實訓五秦皮中香豆素的提取實訓六秦皮中香豆素的分離與鑒定2秦皮粗粉150g乙醇提取液濃縮物水溶液CHCl3水層加適量無水硫酸鈉EtOAc萃取液水液七葉苷殘留物黃色針晶七葉內(nèi)酯最佳工藝流程95%EtOH200ml,回流1小時，藥渣再重復(fù)兩次減壓蒸餾濃縮至無醇味加蒸餾水40ml,加熱溶解，濾過加等體積CHCl3萃?。渲戎苄噪s質(zhì)）揮去CHCl3，用等體積EtOAc萃取三次溫熱甲醇，濃縮至適量，放置析晶，濾過用甲醇反復(fù)結(jié)晶3任務(wù)二秦皮中香豆素類成分的提取分離——90分鐘學生教師學生易犯錯誤（1）個人著裝等，實驗室臺面符合要求（2）準備回流裝置并檢驗儀器是否干燥、潔凈，若不符合要求，清洗后干燥。（3）稱取藥材粉末150g（4）量取乙醇200ml觀察發(fā)現(xiàn)問題，指導。電子天平使用不規(guī)范，甲醇量取時視線與刻度線不保持水平操作準備4學生教師涉及知識學生易犯錯誤（1）正確安裝回流裝置：鐵架臺、固定夾子的安裝，冷凝水的調(diào)節(jié)（2）加熱1h與計時正確（3）回流結(jié)束的操作順序正確觀察發(fā)現(xiàn)問題，指導。提問溶劑的選擇原因。香豆素的溶解性（1）進水管與出水管接反（2）先停水再停止加熱回流秦皮粗粉5學生教師學生易犯錯誤（1）將濾紙疊成4折后，置于漏斗中，濾紙邊緣應(yīng)低于漏斗邊緣（2）將圓底燒瓶中溶液傾倒入漏斗中，進行過濾至小錐形瓶中（3）減壓蒸餾，濃縮觀察發(fā)現(xiàn)問題，指導。過濾時做不到三低；使用減壓蒸餾裝置時水泵與加熱的順序顛倒濾過-濃縮6學生教師注意事項（1）將濃縮物加入40ml蒸餾水，并加熱。（2）加入40ml氯仿，進行萃取，去除樹脂等脂溶性雜質(zhì)。觀察發(fā)現(xiàn)問題，指導。提問萃取注意事項。萃劑原液互不溶，質(zhì)溶程度不相同。充分振蕩再靜置，下放上倒切分明。氯仿萃取7學生教師學生易犯錯誤（1）將揮去氯仿的水層加入乙酸乙酯進行萃取。（2）乙酸乙酯萃取液蒸干，加入甲醇重結(jié)晶，得黃色針狀晶體七葉內(nèi)酯。（3）水液加入甲醇重結(jié)晶，得微黃色針晶七葉苷。監(jiān)督，強調(diào)安全重結(jié)晶時加入的甲醇量過多或過少重結(jié)晶8任務(wù)三七葉苷與七葉內(nèi)酯的鑒定——50分鐘學生教師知識支撐（1）取七葉內(nèi)酯與七葉苷的甲醇溶液分別低于濾紙上，在紫外燈下觀察熒光的顏色。（2）在原斑點上滴加一滴氫氧化鈉觀察熒光的變化。觀察發(fā)現(xiàn)問題，提問學生發(fā)生變化的原因香豆素類與堿的反應(yīng)熒光實驗9學生教師知識支撐（1）取七葉內(nèi)酯與七葉苷分別置于試管中，加入鹽酸羥胺甲醇溶液2~3滴，再加1%的氫氧化鈉溶液2~3滴，在水浴中加熱數(shù)分鐘，至反應(yīng)完全，冷卻。（2）再用鹽酸調(diào)pH3~4,加1%FeCl3試劑1~2滴，溶液變紅~紫紅色。觀察發(fā)現(xiàn)問題，提問學生發(fā)生變化的原因香豆素類與異羥肟酸鐵的反應(yīng)原理異羥肟酸鐵實驗10學生教師知識支撐（1）將樣品與對照品分別用毛細血管吸取適量點于硅膠GF254板的適當位置，將板置于色譜缸中。（2）準確量取三氯甲烷-甲醇-甲酸（6:1:0.5)并置于干燥潔凈的具塞量筒中混合后，加入色譜缸中進行展開。（3）展開結(jié)束時，取出色譜板，標記溶劑前沿，揮干溶劑后，置于紫外燈下觀察，記錄熒光斑點，得出結(jié)論。觀察發(fā)現(xiàn)問題，提問學生發(fā)生此現(xiàn)象的原因。七葉苷與七葉內(nèi)酯的分子結(jié)構(gòu)，極性。薄層色譜11

內(nèi)酯環(huán)的水解溶解性性狀顯色反應(yīng)游離香豆素多為結(jié)晶性物質(zhì)，有一定熔點，多有芳香氣味。分子量小的有揮發(fā)性，能隨水蒸氣蒸出，并能升華。香豆素苷多數(shù)無香味和揮發(fā)性，也不能升華。α、β-不飽和內(nèi)酯環(huán)在稀堿液的條件下，可被水解開環(huán)，生成順鄰羥基桂皮酸鹽，該鹽經(jīng)酸化即閉環(huán)恢復(fù)成原來的內(nèi)酯結(jié)構(gòu)，該性質(zhì)可用于提取分離。1.內(nèi)酯的顏色反應(yīng)（異羥肟酸鐵反應(yīng)）2.酚羥基的顏色反應(yīng)3.Gibb’s反應(yīng)4.Emerson反應(yīng)游離香豆素能溶于沸水，易溶于甲（乙）醇、氯仿、乙醚等，可溶于石油醚。香豆素苷類能溶于水、甲醇、乙醇，而難溶于乙醚、苯等極性小的有機溶劑。熒光性香豆素母核本身無熒光，但羥基香豆素類化合物在紫外光下大多顯藍色或藍綠色熒光，在堿液中更加顯著。香豆素的熒光性質(zhì)可用于香豆素成分的檢識鑒別。色譜檢識1.薄層色譜法2.紙色譜法單元總結(jié)——知識梳理12單元總結(jié)技