ICS65.020

CCSB61

DB3705

東營(yíng)市地方標(biāo)準(zhǔn)

DB3705/T17—2024

白榆組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程

TechnicalRegulationsforTissueCultureandShootsBreedingofUlmuspumilaL

2024-08-09發(fā)布2024-09-09實(shí)施

東營(yíng)市市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

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目次

前言.....................................................................................II

1范圍..................................................................................1

2規(guī)范性引用文件........................................................................1

3術(shù)語(yǔ)和定義............................................................................1

4組培工具及材料的清洗和滅菌............................................................2

4.1實(shí)驗(yàn)器皿、工具的清洗..............................................................2

4.2消毒滅菌..........................................................................2

5培養(yǎng)基的配制..........................................................................2

5.1母液配制及貯存....................................................................2

5.2培養(yǎng)基配制及保存..................................................................3

6外植體選擇與滅菌......................................................................3

6.1外植體選擇........................................................................3

6.2外植體滅菌........................................................................3

7初代培養(yǎng)..............................................................................4

7.1初代培養(yǎng)基........................................................................4

7.2外植體接種........................................................................4

7.3培養(yǎng)..............................................................................4

8增殖培養(yǎng)..............................................................................4

8.1增殖培養(yǎng)基........................................................................4

8.2外植體接種........................................................................4

8.3培養(yǎng)..............................................................................4

8.4嫩莖復(fù)壯..........................................................................4

9生根培養(yǎng)..............................................................................4

9.1生根培養(yǎng)基........................................................................4

9.2外植體接種........................................................................4

9.3培養(yǎng)..............................................................................5

10煉苗與移栽...........................................................................5

10.1煉苗.............................................................................5

10.2溫室煉苗.........................................................................5

10.3移栽.............................................................................5

11檔案管理.............................................................................5

附錄A（資料性）各種滅菌方法及適用范圍表................................................6

附錄B（資料性）MS培養(yǎng)基母液和生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配制表.........................................7

附錄C（資料性）組培苗移栽前苗木分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)................................................9

Ⅰ

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前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起

草。

請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專(zhuān)利的責(zé)任。

本文件由東營(yíng)市自然資源和規(guī)劃局提出、歸口并組織實(shí)施。

本文件起草單位：山東省林業(yè)科學(xué)研究院、東營(yíng)市濕地保護(hù)中心、東營(yíng)市濕地城市建設(shè)推進(jìn)中心、東

營(yíng)市勝景林業(yè)有限公司、東營(yíng)市自然資源和規(guī)劃局河口分局規(guī)劃服務(wù)中心。

本文件主要起草人：魏海霞、徐麗、于愛(ài)水、楊慶山、王振猛、周健、李永濤、王莉莉、張子龍、商

金杰、李雙云、龐彩紅、舒秀閣、何明明、李宏藝、盧小軍、李偉、郝木征、董曉、楊靜、張慶國(guó)、王潔、

劉全全、陳紀(jì)香、孫兆楠、王銀娟、唐輝、秦麗君、任愛(ài)鳳、王健、魏超、燕友福、崔曉東。

Ⅱ

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白榆組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了白榆（UlmuspumilaL.）組織培養(yǎng)育苗過(guò)程中的術(shù)語(yǔ)和定義、實(shí)驗(yàn)器皿及材料的清洗

和滅菌、培養(yǎng)基的配制、外植體選擇與處理、初代培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗與移栽、檔案管理等

技術(shù)要求。

本文件適用于白榆組織培養(yǎng)育苗。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文

件。

GB6001育苗技術(shù)規(guī)程

LY/T1000容器育苗技術(shù)

LY/T1882林木組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

3.1

初代培養(yǎng)primaryculture

初代培養(yǎng)是指直接從植株取下細(xì)胞、組織和器官后立即進(jìn)行培養(yǎng)。

3.2

增殖培養(yǎng)multiplicationculture

單個(gè)外植體在增殖培養(yǎng)基中不斷分化產(chǎn)生多個(gè)不定芽或胚狀體，以達(dá)到快速繁殖的目的。

3.3

復(fù)壯培養(yǎng)strongseedlingsculture

將增殖培養(yǎng)過(guò)程中出現(xiàn)的生長(zhǎng)勢(shì)減弱的的不定芽進(jìn)行復(fù)壯，以備生根培養(yǎng)的培養(yǎng)方法。

3.4

生根培養(yǎng)rootingculture

提供組培苗生根所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)使其生根，以備后續(xù)出苗移栽的培養(yǎng)方法。

3.5

煉苗seedlingsdomestication

指在組培生根苗移栽至保護(hù)地育苗之前，采取打開(kāi)組培容器進(jìn)行通風(fēng)、降溫、適當(dāng)控水等措施對(duì)幼苗

鍛煉的過(guò)程，使其定植后能夠迅速適應(yīng)容器外界的不良環(huán)境條件，縮短緩苗時(shí)間，增強(qiáng)對(duì)外界環(huán)境的適應(yīng)

與抵抗能力。

3.6

移栽transplanting

1

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又稱(chēng)移植，指把在苗床中的幼苗移栽到田間生長(zhǎng)。

4組培工具及材料的清洗和滅菌

4.1實(shí)驗(yàn)器皿、工具的清洗

4.1.1浸泡

新的玻璃器皿（培養(yǎng)瓶、試管、培養(yǎng)皿、量筒等）先放入洗潔精或洗衣粉溶液中浸泡，沖洗，再置于

1%～2%的鹽酸溶液中浸泡過(guò)夜；用過(guò)的培養(yǎng)瓶須先將瓶外字跡擦除干凈再浸泡；污染的培養(yǎng)瓶須先將瓶

外字跡擦除干凈再進(jìn)行高壓滅菌，然后倒掉瓶?jī)?nèi)污染物再浸泡；浸泡時(shí)間一般需過(guò)夜。

4.1.2洗刷

清洗玻璃器皿及接種工具上的培養(yǎng)基，洗凈后自來(lái)水沖洗3遍~5遍，后晾干備用。

4.1.3清潔標(biāo)準(zhǔn)

瓶壁無(wú)字跡，容器內(nèi)外壁無(wú)斑點(diǎn)、污跡，器皿內(nèi)外不可掛有水珠。

4.2消毒滅菌

4.2.1操作室、接種室及培養(yǎng)室熏蒸、輻射滅菌

操作室、接種室每3個(gè)月用甲醛(HCHO，10mL/m3)和高錳酸鉀(KMnO4，5g/m3)混合熏蒸2d~3d，并

保持室內(nèi)密閉。試驗(yàn)結(jié)束每天用過(guò)氧乙酸、84消毒液等噴灑清潔地面。接種前應(yīng)用紫外燈照射20min~30min。

超凈工作臺(tái)接種前用紫外燈照射20min~30min，并用75％酒精噴灑和擦拭臺(tái)面；定期清洗超凈工作臺(tái)的

外部過(guò)濾膜以確保過(guò)濾膜清潔，并用紫外燈照射滅菌。

4.2.2器皿、器械、培養(yǎng)瓶及培養(yǎng)基滅菌

器皿、器械、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)基及添加劑等滅菌可采用濕熱、干熱、灼燒、過(guò)濾及擦拭等滅菌方法，具

體適用范圍參照附錄A。

5培養(yǎng)基的配制

5.1母液配制及貯存

5.1.1母液配制

5.1.1.1培養(yǎng)基母液配制

培養(yǎng)基母液按照附錄B表B.1配制。

5.1.1.2植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)母液配制

植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)的母液配制方法參照附錄B表B.1。

5.1.2母液的保存

母液保存參照附錄B相關(guān)內(nèi)容，貼好標(biāo)簽，注明母液的名稱(chēng)、濃度、溶劑類(lèi)型、配制日期和配制人等

信息，置于4℃冰箱保存，保存期不超過(guò)3個(gè)月。

2

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5.2培養(yǎng)基配制及保存

5.2.1配制前準(zhǔn)備

根據(jù)培養(yǎng)基類(lèi)型準(zhǔn)備好各類(lèi)母液、瓊脂、白砂糖、去離子水和培養(yǎng)瓶等，同時(shí)準(zhǔn)備好移液器、量筒、

量杯、天平、pH計(jì)等工具。

5.2.2配制定容

先將白砂糖充分?jǐn)嚢柰耆芙?，后加入母液，（不耐高溫滅菌的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑需用過(guò)濾滅菌方式加

入），加入去離子水充分混勻并定容。

5.2.3pH值調(diào)節(jié)

充分?jǐn)嚢韬?，用pH計(jì)測(cè)定初始pH值，然后用1mol/L的HCl、KOH或NaOH調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值至5.8~6.0。

5.2.4瓊脂溶解

調(diào)節(jié)好pH值后加入瓊脂，加熱煮至瓊脂全部融化。

5.2.5分裝

根據(jù)不同需求定量分裝入培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)基厚度約2cm。分裝時(shí)避免氣泡，避免將培養(yǎng)基沾在培養(yǎng)瓶

瓶口，待內(nèi)壁水汽吹干后再蓋好瓶蓋或捆綁封口膜，對(duì)培養(yǎng)基編號(hào)。

5.2.6滅菌

按照濕熱滅菌方法的要求進(jìn)行操作，操作要求參照濕熱滅菌方法，及時(shí)進(jìn)行高溫高壓滅菌，冷卻備用。

5.2.7貯存

按培養(yǎng)基種類(lèi)和配制先后分門(mén)別類(lèi)貯存在培養(yǎng)基儲(chǔ)藏室內(nèi)。配制好的培養(yǎng)基宜放置1d后再用，且貯存

時(shí)間不應(yīng)超過(guò)15d。

6外植體選擇與滅菌

6.1外植體選擇

4月至5月份，幼齡單株作為母體，挑選健康幼態(tài)的芽或莖段作為外植體。晴天，剪取生長(zhǎng)健壯、無(wú)病

蟲(chóng)害的當(dāng)年生半木質(zhì)化小枝，將枝條保濕保存盡快帶回組培室。

6.2外植體滅菌

6.2.1沖洗

將帶回的小枝剪除葉片，莖段以頂尖向下10cm以?xún)?nèi)部位的為好，剪口離芽0.5cm以上為好。先用肥皂

水洗凈表面灰塵和菌體，洗凈后，流水沖洗0.5h~1.0h。

6.2.2滅菌

將清洗后的莖段剪至1.5cm~2cm，置超凈工作臺(tái)上，用75%酒精浸泡30s，期間緩慢晃動(dòng)，用無(wú)菌

水沖洗3次，倒入0.1%含有吐溫的升汞溶液中輕晃5min~8min，無(wú)菌水沖洗5次，取出莖段，用無(wú)菌濾

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紙吸去表面水分。

7初代培養(yǎng)

7.1初代培養(yǎng)基

初代培養(yǎng)使用MS培養(yǎng)基+白砂糖20g/L+瓊脂6.5g/L，pH5.8~6.0。

7.2外植體接種

快速將滅菌莖段的兩端分別切掉2mm~3mm，余下的莖段含1個(gè)~2個(gè)側(cè)芽。將莖段快速放入初代培養(yǎng)

基中，每瓶培養(yǎng)基均勻放置5個(gè)外植體，芽端在上，蓋緊瓶蓋或捆綁封口膜，標(biāo)明編號(hào)，進(jìn)行無(wú)菌苗的培

養(yǎng)。

7.3培養(yǎng)

置于溫度25℃±2℃，光照強(qiáng)度2000lx~3000lx，相對(duì)濕度75%~85%，光照時(shí)間14h的環(huán)境下培養(yǎng)。

發(fā)現(xiàn)有污染的瓶苗，及時(shí)轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基上；霉菌孢子產(chǎn)生后，不要打開(kāi)瓶蓋，直接處理。培養(yǎng)15d~20

d時(shí)，莖段上芽萌動(dòng)，莖尖伸長(zhǎng)，基部產(chǎn)生少量愈傷組織。當(dāng)腋芽生長(zhǎng)到3cm~5cm時(shí)，將其切段轉(zhuǎn)至增殖

培養(yǎng)。

8增殖培養(yǎng)

8.1增殖培養(yǎng)基

增殖培養(yǎng)使用MS改良培養(yǎng)基+6-BA0.3mg/L+KT0.1mg/L+白砂糖30g/L+瓊脂6.5g/L，pH5.8~6.0。

8.2外植體接種

在無(wú)菌環(huán)境下，將誘導(dǎo)出的新梢，切成帶1個(gè)~2個(gè)腋芽的長(zhǎng)2cm左右的莖段，快速放置到增殖培養(yǎng)基

上，每瓶培養(yǎng)基均勻放置5個(gè)外植體，蓋緊瓶蓋或捆綁封口膜，標(biāo)明編號(hào)，進(jìn)行無(wú)菌苗的增殖培養(yǎng)。

8.3培養(yǎng)

培養(yǎng)條件同7.3。25d~30d繼代一次，繁殖系數(shù)以5~8較為適宜。繼代時(shí)將0.5cm~2.5cm的叢生芽分株

切下，選擇1cm以上的增殖芽接種到增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)。

8.4嫩莖復(fù)壯

隨著增殖倍數(shù)增加，需要對(duì)弱小的嫩莖進(jìn)行復(fù)壯。復(fù)壯培養(yǎng)使用MS培養(yǎng)基+白砂糖30g/L+瓊脂6.5g/L，

pH5.8~6.0。將0.5cm~2.5cm的叢生芽分株切下，選擇1cm以上的增殖芽接種到復(fù)壯培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)

20d~25d。

9生根培養(yǎng)

9.1生根培養(yǎng)基

生根培養(yǎng)使用MS培養(yǎng)基+IBA0.01mg/L+白砂糖20g/L+瓊脂6.5g/L，pH5.8~6.0。

9.2外植體接種

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快速切掉經(jīng)復(fù)壯培養(yǎng)的組培苗基部的愈傷組織，留2cm~3cm的嫩稍，接種到生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，根

據(jù)培養(yǎng)瓶大小均勻放置外植體，蓋緊瓶蓋或捆綁封口膜，標(biāo)明編號(hào)。

9.3培養(yǎng)

培養(yǎng)條件同7.3。培養(yǎng)10d~15d時(shí)，組培苗開(kāi)始產(chǎn)生不定根。

10煉苗與移栽

10.1煉苗

組培苗長(zhǎng)出2條~3條不定根，根長(zhǎng)至1.0cm左右時(shí)，敞口煉苗1d~2d。煉苗過(guò)程需注意補(bǔ)水，防止幼苗

缺水干枯。光照強(qiáng)度1500lx~2000lx左右，溫度保持20℃~30℃，相對(duì)濕度80%~90%。

10.2溫室煉苗

洗凈根部瓊脂，將生根苗置溫室苗床煉苗2周，初期需用遮陽(yáng)網(wǎng)遮陰，半開(kāi)瓶鍛煉，一周后逐步將瓶

蓋去除。

10.3移栽

10.3.1分級(jí)

根據(jù)生根苗高和根生長(zhǎng)情況進(jìn)行移栽前的分級(jí)。分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)參照附錄C。

10.3.2移栽

根部洗凈后移栽于營(yíng)養(yǎng)缽或苗床上，移栽時(shí)動(dòng)作盡量輕緩，避免對(duì)根的損傷?；|(zhì)提前用800倍~1000

倍液多菌靈或甲基托布津消毒滅菌?；|(zhì)采用細(xì)沙：營(yíng)養(yǎng)土=1:1，添加少量木霉菌或芽孢桿菌菌劑，提高

移栽苗成活率。移栽完成后澆一遍透水。當(dāng)小苗長(zhǎng)至10cm即可出苗，期間注意溫度在20℃~25℃，濕度

在80%~90%。

10.3.3病害防治

移栽后每隔5天噴施多菌靈800倍液或70%甲基托布津。

10.3.4大田移栽

小苗經(jīng)過(guò)溫室的苗期培育后可根據(jù)不同規(guī)格直接裝箱進(jìn)行圃地移栽，對(duì)圃地的要求參見(jiàn)GB6001育苗

技術(shù)規(guī)程和LY/T1000容器育苗技術(shù)。

11檔案管理

檔案管理的內(nèi)容包括：容器育苗技術(shù)、苗期管理、各項(xiàng)作業(yè)的用工量和物料消耗等。具體內(nèi)容按照LY/T

1000的規(guī)定執(zhí)行。

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附錄A

（資料性）

各種滅菌方法及適用范圍表

各種滅菌方法及適用范圍見(jiàn)表A.1。

表A.1各種滅菌方法及適用范圍表

滅菌方法適用范圍

干熱滅菌有特殊要求的玻璃器皿、器械

濕熱滅菌玻璃器皿、金屬器械、培養(yǎng)基、無(wú)菌水、器械、污染苗、濾紙等

熏蒸滅菌操作室、接種室、培養(yǎng)室

擦拭、噴霧滅菌超凈工作臺(tái)面、雙手、植物材料表面等

過(guò)濾滅菌某些生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑（GA3、IAA、ZT等）、酶等。

藥劑滅菌培養(yǎng)材料

灼燒滅菌器械、瓶口、棉塞、包頭紙

輻射滅菌操作室、接種室、培養(yǎng)室、超凈工作臺(tái)

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附錄B

（資料性）

MS培養(yǎng)基母液和生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配制表

MS培養(yǎng)基母液配制見(jiàn)表B.1。

表B.1MS培養(yǎng)基母液配制表

MS改良MS改良培配1升

MS培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基母液

母液培養(yǎng)基擴(kuò)大養(yǎng)基培養(yǎng)基

藥品名稱(chēng)體積

名稱(chēng)原配方規(guī)定量倍數(shù)吸取量

配制母液稱(chēng)取量（g）（mL）

（mg/L）（mL）

NH4NO3165016003332

大

KNO3190020223840.44

量20

KH2PO41703123.46.24100050

元

MgSO4·7H2O4404408.88.8

素

CaCl2·2H2O3707407.414.8

MnSO4·H2O22.322.34.464.46

ZnSO4·7H2O8.68.61.721.72

微

H3BO36.26.21.241.24

量

KI0.830.832000.1660.1665002.5

元

Na2MoO4·2H2O0.250.250.050.05

素

CuSO4·5H2O0.0250.0250.0050.005

CoCl2·6H2O0.0250.0250.0050.005

Na2-EDTA37.337.33.733.73

鐵鹽

1002502.5

（棕色）FeSO4·7H2O27.827.82.782.78

煙酸0.50.50.050.05

鹽酸吡哆醇

0.50.50.050.05

（VB6）

有機(jī)物

鹽酸硫胺素1002502.5

（棕色）0.10.10.010.01

（VB1）

甘氨酸220.20.2

肌醇1001001010

注：鐵鹽和有機(jī)物用棕色瓶保存；配制好的母液在4℃冰箱中保存。擴(kuò)大倍數(shù)×吸取量=母液體。

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常用生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑母液配制見(jiàn)表B.2。

表B.2常用生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑母液配

類(lèi)別種類(lèi)配置方法

6-BA先用少量1mol/L的鹽酸（HCl）溶

細(xì)胞分裂素KT解，然后加蒸餾水定容。

ZT

IAA先用少量95%酒精溶解，然后加水，

IBA如溶解不完全再加熱。

生長(zhǎng)素

NAA

2,4-D

赤霉素GA3

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