有限公司Co.,Ltd.文件名稱文件編號潔凈區(qū)表面微生物檢測規(guī)程版本狀態(tài)V1.4頁碼第3頁有限公司Co.,Ltd.潔凈區(qū)表面微生物檢測規(guī)程文件編號：HM-WI-SYS-0018版次：V1.4生效日期：20XX年6月28日分發(fā)號：文件變更記錄序號更改原因更改內容更改后版本更改人/日期1新編制全部V1.02第一次修改增加采樣表面的分類與頻次V1.13第二次修改修改4.2測試計劃V1.24第三次修改格式調整V1.35第四次修改采樣方式增加直接采樣方式V1.4潔凈區(qū)表面微生物檢測規(guī)程目的：建立表面微生物監(jiān)測標準操作程序，便于更準確的掌握潔凈室微生物的負荷情況，為生產合格產品和檢驗準確性提供保障。范圍：適用于潔凈區(qū)表面、設備以及與產品接觸表面的微生物負載的測試，包括人員表面微生物的監(jiān)測。職責：質管部門制定作業(yè)指導書，檢驗室檢驗人員嚴格按本文件操作，對檢驗結果的準確性負責。內容：4.1試驗儀器與試劑4.1.1所用儀器250mL的錐形瓶、高壓蒸汽滅菌器、酒精燈、恒溫培養(yǎng)箱、超凈工作臺、天平、培養(yǎng)皿（φ=9cm）。與培養(yǎng)基接觸的錐形瓶、培養(yǎng)皿和其他器具在使用前用壓力蒸汽滅菌器進行滅菌（參數：103.4Ka，121℃，30min）。4.1.2所用培養(yǎng)基胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（TSA）：按需求量配制培養(yǎng)基，在培養(yǎng)要求的條件下在高壓蒸汽滅菌器中滅菌，并在微生物無菌室潔凈操作臺內冷卻至約45℃，將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿，每皿約15～20mL，待瓊脂培養(yǎng)基凝固后，即可供采樣用。4.2測試計劃4.2.1所采樣表面的分類根據潔凈區(qū)內設施、設備等表面對產品和潔凈室環(huán)境的影響程度，將表面分為兩類：1）關鍵表面（與產品直接接觸的表面）：員工手指、操作臺（流水線）、傳送帶、擠管機內表面；2）一般表面（不與產品直接接觸，但會影響產品和環(huán)境的表面）：注塑機表面。4.2.2測試頻率1）關鍵表面、一般表面：每月測試一次。4.2.3取樣點潔凈車間的取樣點如下：1）員工手指：3個點/每次4）擠管機內表面：3個點/每次2）操作臺（流水線）：3個點/每次5）注塑機表面：3個點/每次3）傳送帶：3個點/每次6）：微生物實驗室工作臺:3個點/每次備注：不宜每次固定在同一點取樣，表面微生物取樣面積宜控制在25cm2（5cm×5cm）左右。4.3測試方法4.3.1采樣方法4.3.1.1物體表面：取無菌棉簽1支，用無菌的0.9%氯化鈉溶液浸濕，握住棉簽柄，在取樣點處選擇約為25cm2取樣面上，以30°傾斜角與取樣表面接觸，縱向緩慢并充分擦拭，反轉棉簽，同法橫向擦拭（見下圖）；或使用微生物接觸碟直接于需檢測的物體表面進行直接接觸采樣。4.3.1.2生產人員手表面：隨機抽取生產人員A、B、C（代號）3人，被測人五指并攏，將浸有滅菌生理鹽水的棉拭子在右手指曲面，從指尖、甲溝至指根處往返涂抹10次，或使用微生物接觸碟直接于需檢測的物體表面進行直接接觸采樣。4.3.2供試品溶液制備：按照4.3.1描述的取樣方法取樣后將棉簽擦拭端用無菌剪刀剪斷置于10mL的0.9%無菌氯化鈉溶液中，左右震搖30min，做好標識，作為供試品溶液。4.3.3檢驗方法：取全部供試品溶液，混勻，以10倍稀釋，然后用移液槍吸取稀釋液1mL于平板計數培養(yǎng)基（TSA）平皿上，置于30～35℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3~5天，觀察結果，取菌落數為1→100的平板計算，求出平均菌落數；若使用接觸碟采樣后直接可置于30～35℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3~5天，觀察結果，記錄菌落數（直接采樣無稀釋倍數）。4.3.4陰性對照組制備：取0.9%無菌氯化鈉溶液10mL代替供試品溶液，其它操作同4.3.3。4.3.5菌數計數：菌數/cm2=平均菌數×稀釋倍數采樣面積（cm2）菌數/每只手＝平均菌數×稀釋倍數4.4結果判斷和措施要求4.4.1要求值：潔凈度級別表面微生物物體表面細菌菌落總數（cfu/25cm2）人員手菌落總數（cfu/皿）潔凈度級別要求值行動限警戒線要求值行動限警戒線百級/A級≤111≤111萬級/C級≤554≤554十萬級/D級≤504540≤3002802504.4.2結果評定和措施要求1）物體表面及生產人員手細菌總數低于要求值時為合格。2）物體表面及生產人員手細菌總數超過警報限值時，要求進行調查研究，采取措施保證過程和環(huán)境處于受控狀態(tài)下。3）物體表面及生