引課如何測定空氣中甲醛的含量？試劑盒測定比色卡比色確定范圍石油和化學工程系項目六：紫外-可見分光光度法專業(yè)大類：生物與化工

主講老師：李愷翔任務一：分光光度法的基本原理知識點1吸光光度法知識點2吸光分析基本定律知識點3朗伯-比爾定律知識點4顯色反應引課為什么分光光度法能測定空氣中甲醛的含量？甲醛酚試劑嗪高鐵離子高鐵離子藍綠色化合物對630nm的光產(chǎn)生選擇性吸收從而可以建立相應的分析方法知識點1：吸光光度法任務一：分光光度法的基本原理項目六：紫外-可見分光光度法包括知識點1：吸光光度法通過比較有色溶液顏色深淺根據(jù)物質(zhì)對一定波長的光的吸收程度分光光度法比色法吸光光度法基于被測物質(zhì)的分子對光具有選擇性吸收的特性而建立起來的分析方法200400nm（近紫外區(qū)）紫外吸光光度法知識點1：吸光光度法10～200nm（遠紫外光）真空紫外光度法400750nm可見吸光光度法2.51000m紅外光度法依據(jù)物質(zhì)對不同波長范圍光的吸收主要有

知識點1：吸光光度法光是一種電磁波光的特性有哪些？它也具有能量，波長越短能量越高。,具有波動性和粒子性；若將各種電磁波按其波長或頻率大小順序排成圖表則稱電磁波譜。電磁波的分區(qū)知識點1：吸光光度法波長越短，能量越高知識點1：吸光光度法單一波長的光單色光由不同波長的光組合而成的光復合光光知識點1：吸光光度法綠紫青紅青藍橙藍黃互補色復合光白光互補色知識點1：吸光光度法吸收黃色光吸收光透射光互補知識點1：吸光光度法

物質(zhì)的顏色是由于物質(zhì)對不同波長的光具有選擇性的吸收作用而產(chǎn)生的，物質(zhì)的顏色由透過光的波長決定。知識點1：吸光光度法物質(zhì)呈現(xiàn)的顏色吸收的光顏色互補關系硫酸銅溶液高錳酸鉀溶液如果兩種適當顏色的光按一定的強度比例混合可以得白光，這兩種光就叫互為補色光?；檠a色光因吸收白光中的黃色光而呈藍色因吸白光中的綠色光而呈紫色知識點2：吸光分析基本定律任務一：分光光度法的基本原理項目六：紫外-可見分光光度法知識點2：吸光分析基本定律當一束平行單色光通過任何均勻、非散射的固體、液體或氣體介質(zhì)時一部分被吸收，一部分透過介質(zhì)，一部分被器皿的表面反射。知識點2：吸光分析基本定律如圖所示，設入射光強度為I'0，吸收光強度為Ia，透過光強度為It，反射光強度為Ir。KMnO4的吸收光譜圖知識點2：吸光分析基本定律吸收曲線最大吸收波長，

max測定某種物質(zhì)對不同波長單色光的吸收程度，以波長為橫坐標，吸光度為縱坐標作圖。定量分析的基礎：某一波長下測得的吸光度與物質(zhì)濃度有關知識點3：朗伯-比爾定律任務一：分光光度法的基本原理項目六：紫外-可見分光光度法

知識點3：朗伯-比爾定律當一束平行單色光通過均勻、透明的吸光介質(zhì)時，其吸光度與吸光質(zhì)點的濃度和吸收層厚度的乘積成正比。A=lg1/T知識點3：朗伯-比爾定律

吸光系數(shù)

摩爾吸光系數(shù)，mol/L

吸光液層的厚度(光程)，cm

吸光物質(zhì)的濃度，g/L

透光度，%或小數(shù)知識點3：朗伯-比爾定律摩爾吸光系數(shù)ε的討論摩爾吸光系數(shù)ε(L·mol-1·cm-1)在數(shù)值上等于濃度為1mol/L,液層厚度為1cm時該溶液在某一波長下的吸光度,它是吸收物質(zhì)在一定波長和溶劑條件下的特征常數(shù)在溫度和波長等條件一定時，ε僅與吸收物質(zhì)本身的性質(zhì)有關，與待測物濃度無關；同一吸光物質(zhì)在不同波長下的ε值是不同的。在最大吸收波長λmax處的摩爾吸光系數(shù)，以εmax表示吸光光度法的靈敏度的表示方法

越大,靈敏度越高:知識點3：朗伯-比爾定律

>105超高靈敏度

=(6～10）×104高靈敏=(2～6)×104中等靈敏度

<2×104低靈敏偏離朗伯一比爾定律的原因定量分析時，通常液層厚度是相同的，按照比爾定律，濃度與吸光度之間的關系應該是一條通過直角坐標原點的直線。但在實際工作中，往往會偏離線性而發(fā)生彎曲。

01234ug/mLA。。。。*0.80.60.40.20工作曲線知識點3：朗伯-比爾定律知識點3：朗伯-比爾定律引起這種偏離的因素（兩大類）：標準曲線法測定未知溶液的濃度時，發(fā)現(xiàn)：標準曲線常發(fā)生彎曲（尤其當溶液濃度較高時），這種現(xiàn)象稱為對朗伯—比耳定律的偏離。對朗伯—比耳定律的偏離AB物理性因素(儀器的非理想狀態(tài)引起的)化學性因素知識點3：朗伯-比爾定律物理性因素A單色光不純，導致負偏差。散射光的影響，膠體、乳濁液或懸濁液由于散射的作用使吸光度增大，或入射光不是垂直通過比色皿（非平行入射光）產(chǎn)生正偏差。為克服非單色光引起的偏離，首先應選擇比較好的單色器，此外還應將入射波長選定在待測物質(zhì)的最大吸收波長且吸收曲線較平坦處。知識點3：朗伯-比爾定律化學性因素B吸光質(zhì)點的相互作用，濃度較大時，產(chǎn)生負偏差，朗伯-比爾定律只適合于稀溶液（C<10-2mol/L)。

平衡效應：溶液中存在著離解、聚合、互變異構(gòu)、配合物的形成等化學平衡時。使吸光質(zhì)點的濃度發(fā)生變化，影響吸光度。知識點4：顯色反應任務一：分光光度法的基本原理項目六：紫外-可見分光光度法

顯色劑知識點4：顯色反應主要有配位反應(為主)和氧化還原反應mX(待測物)＝XmRn(有色化合物)＋nR(顯色劑)知識點4：顯色反應

1.配位顯色反應當金屬離子與有機顯色劑形成配合物時，通常會發(fā)生電荷轉(zhuǎn)移躍遷，產(chǎn)生很強的紫外—可見吸收光譜。

知識點4：顯色反應

2.顯色反應的選擇1靈敏度高，一般ε>1042選擇性好4反應生成的有色化合物組成恒定，穩(wěn)定。5顯色條件易于控制，重現(xiàn)性好。顯色劑在測定波長處無明顯吸收。3對比度要大,

λmax>60nm

3.顯色條件的確定知識點4：顯色反應01顯色劑用量——選擇曲線變化平坦處c(R)c(R)c(R)tMo(SCN)32+

淺紅Mo(SCN)5

橙紅Mo(SCN)6-淺紅Fe(SCN)n3-n

3.顯色條件的確定知識點4：顯色反應02顯色反應酸度OH-M+nR=MRnH+RH=R-+H+

例，磺基水楊酸(ssal)–Fe3+酸度的影響副反應存在型體的變化生成不同配比的絡合物

3.顯色條件的確定知識點4：顯色反應02顯色反應酸度pH=2~3FeR紫紅色pH=4~7FeR2橙色pH=8~10FeR3黃色

pH>12Fe(OH)3

沉淀pH1<pH<pH2選擇曲線中吸光度較大且恒定的平坦區(qū)ApHpH1pH2

3.顯色條件的確定25℃50℃一般盡量采用水相測定知識點4：顯色反應03顯色溫度及顯色時間t/minA

36.8濃度測量的相對誤差與T(