臨床檢驗(yàn)pcr試題答案2025版一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)中，延伸溫度一般是（）A.55℃B.72℃C.94℃D.4℃2.以下哪種酶是PCR反應(yīng)必需的（）A.限制性內(nèi)切酶B.DNA連接酶C.Taq酶D.逆轉(zhuǎn)錄酶3.PCR反應(yīng)的模板可以是（）A.DNAB.RNAC.蛋白質(zhì)D.多糖4.引物設(shè)計(jì)時(shí)，其長(zhǎng)度一般為（）A.10-15bpB.15-30bpC.30-50bpD.50-100bp5.進(jìn)行RT-PCR時(shí)，首先要進(jìn)行的反應(yīng)是（）A.逆轉(zhuǎn)錄B.PCR擴(kuò)增C.酶切D.連接6.PCR技術(shù)的發(fā)明人是（）A.沃森B.克里克C.穆利斯D.桑格7.以下哪種物質(zhì)不是PCR反應(yīng)體系的成分（）A.dNTPB.Mg2+C.抗體D.引物8.退火溫度一般比引物Tm值低（）A.1-2℃B.3-5℃C.5-10℃D.10-15℃9.巢式PCR的優(yōu)點(diǎn)是（）A.提高特異性B.降低成本C.縮短反應(yīng)時(shí)間D.減少引物用量10.實(shí)時(shí)熒光定量PCR中，用來(lái)定量的熒光信號(hào)是（）A.本底熒光B.引物熒光C.探針熒光D.模板熒光二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)的基本步驟包括（）A.變性B.退火C.延伸D.終止2.影響PCR反應(yīng)的因素有（）A.模板濃度B.引物質(zhì)量C.酶活性D.反應(yīng)緩沖液3.下列哪些屬于引物設(shè)計(jì)的原則（）A.長(zhǎng)度適宜B.避免引物二聚體C.GC含量適中D.3'端避免錯(cuò)配4.PCR技術(shù)可應(yīng)用于（）A.病原體檢測(cè)B.基因分型C.腫瘤診斷D.法醫(yī)鑒定5.實(shí)時(shí)熒光定量PCR的定量方法有（）A.絕對(duì)定量B.相對(duì)定量C.終點(diǎn)定量D.動(dòng)態(tài)定量6.以下哪些酶可用于PCR反應(yīng)（）A.Taq酶B.Pfu酶C.Klenow片段D.逆轉(zhuǎn)錄酶7.PCR反應(yīng)體系中包含的成分有（）A.模板DNAB.引物C.dNTPD.MgCl28.常見(jiàn)的PCR儀類型有（）A.普通PCR儀B.梯度PCR儀C.實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀D.數(shù)字PCR儀9.巢式PCR適用于（）A.低拷貝數(shù)模板B.復(fù)雜模板C.提高特異性D.快速檢測(cè)10.逆轉(zhuǎn)錄PCR所需的試劑有（）A.逆轉(zhuǎn)錄酶B.dNTPC.引物D.RNA模板三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)中，引物可以和模板任意結(jié)合。（）2.Taq酶具有3'→5'外切酶活性。（）3.引物二聚體的形成會(huì)影響PCR反應(yīng)結(jié)果。（）4.實(shí)時(shí)熒光定量PCR可以準(zhǔn)確測(cè)定起始模板的拷貝數(shù)。（）5.只要有引物，PCR反應(yīng)就能正常進(jìn)行。（）6.進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)，模板濃度越高越好。（）7.逆轉(zhuǎn)錄PCR可以將RNA轉(zhuǎn)變?yōu)镈NA后進(jìn)行擴(kuò)增。（）8.巢式PCR比普通PCR的特異性低。（）9.不同的PCR儀操作方法可能不同。（）10.PCR技術(shù)只能擴(kuò)增已知序列的DNA片段。（）四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共4題）1.簡(jiǎn)述PCR反應(yīng)的原理。利用DNA變性與復(fù)性原理，通過(guò)高溫變性使雙鏈DNA解鏈，低溫退火讓引物與模板結(jié)合，中溫延伸在Taq酶作用下合成新的DNA鏈，經(jīng)多次循環(huán)擴(kuò)增目的DNA片段。2.引物設(shè)計(jì)的要點(diǎn)有哪些？長(zhǎng)度15-30bp，GC含量40%-60%，避免引物二聚體、發(fā)夾結(jié)構(gòu)，3'端避免錯(cuò)配，上下游引物Tm值相近。3.實(shí)時(shí)熒光定量PCR的原理是什么？在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，隨著PCR擴(kuò)增，熒光信號(hào)強(qiáng)度與產(chǎn)物量成正比，通過(guò)檢測(cè)熒光信號(hào)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增過(guò)程并定量。4.簡(jiǎn)述RT-PCR的基本流程。先提取RNA，以其為模板在逆轉(zhuǎn)錄酶作用下合成cDNA，再以cDNA為模板進(jìn)行常規(guī)PCR擴(kuò)增。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論P(yáng)CR技術(shù)在臨床診斷中的應(yīng)用優(yōu)勢(shì)與局限性。優(yōu)勢(shì)：靈敏度高、特異性強(qiáng)、快速，可檢測(cè)多種病原體等。局限：易污染致假陽(yáng)性，對(duì)實(shí)驗(yàn)條件和技術(shù)要求高，結(jié)果判讀有一定難度。2.分析引物質(zhì)量對(duì)PCR反應(yīng)的影響及應(yīng)對(duì)措施。引物質(zhì)量不佳會(huì)導(dǎo)致擴(kuò)增失敗、非特異性擴(kuò)增等。應(yīng)對(duì)措施包括合理設(shè)計(jì)引物，選擇高質(zhì)量引物合成公司，對(duì)引物進(jìn)行純度檢測(cè)和優(yōu)化保存條件。3.談?wù)剬?shí)時(shí)熒光定量PCR在疾病監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用前景?？蓽?zhǔn)確監(jiān)測(cè)病原體載量變化，評(píng)估疾病進(jìn)展、治療效果，在傳染病、腫瘤等疾病監(jiān)測(cè)中發(fā)揮重要作用，有助于個(gè)性化治療方案制定。4.闡述PCR技術(shù)在基因研究領(lǐng)域的作用。用于基因克隆、基因表達(dá)分析、基因分型等，幫助研究基因結(jié)構(gòu)與功能，探索疾病的遺傳機(jī)制，推動(dòng)基因治療等前沿研究發(fā)展。答案一、單項(xiàng)選擇題1.B2.C3.A4.B5.A6.C7.C8.B9.A10.C二、多項(xiàng)選擇題1.ABC2.ABCD3.ABCD