《高效液相色譜法》考核試題(含答案)一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共30分）1.高效液相色譜法中，常用的流動(dòng)相是（）A.超純水B.有機(jī)溶劑C.緩沖溶液D.以上都可以答案：D。在高效液相色譜法中，超純水可作為流動(dòng)相的一部分，很多情況下需要與有機(jī)溶劑混合使用；有機(jī)溶劑如甲醇、乙腈等是常用的流動(dòng)相組成成分；緩沖溶液可用于調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值等，也常作為流動(dòng)相。所以以上三種都可以作為高效液相色譜的流動(dòng)相。2.以下哪種檢測器不是高效液相色譜常用的檢測器（）A.紫外-可見檢測器B.熒光檢測器C.質(zhì)譜檢測器D.熱導(dǎo)檢測器答案：D。熱導(dǎo)檢測器是氣相色譜常用的檢測器。紫外-可見檢測器是高效液相色譜最常用的檢測器之一，可檢測具有紫外吸收的物質(zhì)；熒光檢測器適用于具有熒光特性的物質(zhì)；質(zhì)譜檢測器能提供物質(zhì)的分子量和結(jié)構(gòu)信息，在液相色譜中應(yīng)用也越來越廣泛。3.高效液相色譜的分離原理不包括（）A.吸附色譜B.分配色譜C.離子交換色譜D.氣象色譜分離原理答案：D。高效液相色譜的分離原理主要有吸附色譜，利用固定相表面對(duì)不同組分吸附力的差異進(jìn)行分離；分配色譜，基于不同組分在固定相和流動(dòng)相之間的分配系數(shù)不同而分離；離子交換色譜，通過離子交換樹脂上的離子與樣品中離子進(jìn)行交換來實(shí)現(xiàn)分離。而氣象色譜分離原理與高效液相色譜完全不同，它是基于樣品在氣相和固定相之間的分配和吸附等作用。4.在反相高效液相色譜中，固定相和流動(dòng)相的極性關(guān)系是（）A.固定相極性大于流動(dòng)相極性B.固定相極性小于流動(dòng)相極性C.固定相極性等于流動(dòng)相極性D.沒有固定關(guān)系答案：B。反相高效液相色譜的特點(diǎn)就是固定相極性小于流動(dòng)相極性，常用的固定相如十八烷基硅烷鍵合硅膠（ODS）是非極性的，流動(dòng)相常為水與有機(jī)溶劑的混合體系，極性相對(duì)較大。5.高效液相色譜柱的長度一般為（）A.1-5cmB.5-10cmC.10-30cmD.30-50cm答案：C。一般高效液相色譜柱的長度在10-30cm之間，這個(gè)長度范圍能較好地實(shí)現(xiàn)樣品的分離，過短可能分離效果不佳，過長則會(huì)增加分析時(shí)間和柱壓。6.下列關(guān)于高效液相色譜進(jìn)樣方式的說法，錯(cuò)誤的是（）A.手動(dòng)進(jìn)樣B.自動(dòng)進(jìn)樣C.可以采用注射器直接進(jìn)樣D.進(jìn)樣量可以隨意調(diào)節(jié)答案：D。高效液相色譜進(jìn)樣方式有手動(dòng)進(jìn)樣和自動(dòng)進(jìn)樣。手動(dòng)進(jìn)樣可以使用注射器進(jìn)樣，但需要注意進(jìn)樣量的準(zhǔn)確性，不能隨意調(diào)節(jié)，進(jìn)樣量過大可能會(huì)導(dǎo)致色譜峰展寬、柱過載等問題，進(jìn)樣量過小則可能檢測不到信號(hào)。自動(dòng)進(jìn)樣則可以更精確地控制進(jìn)樣量。7.為了提高分離效率，在高效液相色譜中可以采取的措施是（）A.降低柱溫B.增加流速C.減小填料粒徑D.增大進(jìn)樣量答案：C。減小填料粒徑可以增加固定相的比表面積，提高分離效率。降低柱溫可能會(huì)使分離時(shí)間延長，但不一定能提高分離效率；增加流速可能會(huì)導(dǎo)致分離效果變差；增大進(jìn)樣量可能會(huì)引起柱過載，降低分離效率。8.高效液相色譜中，衡量分離效果的參數(shù)是（）A.保留時(shí)間B.峰面積C.分離度D.峰高答案：C。分離度是衡量相鄰兩個(gè)色譜峰分離程度的參數(shù)，分離度越大，說明兩個(gè)峰分離得越好。保留時(shí)間用于定性分析，確定樣品中各組分；峰面積和峰高用于定量分析，與樣品中組分的含量有關(guān)。9.在高效液相色譜中，梯度洗脫是指（）A.改變流動(dòng)相的流速B.改變流動(dòng)相的溫度C.改變流動(dòng)相的組成D.改變固定相的性質(zhì)答案：C。梯度洗脫是指在分離過程中，按一定程序連續(xù)改變流動(dòng)相的組成（如改變有機(jī)溶劑和水的比例），以提高分離效果，特別適用于復(fù)雜樣品的分離。改變流動(dòng)相的流速、溫度和固定相的性質(zhì)不屬于梯度洗脫的范疇。10.高效液相色譜儀中，泵的作用是（）A.輸送流動(dòng)相B.檢測樣品C.分離樣品D.進(jìn)樣答案：A。泵的主要作用是將流動(dòng)相以穩(wěn)定的流速輸送到色譜柱中。檢測樣品是由檢測器完成；分離樣品是在色譜柱中實(shí)現(xiàn)；進(jìn)樣是由進(jìn)樣器完成。11.對(duì)于含有強(qiáng)極性基團(tuán)的樣品，適合采用的高效液相色譜分離模式是（）A.反相色譜B.正相色譜C.離子交換色譜D.凝膠色譜答案：C。含有強(qiáng)極性基團(tuán)的樣品，通常帶有電荷，離子交換色譜利用離子交換樹脂與樣品中離子的交換作用進(jìn)行分離，適合分離這類樣品。反相色譜適用于中等極性到非極性的化合物；正相色譜適用于極性化合物，但對(duì)于強(qiáng)極性基團(tuán)的樣品，離子交換色譜更為合適；凝膠色譜主要根據(jù)分子大小進(jìn)行分離。12.高效液相色譜中，以下哪種物質(zhì)不能作為固定相（）A.硅膠B.活性炭C.十八烷基硅烷鍵合硅膠D.離子交換樹脂答案：B。硅膠是正相色譜常用的固定相；十八烷基硅烷鍵合硅膠是反相色譜常用的固定相；離子交換樹脂是離子交換色譜的固定相?；钚蕴恳话悴挥糜诟咝б合嗌V的固定相，它主要用于吸附分離等其他領(lǐng)域。13.為了保護(hù)高效液相色譜柱，在使用前需要進(jìn)行（）A.老化B.活化C.平衡D.干燥答案：C。在使用高效液相色譜柱前，需要用流動(dòng)相進(jìn)行平衡，使色譜柱內(nèi)的環(huán)境與流動(dòng)相達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)，以保證分離效果的重現(xiàn)性。老化一般是氣相色譜柱的處理方法；活化常用于一些吸附劑的處理；干燥對(duì)于高效液相色譜柱來說并不是必要的預(yù)處理步驟。14.高效液相色譜分析中，峰拖尾可能的原因是（）A.柱溫過高B.進(jìn)樣量過小C.柱污染D.流速過快答案：C。柱污染會(huì)導(dǎo)致色譜柱的性能下降，使峰形變差，出現(xiàn)峰拖尾現(xiàn)象。柱溫過高可能會(huì)使分離效果變差，但一般不會(huì)直接導(dǎo)致峰拖尾；進(jìn)樣量過小可能檢測不到信號(hào)或峰高過低；流速過快可能會(huì)使分離度降低，但不是峰拖尾的主要原因。15.下列關(guān)于高效液相色譜定量分析方法的說法，正確的是（）A.外標(biāo)法不需要標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)B.內(nèi)標(biāo)法不需要標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)C.面積歸一化法要求所有組分都出峰D.外標(biāo)法比內(nèi)標(biāo)法更準(zhǔn)確答案：C。面積歸一化法要求樣品中所有組分都能在色譜圖上出峰，且都能被檢測到，通過各組分峰面積占總峰面積的比例來計(jì)算各組分的含量。外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法都需要標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，外標(biāo)法是用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線來定量，內(nèi)標(biāo)法是加入內(nèi)標(biāo)物來進(jìn)行定量。內(nèi)標(biāo)法可以在一定程度上消除進(jìn)樣誤差等因素的影響，通常比外標(biāo)法更準(zhǔn)確。二、多項(xiàng)選擇題（每題3分，共15分）1.高效液相色譜法的優(yōu)點(diǎn)有（）A.分離效率高B.分析速度快C.靈敏度高D.可分析高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性和熱穩(wěn)定性差的化合物答案：ABCD。高效液相色譜具有分離效率高的特點(diǎn)，能夠?qū)?fù)雜樣品中的各組分有效分離；分析速度相對(duì)較快，可以在較短時(shí)間內(nèi)完成分析；靈敏度高，能夠檢測到微量的樣品；由于不需要樣品氣化，所以可分析高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性和熱穩(wěn)定性差的化合物，而這些化合物用氣相色譜分析可能存在困難。2.高效液相色譜常用的固定相有（）A.硅膠B.氧化鋁C.十八烷基硅烷鍵合硅膠D.離子交換樹脂答案：ABCD。硅膠是正相色譜常用的固定相，可通過表面的硅醇基與樣品分子發(fā)生吸附作用；氧化鋁也可作為固定相，具有一定的吸附性能；十八烷基硅烷鍵合硅膠是反相色譜最常用的固定相；離子交換樹脂用于離子交換色譜的固定相。3.影響高效液相色譜分離效果的因素有（）A.流動(dòng)相組成B.柱溫C.流速D.固定相性質(zhì)答案：ABCD。流動(dòng)相組成會(huì)影響樣品在固定相和流動(dòng)相之間的分配系數(shù)，從而影響分離效果；柱溫會(huì)影響樣品分子的擴(kuò)散速度和固定相的性能，對(duì)分離有一定影響；流速過快或過慢都會(huì)影響分離度；固定相的性質(zhì)，如極性、粒徑等，直接決定了分離的選擇性和效率。4.高效液相色譜的檢測器類型包括（）A.紫外-可見檢測器B.熒光檢測器C.示差折光檢測器D.電化學(xué)檢測器答案：ABCD。紫外-可見檢測器是最常用的檢測器之一，可檢測具有紫外吸收的物質(zhì)；熒光檢測器適用于具有熒光特性的物質(zhì)；示差折光檢測器基于樣品與流動(dòng)相折光率的差異進(jìn)行檢測，通用性較強(qiáng)；電化學(xué)檢測器可檢測具有電化學(xué)活性的物質(zhì)。5.在高效液相色譜分析中，正確的操作有（）A.進(jìn)樣前對(duì)樣品進(jìn)行過濾B.定期清洗進(jìn)樣器和泵C.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后用純水沖洗色譜柱D.根據(jù)樣品性質(zhì)選擇合適的流動(dòng)相和固定相答案：ABD。進(jìn)樣前對(duì)樣品進(jìn)行過濾可以防止雜質(zhì)進(jìn)入色譜柱，損壞色譜柱；定期清洗進(jìn)樣器和泵可以保證儀器的正常運(yùn)行和分析結(jié)果的準(zhǔn)確性；應(yīng)根據(jù)樣品性質(zhì)選擇合適的流動(dòng)相和固定相，以獲得良好的分離效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，不能直接用純水沖洗反相色譜柱，因?yàn)榧兯赡軙?huì)使固定相塌陷，一般需要用含有一定比例有機(jī)溶劑的流動(dòng)相沖洗。三、判斷題（每題2分，共20分）1.高效液相色譜只能分析液體樣品。（）答案：錯(cuò)誤。高效液相色譜主要分析液體樣品，但對(duì)于固體樣品可以通過溶解等方式制成溶液后進(jìn)行分析，對(duì)于氣體樣品也可以通過吸收等方法轉(zhuǎn)化為液體樣品進(jìn)行分析。2.紫外-可見檢測器可以檢測所有的化合物。（）答案：錯(cuò)誤。紫外-可見檢測器只能檢測具有紫外吸收的化合物，對(duì)于一些不具有紫外吸收的化合物，如飽和烴類等，無法用該檢測器檢測。3.高效液相色譜的柱壓越高，分離效果越好。（）答案：錯(cuò)誤。柱壓過高可能會(huì)對(duì)色譜柱造成損害，而且柱壓與分離效果之間并沒有直接的必然聯(lián)系。分離效果主要取決于固定相、流動(dòng)相、柱溫等因素，適當(dāng)?shù)闹鶋河兄诒ＷC分離的進(jìn)行，但過高的柱壓可能會(huì)導(dǎo)致峰展寬等問題。4.梯度洗脫適用于所有類型的樣品分析。（）答案：錯(cuò)誤。梯度洗脫適用于復(fù)雜樣品的分析，對(duì)于一些簡單樣品，等度洗脫可能就可以滿足分離要求，而且梯度洗脫需要更復(fù)雜的儀器和操作，成本相對(duì)較高。5.高效液相色譜進(jìn)樣量越大，檢測靈敏度越高。（）答案：錯(cuò)誤。進(jìn)樣量過大可能會(huì)導(dǎo)致柱過載，使色譜峰展寬、分離度下降，反而影響檢測效果。在一定范圍內(nèi)，適當(dāng)增加進(jìn)樣量可以提高檢測靈敏度，但超過一定限度則會(huì)產(chǎn)生負(fù)面影響。6.離子交換色譜主要用于分離離子型化合物。（）答案：正確。離子交換色譜利用離子交換樹脂與樣品中離子的交換作用進(jìn)行分離，主要適用于分離離子型化合物，如有機(jī)酸、有機(jī)堿、無機(jī)離子等。7.高效液相色譜儀中的泵可以輸送不同組成的流動(dòng)相。（）答案：正確。泵的作用是輸送流動(dòng)相，通過梯度洗脫裝置，可以實(shí)現(xiàn)不同組成流動(dòng)相的連續(xù)輸送，以滿足不同的分離需求。8.凝膠色譜主要根據(jù)樣品分子的極性進(jìn)行分離。（）答案：錯(cuò)誤。凝膠色譜主要根據(jù)樣品分子的大小進(jìn)行分離，分子量大的分子不能進(jìn)入凝膠孔，先流出柱子，分子量小的分子可以進(jìn)入凝膠孔，后流出柱子。9.高效液相色譜分析中，保留時(shí)間相同的物質(zhì)一定是同一種物質(zhì)。（）答案：錯(cuò)誤。保留時(shí)間相同的物質(zhì)可能是同一種物質(zhì)，但也可能是不同物質(zhì)在該色譜條件下具有相同的保留行為。為了準(zhǔn)確鑒定物質(zhì)，還需要結(jié)合其他方法，如質(zhì)譜等進(jìn)行確認(rèn)。10.高效液相色譜柱可以長期保存在純水中。（）答案：錯(cuò)誤。對(duì)于反相色譜柱，長期保存在純水中可能會(huì)使固定相塌陷，影響色譜柱的性能。一般反相色譜柱應(yīng)保存在含有一定比例有機(jī)溶劑（如甲醇或乙腈）的溶液中。四、簡答題（每題10分，共20分）1.簡述高效液相色譜法的基本原理。答：高效液相色譜法是一種以液體為流動(dòng)相的分離分析方法。其基本原理基于不同組分在固定相和流動(dòng)相之間的分配、吸附、離子交換等作用的差異。當(dāng)樣品被注入到流動(dòng)相中，隨著流動(dòng)相進(jìn)入色譜柱，由于固定相的存在，樣品中的各組分在固定相和流動(dòng)相之間進(jìn)行多次分配或吸附-解吸過程。不同組分與固定相的相互作用強(qiáng)弱不同，導(dǎo)致它們?cè)谏V柱中的遷移速度不同。與固定相相互作用強(qiáng)的組分遷移速度慢，保留時(shí)間長；與固定相相互作用弱的組分遷移速度快，保留時(shí)間短。這樣，各組分就會(huì)按一定的順序從色譜柱中流出，進(jìn)入檢測器進(jìn)行檢測，從而實(shí)現(xiàn)樣品中各組分的分離和分析。例如，在反相高效液相色譜中，固定相是非極性的（如十八烷基硅烷鍵合硅膠），流動(dòng)相是極性的（如水和有機(jī)溶劑的混合液），極性小的組分在固定相上的保留較強(qiáng)，后流出；極性大的組分在固定相上的保留較弱，先流出。2.請(qǐng)列舉三種高效液相色譜常用的定量分析方法，并簡述其原理。答：（1）外標(biāo)法：外標(biāo)法是一種常用的定量分析方法。其原理是先配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在相同的色譜條件下進(jìn)行分析，得到標(biāo)準(zhǔn)溶液中各組分的峰面積或峰高。然后以峰面積或峰高為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。在分析樣品時(shí)，在相同的色譜條件下進(jìn)樣，得到樣品中待測組分的峰面積或峰高，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線查出待測組分的濃度。外標(biāo)法操作簡單，但要求進(jìn)樣量準(zhǔn)確，且分析條件要穩(wěn)定，否則會(huì)影響定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。（2）內(nèi)標(biāo)法：內(nèi)標(biāo)法是在樣品中加入一種內(nèi)標(biāo)物，內(nèi)標(biāo)物應(yīng)與樣品中各組分性質(zhì)相近，且能與各組分完全分離。先配制含有一定濃度內(nèi)標(biāo)物的標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)樣分析后，得到標(biāo)準(zhǔn)溶液中待測組分和內(nèi)標(biāo)物的峰面積或峰高，計(jì)算它們的峰面積比或峰高比。再以峰面積比或峰高比為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液中待測組分的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。分析樣品時(shí)，同樣加入相同量的內(nèi)標(biāo)物，進(jìn)樣分析得到樣品中待測組分和內(nèi)標(biāo)物的峰面積比或峰高比，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算待測組分的濃度。內(nèi)標(biāo)法可以在一定程度上消除進(jìn)樣誤差和分析條件波動(dòng)的影響，提高定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。（3）面積歸一化法：面積歸一化法要求樣品中所有組分都能在色譜圖上出峰，且都能被檢測到。其原理是通過測量各組分的峰面積，計(jì)算各組分峰面積占總峰面積的比例，以此比例作為各組分的含量。該方法簡單快捷，但要求所有組分都能出峰并準(zhǔn)確檢測，適用于樣品中各組分性質(zhì)相似、含量相差不大的情況。五、論述題（15分）論述高效液相色譜法在藥物分析中的應(yīng)用及優(yōu)勢。答：高效液相色譜法在藥物分析中具有廣泛的應(yīng)用和顯著的優(yōu)勢，具體如下：應(yīng)用1.原料藥的質(zhì)量控制：在原料藥的生產(chǎn)過程中，高效液相色譜法可用于檢測原料藥的純度和雜質(zhì)含量。例如，在合成藥物的過程中，可能會(huì)產(chǎn)生一些中間體、副產(chǎn)物等雜質(zhì)，通過高效液相色譜法可以準(zhǔn)確地分離和檢測這些雜質(zhì)，確保原料藥的質(zhì)量符合標(biāo)準(zhǔn)?？梢圆捎猛鈽?biāo)法或內(nèi)標(biāo)法對(duì)原料藥進(jìn)行定量分析，確定其含量是否達(dá)標(biāo)。2.藥物制劑的分析：對(duì)于藥物制劑，如片劑、膠囊、注射劑等，高效液相色譜法可用于分析其中藥物的含量均勻度、溶出度等。在含量均勻度檢測中，可以準(zhǔn)確測定每片或每粒制劑中藥物的含量；在溶出度檢測中，通過不同時(shí)間點(diǎn)取樣，用高效液相色譜法分析藥物的溶出量，評(píng)估制劑的質(zhì)量和有效性。3.藥物代謝研究：在藥物代謝研究中，高效液相色譜法可以與質(zhì)譜等檢測器聯(lián)用，分析藥物在體內(nèi)的代謝產(chǎn)物。通過分離和鑒定代謝產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)和含量，了解藥物在體內(nèi)的代謝途徑和過程，為藥物的研發(fā)和臨床應(yīng)用提供重要信息。例如，研究某種藥物在人體內(nèi)的代謝產(chǎn)物，有助于發(fā)現(xiàn)新的活性成分或了解藥物的毒性機(jī)制。4.藥物穩(wěn)定性研究：藥物在儲(chǔ)存和使用過程中可能會(huì)發(fā)生降解等變化，高效液相色譜法可以用于監(jiān)測藥物的穩(wěn)定性。通過定期對(duì)藥物樣品進(jìn)行分析，檢測藥物的含量變化