112答案(1)為了獲取能夠降解聚苯乙烯的微生物，培養(yǎng)基中需要加入水、碳源、______________(填2種)等基本成分，其中碳源是__________。配制好的培養(yǎng)基常采用______________________法進行滅菌。123456789101112答案氮源、無機鹽聚苯乙烯濕熱滅菌(高壓蒸汽滅菌)(2)通過選擇培養(yǎng)可以_____________________________________________________________________，從而能夠確保從樣品中分離到能夠降解聚苯乙烯的微生物。將選擇培養(yǎng)獲取的微生物接種在固體培養(yǎng)基上，據(jù)圖分析，圖中的接種方法是_______________。123456789101112答案

抑制其他微生物生長的同時保證目的微生物的生長，增加目的微生物的濃度稀釋涂布平板法題圖中的選擇培養(yǎng)應(yīng)配制以聚苯乙烯為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基，且圖中培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基，因此通過選擇培養(yǎng)可以達到抑制其他微生物生長的同時保證目的微生物的生長，增加目的微生物的濃度的目的。題圖中固體培養(yǎng)基上菌落分布較均勻，可判斷接種方法是稀釋涂布平板法。123456789101112答案(3)科研人員獲取了三株微生物YT1、YT2、C1，將等量的三種微生物分別接種在含聚苯乙烯的液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)60天后檢測聚苯乙烯的降解率，結(jié)果如表所示。123456789101112答案菌株YT1YT2C1聚苯乙烯的降解率/%0.750.390.63①據(jù)表分析，可以得出的實驗結(jié)論是_____________________________________________________________________。YT1的降解能力最強，YT2的降解能力最弱YT1、YT2、C1均可降解聚苯乙烯，題表中實驗自變量為不同菌株，因變量為聚苯乙烯的降解率，根據(jù)數(shù)據(jù)可知，三種不同菌株均可在一定程度上降解聚苯乙烯，其中降解能力大小關(guān)系為YT1＞C1＞YT2。123456789101112答案菌株YT1YT2C1聚苯乙烯的降解率/%0.750.390.63菌株YT1YT2C1聚苯乙烯的降解率/%0.750.390.63②為了進一步培養(yǎng)出更高效的能夠降解聚苯乙烯的微生物，研究人員將YT1和C1菌株混合培養(yǎng)，一段時間后，篩選出C2菌株，其降解率比上述三種菌株高，經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)是菌株C1的基因整合了菌株YT1的部分基因從而提高了對聚苯乙烯的降解效果，該過程發(fā)生的變異是__________?；蛑亟M菌株C1的基因整合了菌株YT1的部分基因產(chǎn)生了C2菌株，C1和YT1中不同基因重新組合，經(jīng)繁殖發(fā)育為新菌株C2，該過程發(fā)生的變異是基因重組。123456789101112答案11.(2024·內(nèi)江一模)金黃色葡萄球菌是一種常見的食源性致病菌，廣泛分布于自然界。某研究人員以金黃色葡萄球菌為指示菌，探究菌株A對金黃色葡萄球菌的抑菌(會出現(xiàn)抑菌圈)機理?；卮鹣铝袉栴}：(1)在培養(yǎng)基制備過程中，對培養(yǎng)基進行滅菌常采用的方法是_________________；使用該方法時，為了達到良好的滅菌效果，除了先要把滅菌鍋內(nèi)原有的冷空氣徹底排除外，還需注意的事項有_________________________________________________________。123456789101112答案高壓蒸汽滅菌度為121℃的條件下，維持15～30min在壓力為100kPa、溫(2)若菌株A為好氧性微生物，為獲得足夠的發(fā)酵液，則需要采用________(填“靜置”或“搖床振蕩”)培養(yǎng)。培養(yǎng)過程中，可采用稀釋涂布平板法計數(shù)活菌數(shù)量，其計數(shù)的原理是_____________________________________________________________________________________________________________________________________________。12345678