比較不同途徑給胰島素對(duì)血糖的影響立項(xiàng)的依據(jù)胰島素自發(fā)現(xiàn)以來(lái)一直是治療糖尿病的主要藥物，特別是1965年中國(guó)首次人工合成胰島素成功為胰島素廣泛應(yīng)用于臨床奠定了根底［1］。然而直接將胰島素口服給藥，可使其在胃腸道被蛋白酶迅速降解，故臨床常采用注射給藥，但注射給藥給病人帶來(lái)諸多不便。近年來(lái)，非注射給藥途徑的胰島素制劑已成為國(guó)內(nèi)外學(xué)者的研究熱點(diǎn)［2］。實(shí)驗(yàn)?zāi)康谋緦?shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)正常家兔及糖尿病家兔不同途徑給予胰島素，比較不同途徑給藥時(shí)胰島素的降血糖作用。同時(shí)學(xué)習(xí)葡萄糖氧化酶法測(cè)定血糖濃度的方法。實(shí)驗(yàn)原理胰島素是一種由兩條多肽鏈組成的酸性蛋白質(zhì)，A鏈含21個(gè)氨基酸殘基，B鏈含30個(gè)氨基酸殘基，A、B兩鏈通過(guò)兩個(gè)二硫鍵以共價(jià)相連。胰島素通過(guò)促進(jìn)糖原的合成和儲(chǔ)存，加速葡萄糖的氧化和酵解，并抑制糖原分解和異生而降低血糖［3］。實(shí)驗(yàn)對(duì)象、器材及藥品實(shí)驗(yàn)方法和步驟1.家兔四氧嘧啶糖尿病模型的建立［4］：〔1〕、取36只健康成年家兔，雌雄兼?zhèn)?，體重2.5～3kg?！?〕、糖尿病模型的制備方法參考文獻(xiàn)［5］，取18只成年家兔，雌雄兼?zhèn)洌崭?4h后靜脈給予150mg/kg［6］四氧嘧啶生理鹽水溶液，3d后待空腹血糖濃度到達(dá)16.65mmol/L以上時(shí)，即認(rèn)為生成糖尿病模型?！?〕、正常家兔與糖尿病家兔分別隨機(jī)分為3組，雌雄兼?zhèn)?，?組。實(shí)驗(yàn)方法和步驟具體分組：i〕正常組，胰島素注射給藥；ii〕四氧嘧啶糖尿病模型組，胰島素注射給藥；iii〕正常組，胰島素滴眼給藥；iv〕四氧嘧啶糖尿病模型組，胰島素滴眼給藥；v〕正常組，胰島素口腔黏膜噴霧給藥；vi〕四氧嘧啶糖尿病模型組，胰島素口腔黏膜噴霧給藥。2.實(shí)驗(yàn)前家兔禁食18～20h，取六組家兔，分別稱重。以3%戊巴比妥鈉1ml/kg耳緣靜脈注射麻醉，麻醉后將家兔仰位固定于兔臺(tái)。隨時(shí)補(bǔ)充適量戊巴比妥鈉使動(dòng)物在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中維持淺麻醉狀態(tài)。3.每只家兔刺破耳緣靜脈取血1ml，隨后立即補(bǔ)充同體積肝素化的生理鹽水。實(shí)驗(yàn)方法和步驟4.i〕組、ii〕組15min后皮下注射胰島素0.75ml/kg，并記錄注射時(shí)間。分別取0、15、30、60、120、180、240min全血1ml［7］，并補(bǔ)充同體積肝素化的生理鹽水，取血方法同步驟3。5.iii〕組、iv〕組15min后用微量注射器取胰島素50μl滴入動(dòng)物左眼，并記錄注射時(shí)間。分別取0、15、30、60、120、180、240min全血1ml，并補(bǔ)充同體積肝素化的生理鹽水，取血方法同步驟3。6.v〕組、vi〕組15min后取胰島素口腔黏膜噴霧劑0.25ml/kg經(jīng)適量pH7.4磷酸鹽緩沖液稀釋后從舌下噴霧給藥，并記錄給藥時(shí)間。分別取0、15、30、60、120、180、240min全血1ml，并補(bǔ)充同體積肝素化的生理鹽水，取血方法同步驟3。實(shí)驗(yàn)方法和步驟7.葡萄糖氧化酶法測(cè)血糖操作步驟［8］：〔1〕、血液采集后，取枯燥錐形瓶一個(gè)，準(zhǔn)確參加蒸餾水7.0ml，用移液管吸取全血0.2ml，慢慢將血液滴入水中，并用其水洗滌移液管吸頭，使血液全部移入錐形瓶中，混勻。〔2〕、參加1/3mol/LH3SO40.4ml，10%鎢酸鈉溶液0.4ml，充分混勻，放置5～10min。〔3〕、待溶液由紅色變?yōu)榭Х壬?，離心7min〔轉(zhuǎn)速為3000r/min〕?！?〕、測(cè)定方法：手工操作法取試管3支，取上清液按下表操作。實(shí)驗(yàn)方法和步驟表-1家兔血糖測(cè)定〔ml〕試劑空白管標(biāo)準(zhǔn)管測(cè)定管血清————2.0葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液——2.0——蒸餾水2.0————堿性磷酸銅2.02.02.0充分搖勻，置沸水浴中準(zhǔn)確煮沸8min，取出切勿搖動(dòng)，冷水中冷卻磷鉬酸試劑2.02.02.0實(shí)驗(yàn)方法和步驟〔5〕、混勻放置3min，將上述各管用蒸餾水3ml稀釋。將各管混勻后，用空白管調(diào)“0〞點(diǎn)，在波長(zhǎng)620nm處比色，讀取標(biāo)準(zhǔn)管及測(cè)定管吸光度?！沧ⅲ罕痉▽?duì)葡萄糖有專一性，不受其它糖及復(fù)原性物質(zhì)干擾，其正常值為130～150mg/100ml。〕血糖含量計(jì)算方法：血糖含量〔mmol/L〕==(測(cè)定管吸光度/標(biāo)準(zhǔn)管吸光度)×100/180.2×2×0.025觀察指標(biāo)比較六組家兔各時(shí)間血糖含量，記錄數(shù)據(jù)，計(jì)算后填入下表表-2不同途徑給胰島素家兔血糖濃度變化分組藥物劑量血糖濃度（mmol/L）（單位：min）-150153060120180240i0.75ml/kgii0.75ml/kgiii50μliv50μlv0.25ml/kgvi0.25ml/kg預(yù)期結(jié)果及結(jié)果分析預(yù)期結(jié)果：皮下注射胰島素1h后血糖下降較前明顯，用藥后2～4h后達(dá)頂峰，半衰期為2h，血糖濃度最大可下降50%以上，維持時(shí)間為5～7h。相比之下，為3種給藥方法中效果最好的一種。用胰島素經(jīng)眼給藥和皮下注射相比，前0.5h血糖下降程度無(wú)顯著性差異。0.5h以后，經(jīng)眼給藥降糖幅度顯著大于靜脈注射。用藥2h后血糖下降50%，維持時(shí)間4～5h［9］，并且可使血糖降至正常范圍內(nèi)。胰島素口腔黏膜噴霧給藥效果不如皮下注射，作用強(qiáng)度及達(dá)峰濃度均低于后者，但其體內(nèi)藥物保持的有效濃度和作用時(shí)間均較持久?？谇火つそo藥0.5h后血糖下降明顯，1h后達(dá)頂峰，藥效可維持5～6h。預(yù)期結(jié)果及結(jié)果分析結(jié)果分析：3種給藥途徑給予胰島素對(duì)正常家兔及四氧嘧啶糖尿病模型家兔血糖降低均有作用。胰島素作為一種蛋白質(zhì)，普通制劑易為消化酶所破壞，口服無(wú)效，必須經(jīng)注射給藥。皮下注射吸收快，半衰期較長(zhǎng)，作用可維持?jǐn)?shù)小時(shí)，但起效時(shí)間較長(zhǎng)。是目前最常用的胰島素給藥方法。但對(duì)機(jī)體帶來(lái)了諸多不便，同時(shí)較經(jīng)眼給眼和舌下黏膜給藥途徑起效慢。胰島素滴眼劑是一種簡(jiǎn)便易行的劑型，胰島素經(jīng)滴眼給藥主要通過(guò)眼結(jié)膜和鼻淚管黏膜吸收進(jìn)入體循環(huán)而到達(dá)降糖效果。但是，經(jīng)眼給藥時(shí)藥物損失量較大，且作用時(shí)間短，生物利用率低。胰島素經(jīng)舌下黏膜給藥后，由于舌下黏膜有豐富的末梢血管叢，一局部藥物能迅速進(jìn)入體內(nèi)，但由于黏膜吸收的“飽和關(guān)卡效應(yīng)〞和黏膜上皮對(duì)藥物的吸附作用，加之胰島素之間有很強(qiáng)的聚合力［10］，可能使一局部胰島素以多分子聚合物形式在口腔內(nèi)蓄積滯留。因此，效果較皮下注射及滴眼給藥略低。研究結(jié)論近年來(lái)，糖尿病的發(fā)病率持續(xù)上升，已成為全世界發(fā)病率和死亡率最高的疾病之一。注射恐懼癥和每日屢次注射的壓力導(dǎo)致了研究和開(kāi)發(fā)新的給藥途徑。當(dāng)前改進(jìn)胰島素治療的關(guān)鍵，在于找的代替給患者帶來(lái)痛苦和麻煩的皮下注射胰島素的方法。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)家兔進(jìn)行不同途徑給胰島素，了解其對(duì)血糖的影響，從而可以正確高效的使用胰島素治療糖尿病，同時(shí)有助于促進(jìn)對(duì)胰島素非注射途徑的研究與開(kāi)展。本卷須知1.如家兔注射胰島素后發(fā)生低血糖休克，可提前采血。2.葡萄糖氧化酶法測(cè)血糖濃度應(yīng)在取血后2h內(nèi)完成。3.配制溶液時(shí)注意嚴(yán)格控制劑量，防止因劑量誤差導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確。4.操作完畢應(yīng)立即比色，久置顆粒變粗影響結(jié)果。參考文獻(xiàn)［1］張文玉；張路晗胰島素滴眼液促吸收劑的研究中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)1997，275〔5〕［2］孫爽；呂邵娃；王銳；夏暢；李永吉胰島素非注射給藥及與中藥聯(lián)合應(yīng)用新進(jìn)展中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志2021，266〔13〕［3］HalperinF；LopezX；ManningR胰島素抵抗者的葡萄糖刺激胰島素分泌的增強(qiáng)作用受損中國(guó)糖尿病雜志2021，6〔1〕［4］呂敏；王峰；李穎；王幼珍；王京媛；賈廣興胰島素經(jīng)眼吸收后對(duì)正常和四氧嘧啶致糖尿病模型家兔的降血糖作用中國(guó)藥學(xué)雜志1995，13〔1〕［5］徐叔云；卞如濂；陳修藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué).第二版.北京人民衛(wèi)生出版社1991：1274［6］王開(kāi)富；李鳴真；葉望云；柳重威；龔波四氧嘧啶劑量和家兔性別對(duì)制作糖尿病模型的影響同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)1994，223〔3〕［7］周密妹；楊虎；郭梅；耿立堅(jiān)；李性天；吳國(guó)民胰島素口腔黏膜噴霧劑在四氧嘧啶致糖尿病兔體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究中國(guó)藥房雜志2021，752〔10〕［8］張翠香；羅永會(huì)；陳貴元胰島素及腎上腺素對(duì)家兔血糖含量影響綜合實(shí)驗(yàn)的建立和探索臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志