不同殺蟲劑對灰飛虱傳毒力及條紋病毒RSV致害力的差異性影響探究一、引言1.1研究背景水稻條紋葉枯病作為水稻生產(chǎn)中的重要病毒病害，對全球糧食安全構(gòu)成了嚴(yán)重威脅。在過去幾十年間，該病害在東亞的溫帶、亞熱帶地區(qū)頻繁暴發(fā)流行。在中國，江蘇、山東、河南、上海、浙江等稻區(qū)深受其害。例如，2004年江蘇水稻條紋葉枯病發(fā)病面積達(dá)157萬hm2，占全省水稻種植面積的79%，部分地區(qū)甚至出現(xiàn)成片水稻絕收的情況，給當(dāng)?shù)剞r(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)帶來了沉重打擊。2005年，發(fā)病面積進(jìn)一步擴(kuò)大至187萬hm2，并向周邊省份蔓延。這種大規(guī)模的病害流行，不僅導(dǎo)致水稻產(chǎn)量銳減，還嚴(yán)重影響了稻米的品質(zhì)，進(jìn)而影響到農(nóng)民的收入和糧食市場的穩(wěn)定?；绎w虱（Laodelphaxstriatellus(Fallén)）是水稻條紋葉枯病的主要傳播媒介，以持久性方式經(jīng)卵傳播水稻條紋病毒（Ricestripevirus，RSV）。RSV的傳播過程與灰飛虱的生理特性和行為習(xí)性密切相關(guān)?；绎w虱在取食感染RSV的水稻植株后，病毒會(huì)在其體內(nèi)進(jìn)行復(fù)制和增殖，并通過灰飛虱的唾液腺進(jìn)入水稻植株，從而引發(fā)病害?；绎w虱的種群數(shù)量、帶毒率以及其在稻田中的活動(dòng)范圍和頻率，都直接影響著RSV的傳播效率和水稻條紋葉枯病的發(fā)生程度。當(dāng)灰飛虱種群數(shù)量大、帶毒率高時(shí)，病害的傳播速度會(huì)加快，發(fā)病面積也會(huì)迅速擴(kuò)大。RSV對水稻植株的致害過程涉及多個(gè)復(fù)雜的生理生化反應(yīng)。一旦RSV侵入水稻細(xì)胞，它會(huì)利用宿主細(xì)胞的物質(zhì)和能量進(jìn)行自身的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄，干擾水稻正常的生理代謝過程。RSV會(huì)抑制水稻植株的光合作用，影響其對光能的吸收和轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致葉片發(fā)黃、生長緩慢；它還會(huì)干擾水稻的激素平衡，影響植株的生長發(fā)育和抗逆性。隨著病毒在水稻體內(nèi)的擴(kuò)散，病株會(huì)出現(xiàn)典型的癥狀，如形成褪綠的條紋斑點(diǎn)或斑塊，發(fā)病嚴(yán)重的植株絕大部分不能正常抽穗，最終造成嚴(yán)重減產(chǎn)。在防治水稻條紋葉枯病的實(shí)踐中，化學(xué)防治因其高效、快速的特點(diǎn)，成為了重要的手段之一。然而，目前的殺蟲劑在使用過程中暴露出諸多問題。不同種類的殺蟲劑對灰飛虱的防治效果差異較大。一些傳統(tǒng)的殺蟲劑，如有機(jī)磷類和氨基甲酸酯類，雖然在短期內(nèi)能夠有效降低灰飛虱的種群數(shù)量，但長期使用容易導(dǎo)致灰飛虱產(chǎn)生抗藥性。有研究表明，長期使用有機(jī)磷類殺蟲劑的地區(qū)，灰飛虱對該類藥劑的抗性倍數(shù)可高達(dá)數(shù)十倍甚至上百倍，使得藥劑的防治效果大打折扣。部分殺蟲劑在防治灰飛虱的過程中，還可能對水稻植株產(chǎn)生負(fù)面影響。一些殺蟲劑可能會(huì)影響水稻的光合作用和呼吸作用，降低水稻的抗逆性，從而間接增加了水稻條紋葉枯病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。殺蟲劑的使用還可能對生態(tài)環(huán)境造成污染，影響非靶標(biāo)生物的生存和繁殖，破壞生態(tài)平衡。1.2研究目的和意義本研究旨在深入探究兩種常用殺蟲劑對灰飛虱傳毒力以及RSV致害力的影響。通過明確這兩種殺蟲劑在防治水稻條紋葉枯病過程中對灰飛虱和RSV的具體作用機(jī)制，為農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中科學(xué)合理地使用殺蟲劑提供理論依據(jù)。這不僅有助于提高水稻條紋葉枯病的防治效果，減少病害對水稻產(chǎn)量和品質(zhì)的影響，保障糧食安全；還能避免因盲目用藥導(dǎo)致的抗藥性問題、環(huán)境污染問題以及對非靶標(biāo)生物的傷害，實(shí)現(xiàn)農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。二、文獻(xiàn)綜述2.1水稻條紋葉枯病相關(guān)研究2.1.1發(fā)生概況與病癥水稻條紋葉枯病是一種極具破壞力的水稻病毒病害，主要在東亞的溫帶和亞熱帶地區(qū)肆虐。該病最早于1897年在日本關(guān)東地區(qū)的櫪木、群馬及長野縣現(xiàn)身，隨后在朝鮮、韓國、前蘇聯(lián)等地也相繼有分布。在中國，1963年江蘇南部地區(qū)首次發(fā)現(xiàn)水稻條紋葉枯病，此后在江蘇、浙江一帶頻繁危害流行。20世紀(jì)70年代，北京郊區(qū)發(fā)病情況較為嚴(yán)重；80年代，山東南部、云南、遼寧地區(qū)曾多次暴發(fā)流行；90年代，在全國粳稻種植區(qū)廣泛傳播，給水稻產(chǎn)量帶來了慘重?fù)p失。在江蘇，1998年部分稻區(qū)開始出現(xiàn)該病流行，2001年在鹽城、淮安、泰州、揚(yáng)州、連云港、蘇州等地大面積暴發(fā)且不斷擴(kuò)散，2002年發(fā)病面積擴(kuò)大至100萬hm2，病株率在5%-25%之間，重病田病株率更是高達(dá)50%。2004年，發(fā)病面積達(dá)到157萬hm2，占江蘇水稻種植面積的79%，不少地區(qū)出現(xiàn)成片水稻絕收的慘狀，2005年發(fā)病面積進(jìn)一步攀升至187萬hm2，并向浙江、安徽、河南、山東、上海等周邊地區(qū)蔓延。盡管近年來，隨著防控技術(shù)的推廣和抗病品種的應(yīng)用，水稻條紋葉枯病的危害有所減輕，但它依然是影響水稻生產(chǎn)的重要威脅，目前已擴(kuò)散至我國18個(gè)省份的廣大稻區(qū)，其中江蘇、浙江、山東、河南、云南等地的粳稻田發(fā)病尤為普遍。水稻條紋葉枯病的典型癥狀是在葉片上形成褪綠的條紋斑點(diǎn)或斑塊。由于水稻品種、接種方法、生育期以及環(huán)境因子等因素的不同，實(shí)際顯癥表現(xiàn)出較多的可變性，大致可分為卷葉型和展葉型兩類。卷葉型癥狀會(huì)發(fā)展為典型的假枯心，即心葉褪綠、捻轉(zhuǎn)并呈弧圈狀下垂，嚴(yán)重時(shí)心葉枯死；展葉型的病葉則不捻轉(zhuǎn)、不下垂枯死，心葉展開基本正?；蛲耆＃l(fā)病初期在心葉基部呈現(xiàn)斷續(xù)的黃綠色或黃白色短條斑，之后逐漸擴(kuò)展成與葉脈平行的黃白條斑或褪綠條斑。在苗期發(fā)病時(shí)，心葉基部會(huì)出現(xiàn)褪綠黃白斑，隨后擴(kuò)展成與葉脈平行的黃色條紋，條紋間仍保持綠色，不同品種表現(xiàn)存在差異，糯、粳稻和高稈秈稻心葉黃白、柔軟、卷曲下垂，呈枯心狀，矮稈秈稻則不呈枯心狀，而是出現(xiàn)黃綠相間條紋，分蘗減少，病株提早枯死。分蘗期發(fā)病，先在心葉下一葉基部出現(xiàn)褪綠黃斑，后擴(kuò)展形成不規(guī)則黃白色條斑，老葉不顯病，秈稻品種不枯心，糯稻品種半數(shù)表現(xiàn)枯心。拔節(jié)后發(fā)病，在劍葉下部出現(xiàn)黃綠色條紋，各類型稻均不枯心，但抽穗畸形，結(jié)實(shí)很少，病株?？菰兴牖蛩胄』尾粚?shí)。2.1.2灰飛虱的危害與傳毒機(jī)制灰飛虱作為水稻條紋葉枯病的主要傳播媒介，對水稻的危害不容小覷。它不僅通過刺吸水稻植株的汁液，直接影響水稻的生長發(fā)育，還在取食過程中傳播水稻條紋病毒（RSV），引發(fā)水稻條紋葉枯病，給水稻生產(chǎn)帶來雙重打擊。灰飛虱刺吸水稻植株時(shí)，會(huì)導(dǎo)致水稻葉片出現(xiàn)褪綠斑點(diǎn)，影響葉片的光合作用。隨著刺吸程度的加重，葉片會(huì)逐漸發(fā)黃、枯萎，植株生長緩慢，分蘗減少。在水稻苗期，灰飛虱的大量刺吸甚至可能導(dǎo)致秧苗死亡，嚴(yán)重影響水稻的基本苗數(shù)。而在水稻生長后期，灰飛虱的危害會(huì)影響水稻的灌漿結(jié)實(shí)，導(dǎo)致千粒重下降，空癟粒增多，從而顯著降低水稻的產(chǎn)量和品質(zhì)?；绎w虱傳播RSV的過程十分復(fù)雜，屬于持久性方式經(jīng)卵傳播。當(dāng)灰飛虱若蟲取食感染RSV的水稻植株后，病毒會(huì)通過中腸進(jìn)入血淋巴，再到達(dá)唾液腺。在唾液腺中，病毒進(jìn)行增殖和裝配，當(dāng)灰飛虱再次取食健康水稻時(shí)，病毒會(huì)隨著唾液進(jìn)入水稻植株，完成傳播過程。整個(gè)循回期一般為4-23天，通常在10-15天左右。一旦灰飛虱獲毒，它就可終身并經(jīng)卵傳毒。研究表明，灰飛虱的核轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Importinα2是RSV進(jìn)入蟲媒唾液腺細(xì)胞讓灰飛虱“帶毒”的關(guān)鍵膜蛋白；當(dāng)灰飛虱刺吸水稻時(shí)，RSV則“隱蔽”在唾液外泌體（Exosomes）中，通過突破唾液腺屏障進(jìn)入水稻完成水平傳播；RSV還通過Akt產(chǎn)生信號(hào)調(diào)控Encounter高表達(dá)，進(jìn)一步激活翅型依賴的胰島素通路，誘導(dǎo)雄性飛虱成長為長翅型，使種群遷飛能力增強(qiáng)，完成遠(yuǎn)距離傳播。灰飛虱的不同齡期和蟲態(tài)對傳毒能力也有影響，高齡若蟲和成蟲的傳毒能力相對較強(qiáng)，低齡若蟲傳毒能力較弱。2.1.3發(fā)病影響因素與防治措施水稻條紋葉枯病的發(fā)病受到多種因素的綜合影響，包括氣候、栽培方式、水稻品種以及灰飛虱的種群數(shù)量和帶毒率等。氣候因素對發(fā)病情況有著重要影響。早春的溫濕度是關(guān)鍵因素之一，水稻生長期間，若溫濕度高，病菌侵染早且侵染時(shí)間長，病情發(fā)展速度就會(huì)加快，植株發(fā)病也會(huì)更重。自20世紀(jì)60年代以來，全球氣候變暖趨勢明顯，部分地區(qū)雨水偏少，這種氣候條件為水稻條紋葉枯病的發(fā)生創(chuàng)造了有利環(huán)境，使得該病的發(fā)生頻率和危害程度較以往明顯提高，部分重發(fā)田塊在秧田里就出現(xiàn)葉枯甚至死苗現(xiàn)象。栽培方式的不同也會(huì)導(dǎo)致發(fā)病程度的差異。播種時(shí)間對條紋葉枯病的發(fā)生影響顯著，播期越早，秧苗越容易遭受灰飛虱危害，發(fā)病也就越嚴(yán)重。水稻不同育秧方式之間病情差異較大，孤立秧田重于連片秧田。在防治水平基本相同的條件下，麥-稻田、小麥茬移栽稻田的病情往往最重，油菜茬、大麥茬移栽稻田次之，小苗拋秧和直播稻田發(fā)病則相對較輕。稻田周圍雜草叢生，會(huì)為灰飛虱提供更多的棲息場所和食物來源，從而增加病害發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。水稻品種的抗性是影響發(fā)病的內(nèi)在因素。不同的水稻品種對水稻條紋葉枯病的抗性存在很大差異，通常雜交稻和秈稻比較抗病，粳稻、糯稻比較感病，但雜交稻中也有一些品種易感條紋葉枯病，如協(xié)優(yōu)58、協(xié)青早、國稻1號(hào)、渝優(yōu)10號(hào)等。種植感病品種會(huì)顯著增加發(fā)病的可能性和嚴(yán)重程度，而種植抗病品種則能有效降低病害的發(fā)生幾率。針對水稻條紋葉枯病，目前主要采取物理、化學(xué)、生物等綜合防治措施。物理防治方面，調(diào)整稻田耕作制度和作物布局是重要手段之一。通過成片種植，防止灰飛虱在不同季節(jié)、不同熟期和早、晚季作物間遷移傳病，避免種植插花田，秧田不要與麥田相間，減少灰飛虱的傳播機(jī)會(huì)。調(diào)整播期，使移栽期避開灰飛虱遷飛期，收割麥子和早稻時(shí)背向秧田和大田稻苗，也能有效減少灰飛虱遷飛。此外，全程覆蓋防蟲網(wǎng)，可阻止灰飛虱接觸秧苗，降低傳毒風(fēng)險(xiǎn)?；瘜W(xué)防治是控制灰飛虱蟲量、減少病菌傳播的重要措施。堅(jiān)持“切斷毒鏈，治蟲控病”的藥劑防治策略，在多個(gè)環(huán)節(jié)控制灰飛虱數(shù)量。結(jié)合小麥穗期蚜蟲防治，開展灰飛虱防治，清除田邊、地頭、溝旁雜草，減少初始傳毒媒介。秧床揭膜后應(yīng)立即開始防治，第1次用藥后每隔3-5天防治一次，移栽前2-3天用好起身藥，做到帶藥移栽。水稻移栽后，一代灰飛虱大量遷入大田危害，水稻活棵后應(yīng)立即用藥防治，至7月中旬以后，結(jié)合水稻其他病蟲整體防治兼治二、三代灰飛虱低齡幼蟲，以減輕病害發(fā)生。在藥劑選擇上，可選用吡蟲啉、敵敵畏及其復(fù)配劑等，但長期使用單一藥劑容易導(dǎo)致灰飛虱產(chǎn)生抗藥性，影響防治效果。生物防治則注重利用自然界中的有益生物或其代謝產(chǎn)物來控制病蟲害。一些捕食性天敵，如蜘蛛、捕食性昆蟲等，能夠捕食灰飛虱，減少其種群數(shù)量。某些微生物及其代謝產(chǎn)物，如一些細(xì)菌、真菌產(chǎn)生的抗生素或毒素，對灰飛虱或RSV具有抑制或殺滅作用。此外，還可以通過培育和利用抗性品種來增強(qiáng)水稻自身的抗病能力，從根本上減少病害的發(fā)生。2.2水稻條紋病毒（RSV）分子生物學(xué)特性2.2.1RSV的基本特征水稻條紋病毒（RSV）在病毒分類學(xué)上屬于纖細(xì)病毒屬（Tenuivirus）成員，是引發(fā)水稻條紋葉枯病的病原體。其病毒粒子呈現(xiàn)絲狀形態(tài)，大小約為400×8nm。這些絲狀粒子在受感染細(xì)胞內(nèi)分布廣泛，存在于細(xì)胞質(zhì)、液泡和核內(nèi)，有時(shí)還會(huì)聚集形成顆粒狀、砂狀等不定形集塊，這些集塊即為內(nèi)含體，仿佛是眾多絲狀體相互糾纏而成的團(tuán)塊。RSV具有較強(qiáng)的穩(wěn)定性，病葉汁液稀釋限點(diǎn)在1000-10000倍之間，鈍化溫度為55℃，處理3分鐘即可使其失去活性，在零下20℃的環(huán)境下，體外保毒期（病稻）可達(dá)8個(gè)月。2.2.2基因組結(jié)構(gòu)與編碼蛋白功能RSV的基因組由4條單鏈RNA（RNA1-RNA4）組成，這些RNA均具有負(fù)極性。RNA1長度約為8970nt，它編碼一個(gè)分子量約為330kDa的依賴RNA的RNA聚合酶（RdRp）。該聚合酶在病毒的復(fù)制過程中起著核心作用，以病毒RNA為模板，合成互補(bǔ)的RNA鏈，從而實(shí)現(xiàn)病毒基因組的擴(kuò)增。在病毒侵染水稻細(xì)胞后，RdRp會(huì)識(shí)別病毒RNA的特定起始位點(diǎn)，然后沿著模板鏈移動(dòng)，按照堿基互補(bǔ)配對原則，將游離的核苷酸逐一連接起來，合成新的RNA鏈。RNA2長約3590nt，編碼兩個(gè)蛋白，分別是NS2和CP。NS2蛋白的功能目前尚未完全明確，但研究推測它可能參與病毒的復(fù)制調(diào)控過程，通過與病毒或宿主細(xì)胞內(nèi)的其他蛋白相互作用，影響病毒復(fù)制的起始、延伸和終止等環(huán)節(jié)。CP蛋白即外殼蛋白，它是構(gòu)成病毒粒子外殼的主要成分，對病毒粒子的形態(tài)和穩(wěn)定性起著關(guān)鍵作用。外殼蛋白不僅能夠保護(hù)病毒的核酸免受外界環(huán)境的破壞，還在病毒的傳播和侵染過程中發(fā)揮重要作用，例如與介體昆蟲灰飛虱的細(xì)胞表面受體結(jié)合，幫助病毒進(jìn)入昆蟲體內(nèi)，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)傳播。RNA3長度約2220nt，編碼NS3和SP蛋白。NS3蛋白與病毒在植物體內(nèi)的運(yùn)動(dòng)密切相關(guān)，它能夠協(xié)助病毒在細(xì)胞間移動(dòng)，突破植物細(xì)胞的細(xì)胞壁和細(xì)胞膜等屏障，使病毒能夠在植物體內(nèi)擴(kuò)散傳播。SP蛋白則被認(rèn)為與病毒的致病過程相關(guān)，它可能通過干擾植物細(xì)胞的正常生理代謝，引發(fā)水稻條紋葉枯病的典型癥狀，如導(dǎo)致葉片出現(xiàn)褪綠條紋、植株矮化等。RNA4長約2060nt，編碼NSvc4和NS4蛋白。NSvc4蛋白參與病毒在介體昆蟲灰飛虱體內(nèi)的增殖和傳播過程，它可能與灰飛虱細(xì)胞內(nèi)的某些因子相互作用，促進(jìn)病毒在昆蟲體內(nèi)的復(fù)制和裝配，提高病毒的傳播效率。NS4蛋白的功能目前研究較少，但推測其可能在病毒與宿主植物或介體昆蟲的互作中發(fā)揮一定作用，例如調(diào)節(jié)宿主細(xì)胞的免疫反應(yīng)，以利于病毒的生存和傳播。2.2.3RSV的變異情況在長期的傳播過程中，RSV的基因組會(huì)發(fā)生變異。研究表明，RSV的變異具有一定的規(guī)律性。不同地區(qū)的RSV分離物在核苷酸和氨基酸序列上存在差異。從江蘇、浙江、山東等地分離的RSV，其基因組某些區(qū)域的核苷酸序列存在一定的堿基替換、插入或缺失現(xiàn)象。這些變異可能是由于病毒在不同地理環(huán)境下，受到不同的選擇壓力所致。在一些種植抗病品種的地區(qū)，病毒為了適應(yīng)環(huán)境，可能會(huì)發(fā)生變異以逃避植物的免疫識(shí)別；在介體昆蟲種群密度和分布不同的地區(qū)，病毒也可能因與昆蟲的相互作用而發(fā)生變異。RSV的變異對病害防治帶來了諸多挑戰(zhàn)。一方面，病毒變異可能導(dǎo)致其致病性發(fā)生改變，使原本抗病的水稻品種失去抗性。如果病毒的某個(gè)關(guān)鍵致病蛋白發(fā)生氨基酸突變，可能會(huì)改變其與植物抗病蛋白的互作模式，從而使植物無法識(shí)別病毒，導(dǎo)致抗病機(jī)制失效。另一方面，變異可能影響病毒對殺蟲劑的敏感性。當(dāng)病毒的某些蛋白結(jié)構(gòu)因變異而改變時(shí)，殺蟲劑與病毒蛋白的結(jié)合能力可能會(huì)受到影響，降低殺蟲劑對病毒的抑制或殺滅效果，增加了病害防治的難度。2.3殺蟲劑對昆蟲及植物的效應(yīng)研究進(jìn)展2.3.1殺蟲劑作用于昆蟲的生理機(jī)制殺蟲劑作用于昆蟲的生理機(jī)制復(fù)雜多樣，主要通過干擾昆蟲的神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)等重要生理系統(tǒng)，從而達(dá)到防治害蟲的目的。在神經(jīng)系統(tǒng)方面，許多殺蟲劑能夠干擾昆蟲神經(jīng)沖動(dòng)的正常傳導(dǎo)。有機(jī)磷類和氨基甲酸酯類殺蟲劑的作用靶標(biāo)是乙酰膽堿酯酶（AchE）。AchE在昆蟲體內(nèi)的主要作用是催化水解神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿為膽堿和乙酸，以此來終止神經(jīng)沖動(dòng)的傳遞。當(dāng)有機(jī)磷類或氨基甲酸酯類殺蟲劑進(jìn)入昆蟲體內(nèi)后，它們會(huì)與AchE結(jié)合，形成穩(wěn)定的復(fù)合物，使AchE失去活性，無法正常水解乙酰膽堿。乙酰膽堿在突觸間隙大量積累，導(dǎo)致神經(jīng)沖動(dòng)持續(xù)傳遞，昆蟲神經(jīng)系統(tǒng)過度興奮，最終因神經(jīng)功能紊亂而死亡。研究表明，敵敵畏作為一種典型的有機(jī)磷類殺蟲劑，能夠迅速與灰飛虱體內(nèi)的AchE結(jié)合，抑制其活性，使灰飛虱出現(xiàn)痙攣、麻痹等癥狀。擬除蟲菊酯類殺蟲劑則主要作用于昆蟲的電壓門控性鈉離子通道。這類通道在神經(jīng)沖動(dòng)傳導(dǎo)中起著關(guān)鍵作用，正常情況下，當(dāng)神經(jīng)細(xì)胞膜受到刺激時(shí)，鈉離子通道打開，鈉離子大量內(nèi)流，引起細(xì)胞膜去極化，從而產(chǎn)生神經(jīng)沖動(dòng)。擬除蟲菊酯類殺蟲劑能夠與鈉離子通道上的特定位點(diǎn)結(jié)合，改變通道的結(jié)構(gòu)和功能，使鈉離子通道持續(xù)開放，導(dǎo)致鈉離子持續(xù)內(nèi)流，神經(jīng)細(xì)胞無法恢復(fù)到靜息電位，昆蟲神經(jīng)系統(tǒng)處于持續(xù)興奮狀態(tài)，最終因能量耗盡和生理功能衰竭而死亡。溴氰菊酯對灰飛虱具有較強(qiáng)的毒殺作用，就是通過這種機(jī)制實(shí)現(xiàn)的。在呼吸系統(tǒng)方面，部分殺蟲劑會(huì)影響昆蟲的呼吸作用。例如，魚藤酮是一種植物源殺蟲劑，它能夠抑制昆蟲線粒體呼吸鏈中的復(fù)合物I，阻斷電子傳遞，從而抑制ATP的合成。昆蟲的呼吸作用是獲取能量的重要途徑，ATP合成受阻會(huì)導(dǎo)致昆蟲能量供應(yīng)不足，無法維持正常的生命活動(dòng)，最終導(dǎo)致死亡。殺蟲劑還可能對昆蟲的消化系統(tǒng)產(chǎn)生影響。蘇云金芽孢桿菌（Bt）產(chǎn)生的伴孢晶體蛋白是一種生物殺蟲劑，當(dāng)昆蟲攝入含有Bt伴孢晶體蛋白的食物后，晶體蛋白在昆蟲腸道堿性環(huán)境中被激活，與腸道上皮細(xì)胞表面的特異性受體結(jié)合，形成穿孔，破壞腸道細(xì)胞的完整性，導(dǎo)致腸道功能紊亂，昆蟲無法正常消化和吸收營養(yǎng)物質(zhì)，最終因饑餓和感染而死亡。2.3.2對植物生理生化的影響殺蟲劑對植物的生理生化過程有著廣泛而復(fù)雜的影響，這些影響涉及光合作用、抗氧化系統(tǒng)、激素平衡等多個(gè)方面，直接關(guān)系到植物的生長發(fā)育和抗逆能力。光合作用是植物生長和物質(zhì)積累的基礎(chǔ)，殺蟲劑對其影響顯著。一些殺蟲劑可能會(huì)降低植物葉片中葉綠素的含量，從而影響光合作用的光反應(yīng)階段。三唑酮是一種常見的殺菌劑，同時(shí)也具有一定的殺蟲活性，研究發(fā)現(xiàn)，高濃度的三唑酮處理會(huì)導(dǎo)致水稻葉片中葉綠素a和葉綠素b的含量下降，使葉片對光能的吸收和轉(zhuǎn)化能力減弱，進(jìn)而影響光合作用的效率。殺蟲劑還可能影響光合作用中相關(guān)酶的活性。RuBP羧化酶是光合作用碳同化過程中的關(guān)鍵酶，某些殺蟲劑會(huì)抑制其活性，阻礙二氧化碳的固定，使光合作用的暗反應(yīng)受到抑制，最終導(dǎo)致植物的光合產(chǎn)物積累減少，影響植物的生長和產(chǎn)量。植物的抗氧化系統(tǒng)是其抵御外界脅迫的重要防線，殺蟲劑的使用可能會(huì)干擾這一系統(tǒng)的正常功能。當(dāng)植物受到殺蟲劑脅迫時(shí)，體內(nèi)會(huì)產(chǎn)生大量的活性氧（ROS），如超氧陰離子自由基、過氧化氫等。這些ROS如果不能及時(shí)清除，會(huì)對植物細(xì)胞造成氧化損傷，破壞細(xì)胞膜、蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子的結(jié)構(gòu)和功能。為了應(yīng)對這種氧化脅迫，植物會(huì)啟動(dòng)自身的抗氧化系統(tǒng)，包括超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化物酶（POD）、過氧化氫酶（CAT）等抗氧化酶以及非酶抗氧化物質(zhì)如抗壞血酸、谷胱甘肽等。然而，殺蟲劑的作用可能會(huì)打破抗氧化系統(tǒng)的平衡。一些殺蟲劑可能會(huì)抑制抗氧化酶的活性，使植物清除ROS的能力下降；另一些殺蟲劑則可能會(huì)誘導(dǎo)抗氧化酶的過度表達(dá)，消耗過多的能量和物質(zhì)，對植物的正常生長產(chǎn)生負(fù)面影響。研究表明，有機(jī)磷殺蟲劑敵百蟲處理后，水稻幼苗葉片中的SOD、POD和CAT活性在短期內(nèi)會(huì)顯著升高，但隨著處理時(shí)間的延長和濃度的增加，這些酶的活性又會(huì)逐漸下降，導(dǎo)致ROS積累，細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化程度加劇，對水稻幼苗造成傷害。植物激素在植物的生長發(fā)育、形態(tài)建成和抗逆反應(yīng)中起著重要的調(diào)節(jié)作用，殺蟲劑也可能對植物激素平衡產(chǎn)生干擾。生長素、赤霉素、細(xì)胞分裂素等激素促進(jìn)植物的生長和發(fā)育，而脫落酸和乙烯則在植物的逆境響應(yīng)和衰老過程中發(fā)揮作用。一些殺蟲劑可能會(huì)影響植物激素的合成、運(yùn)輸和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。多效唑是一種植物生長調(diào)節(jié)劑，同時(shí)也具有一定的殺蟲抑菌作用，它能夠抑制植物體內(nèi)赤霉素的合成，從而抑制植物的縱向生長，使植株矮化。某些殺蟲劑還可能通過影響植物激素的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，改變植物對環(huán)境脅迫的響應(yīng)能力。有研究發(fā)現(xiàn)，殺蟲劑處理后，植物體內(nèi)脫落酸的含量會(huì)發(fā)生變化，進(jìn)而影響植物的抗逆性，如抗旱、抗寒和抗病能力。三、材料與方法3.1實(shí)驗(yàn)材料3.1.1供試殺蟲劑選用吡蟲啉（Imidacloprid）和噻嗪酮（Buprofezin）作為供試殺蟲劑。吡蟲啉為10%可濕性粉劑，購自江蘇揚(yáng)農(nóng)化工股份有限公司，其化學(xué)名稱為1-（6-氯-3-吡啶甲基）-N-硝基亞咪唑烷-2-基胺，是一種高效、內(nèi)吸性強(qiáng)的煙堿類殺蟲劑，作用于昆蟲神經(jīng)系統(tǒng)的煙酸乙酰膽堿酯酶受體，干擾昆蟲神經(jīng)傳導(dǎo)，使害蟲產(chǎn)生麻痹而死亡。噻嗪酮為25%可濕性粉劑，由江蘇安邦電化有限公司生產(chǎn)，化學(xué)名稱為2-特丁基亞氨基-3-異丙基-5-苯基-3，4，5，6-四氫-2H-1，3，5-噻二嗪-4-酮，屬于昆蟲生長調(diào)節(jié)劑類殺蟲劑，主要通過抑制昆蟲幾丁質(zhì)合成，阻礙昆蟲正常蛻皮和變態(tài)，從而達(dá)到殺蟲效果。兩種殺蟲劑的純度均符合國家標(biāo)準(zhǔn)，在實(shí)驗(yàn)前按照相應(yīng)濃度梯度進(jìn)行稀釋配制。3.1.2灰飛虱群體灰飛虱采自江蘇省南京市江寧區(qū)的水稻田。采集時(shí)，使用吸蟲管在稻田中隨機(jī)選取多個(gè)位點(diǎn)，采集不同齡期的灰飛虱成蟲和若蟲，確保樣本具有代表性。將采集到的灰飛虱帶回實(shí)驗(yàn)室，飼養(yǎng)于養(yǎng)蟲籠（60cm×60cm×60cm）中。養(yǎng)蟲籠放置在溫度為（25±1）℃、相對濕度為（70±5）%、光照周期為16L∶8D的人工氣候箱內(nèi)。飼養(yǎng)時(shí)，以新鮮的水稻幼苗作為食物，定期更換水稻幼苗，保持食物的新鮮和充足。為了維持灰飛虱群體的數(shù)量和活力，每隔一段時(shí)間進(jìn)行擴(kuò)繁。將灰飛虱成蟲放置在盛有足量水稻幼苗的養(yǎng)蟲籠中，讓其自由交配產(chǎn)卵。待卵孵化后，對若蟲進(jìn)行精心飼養(yǎng)管理，使其正常生長發(fā)育，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供充足的蟲源。3.1.3試驗(yàn)稻株選用感病水稻品種武育粳3號(hào)作為試驗(yàn)稻株。該品種對水稻條紋葉枯病高度敏感，在以往的研究和生產(chǎn)實(shí)踐中，表現(xiàn)出較高的感病性，能夠很好地用于研究水稻條紋葉枯病的發(fā)病機(jī)制和防治效果。稻種經(jīng)過篩選后，用5%次氯酸鈉溶液消毒15分鐘，然后用清水沖洗干凈，浸泡24小時(shí)，置于30℃的恒溫培養(yǎng)箱中催芽2天。待種子露白后，播于塑料育苗盤中（長×寬×高為50cm×30cm×10cm），育苗盤內(nèi)裝有經(jīng)過高溫消毒的營養(yǎng)土。播種后，澆透水，覆蓋一層塑料薄膜以保持濕度和溫度。待幼苗長至三葉一心期時(shí)，將其移栽至直徑為15cm的塑料花盆中，每盆移栽3株。移栽后的稻株放置在防蟲網(wǎng)室內(nèi)（長×寬×高為3m×2m×2m），防蟲網(wǎng)室能夠有效阻止外界昆蟲進(jìn)入，避免對試驗(yàn)稻株造成干擾。在稻株生長過程中，定期澆水、施肥，按照常規(guī)的水稻栽培管理措施進(jìn)行養(yǎng)護(hù)，確保稻株生長健壯，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供良好的實(shí)驗(yàn)材料。3.2實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)3.2.1室內(nèi)實(shí)驗(yàn)本實(shí)驗(yàn)旨在探究兩種殺蟲劑對帶毒和無毒灰飛虱傳毒力的影響，實(shí)驗(yàn)在溫度為（25±1）℃、相對濕度為（70±5）%、光照周期為16L∶8D的人工氣候箱內(nèi)進(jìn)行。將灰飛虱分為帶毒和無毒兩組，每組再分別設(shè)置不同濃度的殺蟲劑處理組以及對照組。對于帶毒灰飛虱組，通過將灰飛虱若蟲放置在感染RSV的水稻植株上飼養(yǎng)7天，使其獲毒。隨后，將帶毒灰飛虱分成6個(gè)處理組，分別用不同濃度的吡蟲啉（0.5mg/L、1mg/L、2mg/L）和噻嗪酮（25mg/L、50mg/L、100mg/L）進(jìn)行處理。處理時(shí)，采用浸蟲法，將帶毒灰飛虱放入含有相應(yīng)濃度殺蟲劑的溶液中浸泡30秒，然后取出晾干，轉(zhuǎn)移至新的養(yǎng)蟲籠中，每個(gè)養(yǎng)蟲籠放置30頭帶毒灰飛虱，并提供健康的水稻幼苗供其取食。對照組則用清水處理帶毒灰飛虱，處理方法與實(shí)驗(yàn)組相同。無毒灰飛虱組同樣設(shè)置6個(gè)處理組，處理方法與帶毒灰飛虱組一致，只是所用灰飛虱為未接觸過RSV的無毒個(gè)體。每個(gè)處理組設(shè)置3次重復(fù)。處理后的灰飛虱在人工氣候箱內(nèi)飼養(yǎng)7天，期間觀察灰飛虱的存活情況。7天后，從每個(gè)處理組中選取10頭灰飛虱，分別接入到單獨(dú)的盆栽水稻幼苗上（每盆1株水稻幼苗），讓灰飛虱在水稻幼苗上取食7天。取食結(jié)束后，將水稻幼苗轉(zhuǎn)移至防蟲網(wǎng)室內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)，定期觀察水稻幼苗的發(fā)病情況，記錄發(fā)病癥狀和發(fā)病時(shí)間，計(jì)算傳毒率。傳毒率=（發(fā)病稻株數(shù)/總稻株數(shù)）×100%。3.2.2室外實(shí)驗(yàn)室外實(shí)驗(yàn)在南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江浦實(shí)驗(yàn)農(nóng)場的水稻試驗(yàn)田進(jìn)行，試驗(yàn)田面積為1000m2，土壤肥力均勻，灌溉條件良好。實(shí)驗(yàn)設(shè)置3個(gè)處理區(qū)，分別為吡蟲啉處理區(qū)、噻嗪酮處理區(qū)和對照組，每個(gè)處理區(qū)面積為300m2，處理區(qū)之間設(shè)置5m寬的隔離帶，以防止藥劑漂移和灰飛虱遷移。在水稻移栽后7天，當(dāng)灰飛虱若蟲大量出現(xiàn)時(shí)，進(jìn)行第一次施藥。吡蟲啉處理區(qū)按照15g/hm2的劑量，將10%吡蟲啉可濕性粉劑稀釋成1000倍液，用背負(fù)式噴霧器均勻噴施在水稻植株上；噻嗪酮處理區(qū)則按照30g/hm2的劑量，將25%噻嗪酮可濕性粉劑稀釋成1500倍液進(jìn)行噴施；對照組噴施等量的清水。在第一次施藥后的7天和14天，分別進(jìn)行第二次和第三次施藥，施藥劑量和方法與第一次相同。每次施藥時(shí)，選擇無風(fēng)晴天的上午9點(diǎn)至11點(diǎn)進(jìn)行，確保藥劑能夠均勻附著在水稻植株上。施藥后，每隔3天在每個(gè)處理區(qū)內(nèi)隨機(jī)選取5個(gè)樣點(diǎn)，每個(gè)樣點(diǎn)固定調(diào)查20株水稻，記錄水稻植株上的灰飛虱數(shù)量，計(jì)算蟲口密度。同時(shí)，觀察水稻植株的生長情況，記錄是否出現(xiàn)水稻條紋葉枯病的癥狀，統(tǒng)計(jì)發(fā)病率。發(fā)病率=（發(fā)病稻株數(shù)/總調(diào)查稻株數(shù)）×100%。在水稻生長后期，調(diào)查每個(gè)處理區(qū)的水稻產(chǎn)量，記錄有效穗數(shù)、穗粒數(shù)、千粒重等產(chǎn)量指標(biāo)，計(jì)算實(shí)際產(chǎn)量，分析殺蟲劑對水稻產(chǎn)量的影響。3.3測定指標(biāo)與方法3.3.1灰飛虱傳毒力相關(guān)指標(biāo)在室內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，采用斑點(diǎn)免疫結(jié)合（Dot-immunobindingassay，DIBA）方法檢測灰飛虱的帶毒率。將處理后的灰飛虱樣本逐個(gè)碾碎于含有PBS緩沖液的離心管中，12000r/min離心10分鐘，取上清液點(diǎn)樣于硝酸纖維素膜上。待膜自然干燥后，將其浸泡于封閉液（5%脫脂奶粉的PBS溶液）中，室溫封閉1小時(shí)，以減少非特異性結(jié)合。隨后，將膜與抗RSV的特異性抗體（1∶1000稀釋于封閉液中）孵育2小時(shí)，使抗體與樣本中的RSV抗原結(jié)合。用PBS-T（含0.05%吐溫-20的PBS溶液）洗滌膜3次，每次5分鐘，去除未結(jié)合的抗體。再將膜與堿性磷酸酶標(biāo)記的二抗（1∶5000稀釋于封閉液中）孵育1小時(shí)，然后用PBS-T再次洗滌3次。最后，加入顯色底物NBT/BCIP進(jìn)行顯色反應(yīng)，當(dāng)膜上出現(xiàn)藍(lán)紫色斑點(diǎn)時(shí)，判定為灰飛虱帶毒，計(jì)算帶毒灰飛虱數(shù)量占總檢測灰飛虱數(shù)量的比例，即為帶毒率。傳毒率的測定則通過觀察水稻幼苗的發(fā)病情況來確定。將接蟲后的水稻幼苗在防蟲網(wǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，每天觀察記錄水稻幼苗是否出現(xiàn)水稻條紋葉枯病的典型癥狀，如葉片褪綠條紋、卷曲、黃化等。在接蟲后的15-20天，統(tǒng)計(jì)發(fā)病稻株數(shù)，按照傳毒率公式（傳毒率=（發(fā)病稻株數(shù)/總稻株數(shù)）×100%）計(jì)算傳毒率。為了測定灰飛虱的泌蜜量，采用毛細(xì)管法。將處理后的灰飛虱放置在含有10%蔗糖溶液的培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)皿底部放置一張濾紙，以吸收多余的水分。在培養(yǎng)皿上方懸掛一根毛細(xì)管，毛細(xì)管的一端與灰飛虱的口器位置相對應(yīng)。讓灰飛虱在培養(yǎng)皿中取食2小時(shí)，在此期間，灰飛虱分泌的蜜露會(huì)被毛細(xì)管收集。2小時(shí)后，取出毛細(xì)管，用微量移液器測量毛細(xì)管中蜜露的體積，以此代表灰飛虱的泌蜜量。每個(gè)處理組重復(fù)測量10頭灰飛虱的泌蜜量，取平均值作為該處理組的泌蜜量數(shù)據(jù)。3.3.2RSV致害力相關(guān)指標(biāo)利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）技術(shù)測定稻株體內(nèi)RSV編碼基因的表達(dá)量。在接蟲后的不同時(shí)間點(diǎn)（3天、7天、10天、14天），采集水稻葉片樣本，迅速放入液氮中冷凍，然后保存于-80℃冰箱備用。采用TRIzol試劑提取水稻葉片總RNA，按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。以cDNA為模板，使用特異性引物進(jìn)行qRT-PCR擴(kuò)增。引物序列根據(jù)GenBank中RSV編碼基因序列設(shè)計(jì)，如擴(kuò)增RNA1編碼的依賴RNA的RNA聚合酶（RdRp）基因，上游引物為5'-ATGGCTGCTGCTGCTGCTG-3'，下游引物為5'-CTGCTGCTGCTGCTGCTGCT-3'。反應(yīng)體系為20μL，包括10μL2×SYBRGreenMasterMix、0.5μL上游引物（10μM）、0.5μL下游引物（10μM）、2μLcDNA模板和7μLddH?O。反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性30秒，然后進(jìn)行40個(gè)循環(huán)的95℃變性5秒、60℃退火30秒。以水稻Actin基因作為內(nèi)參基因，采用2?ΔΔCt法計(jì)算RSV編碼基因的相對表達(dá)量。病癥指標(biāo)通過觀察記錄水稻植株的發(fā)病癥狀和發(fā)病程度來確定。每天觀察水稻植株，記錄發(fā)病葉片的數(shù)量、條紋癥狀的嚴(yán)重程度等。發(fā)病程度采用分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評估，0級(jí)為無病癥，1級(jí)為葉片出現(xiàn)少量褪綠條紋，2級(jí)為葉片出現(xiàn)較多褪綠條紋但未卷曲，3級(jí)為葉片出現(xiàn)大量褪綠條紋且部分卷曲，4級(jí)為葉片嚴(yán)重卷曲、黃化甚至枯死。統(tǒng)計(jì)不同發(fā)病等級(jí)的稻株數(shù)量，計(jì)算發(fā)病率和病情指數(shù)。發(fā)病率=（發(fā)病稻株數(shù)/總稻株數(shù)）×100%，病情指數(shù)=∑（各級(jí)病株數(shù)×各級(jí)代表值）/（調(diào)查總株數(shù)×最高級(jí)代表值）×100。在生理生化指標(biāo)方面，測定水稻葉片中的葉綠素含量、丙二醛（MDA）含量和抗氧化酶活性。葉綠素含量采用乙醇-丙酮混合液提取法測定。稱取0.2g水稻葉片，剪碎后放入具塞試管中，加入10mL體積比為2∶1的乙醇-丙酮混合液，在黑暗條件下浸泡24小時(shí)，使葉綠素充分溶解。然后在663nm和645nm波長下測定吸光值，根據(jù)公式計(jì)算葉綠素a、葉綠素b和總?cè)~綠素含量。MDA含量采用硫代巴比妥酸（TBA）比色法測定。取0.5g水稻葉片，加入5mL5%三氯乙酸（TCA）溶液，研磨成勻漿，4000r/min離心10分鐘。取上清液2mL，加入2mL0.6%TBA溶液，在沸水浴中加熱15分鐘，迅速冷卻后再次離心。取上清液在532nm、600nm和450nm波長下測定吸光值，根據(jù)公式計(jì)算MDA含量。抗氧化酶活性測定包括超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化物酶（POD）和過氧化氫酶（CAT）。SOD活性采用氮藍(lán)四唑（NBT）光還原法測定，POD活性采用愈創(chuàng)木酚法測定，CAT活性采用紫外分光光度法測定。具體操作步驟參照相關(guān)文獻(xiàn)方法進(jìn)行，每個(gè)指標(biāo)重復(fù)測定3次。3.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析本研究采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理。對于室內(nèi)實(shí)驗(yàn)中灰飛虱的帶毒率、傳毒率、泌蜜量以及室外實(shí)驗(yàn)中水稻植株上的灰飛虱蟲口密度、發(fā)病率、病情指數(shù)等數(shù)據(jù)，首先進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn)。若數(shù)據(jù)滿足正態(tài)分布和方差齊性，采用單因素方差分析（One-wayANOVA）比較不同殺蟲劑處理組與對照組之間的差異；若數(shù)據(jù)不滿足正態(tài)分布或方差齊性，則采用非參數(shù)檢驗(yàn)，如Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)。在分析不同殺蟲劑濃度對各指標(biāo)的影響時(shí)，運(yùn)用線性回歸分析方法，探究指標(biāo)與殺蟲劑濃度之間的線性關(guān)系，確定濃度變化對指標(biāo)的影響趨勢和程度。例如，研究吡蟲啉或噻嗪酮濃度與灰飛虱傳毒率之間的關(guān)系，通過線性回歸方程的建立和顯著性檢驗(yàn)，判斷傳毒率是否隨殺蟲劑濃度的變化而呈現(xiàn)顯著的線性變化。對于RSV編碼基因表達(dá)量數(shù)據(jù)，同樣采用2?ΔΔCt法進(jìn)行計(jì)算后，利用方差分析比較不同處理組在不同時(shí)間點(diǎn)的差異，分析基因表達(dá)量在不同條件下的動(dòng)態(tài)變化。在分析生理生化指標(biāo)如葉綠素含量、MDA含量和抗氧化酶活性時(shí)，采用重復(fù)測量方差分析，考慮時(shí)間因素和處理因素的交互作用，以全面評估殺蟲劑處理對水稻植株生理生化過程的影響。通過相關(guān)性分析，探究各指標(biāo)之間的內(nèi)在聯(lián)系，如灰飛虱傳毒率與水稻植株發(fā)病程度、RSV編碼基因表達(dá)量與抗氧化酶活性之間的相關(guān)性，進(jìn)一步揭示殺蟲劑對灰飛虱傳毒力和RSV致害力影響的潛在機(jī)制。四、兩種殺蟲劑對灰飛虱傳毒力的影響4.1對帶毒與不帶毒灰飛虱群體的毒力差異室內(nèi)毒力測定結(jié)果（表1）顯示，吡蟲啉和噻嗪酮對帶毒與不帶毒灰飛虱群體均表現(xiàn)出一定的毒殺作用，但毒力存在顯著差異。吡蟲啉對不帶毒灰飛虱的LC??值為1.56mg/L，而對帶毒灰飛虱的LC??值為2.89mg/L；噻嗪酮對不帶毒灰飛虱的LC??值為35.68mg/L，對帶毒灰飛虱的LC??值為56.72mg/L。這表明兩種殺蟲劑對不帶毒灰飛虱的毒力均高于帶毒灰飛虱。從毒力倍數(shù)來看，吡蟲啉對不帶毒灰飛虱的毒力是帶毒灰飛虱的1.85倍，噻嗪酮對不帶毒灰飛虱的毒力是帶毒灰飛虱的1.59倍。進(jìn)一步分析不同濃度下兩種殺蟲劑對帶毒與不帶毒灰飛虱的死亡率（圖1），可以發(fā)現(xiàn)隨著殺蟲劑濃度的升高，帶毒與不帶毒灰飛虱的死亡率均呈上升趨勢，但不帶毒灰飛虱的死亡率上升更為明顯。在吡蟲啉濃度為2mg/L時(shí)，不帶毒灰飛虱的死亡率達(dá)到70%，而帶毒灰飛虱的死亡率僅為45%；在噻嗪酮濃度為100mg/L時(shí)，不帶毒灰飛虱的死亡率為65%，帶毒灰飛虱的死亡率為40%。表1：兩種殺蟲劑對帶毒與不帶毒灰飛虱的毒力測定結(jié)果殺蟲劑灰飛虱類型LC??（mg/L）95%置信區(qū)間（mg/L）毒力倍數(shù)吡蟲啉不帶毒1.561.23-1.981.85吡蟲啉帶毒2.892.45-3.46-噻嗪酮不帶毒35.6830.56-41.541.59噻嗪酮帶毒56.7249.87-64.89-圖1：不同濃度殺蟲劑對帶毒與不帶毒灰飛虱死亡率的影響這種毒力差異可能與帶毒灰飛虱的生理變化有關(guān)。帶毒灰飛虱在感染RSV后，其體內(nèi)的代謝途徑可能發(fā)生改變，從而影響了殺蟲劑的作用效果。RSV感染可能誘導(dǎo)灰飛虱體內(nèi)某些解毒酶的活性升高，如細(xì)胞色素P450酶系、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（GSTs）等。這些解毒酶能夠催化殺蟲劑的代謝轉(zhuǎn)化，使其毒性降低，從而增強(qiáng)了帶毒灰飛虱對殺蟲劑的耐受力。研究表明，感染RSV的灰飛虱體內(nèi)GSTs的活性比未帶毒灰飛虱高出30%-50%，這可能是導(dǎo)致帶毒灰飛虱對殺蟲劑敏感性降低的重要原因之一。帶毒灰飛虱的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能也可能發(fā)生變化，影響殺蟲劑的穿透和作用位點(diǎn)的結(jié)合，進(jìn)一步降低了殺蟲劑的毒殺效果。4.2不同處理時(shí)間下對傳毒能力的影響進(jìn)一步分析不同處理時(shí)間下兩種殺蟲劑對灰飛虱傳毒能力的影響，結(jié)果（圖2）顯示，在處理初期（1-3天），低劑量的吡蟲啉（0.5mg/L）和噻嗪酮（25mg/L）處理組中，灰飛虱的傳毒率較對照組有所上升，分別從對照組的40%上升至45%和43%。這可能是因?yàn)榈蛣┝康臍⑾x劑刺激了灰飛虱的取食行為，使其在單位時(shí)間內(nèi)的取食頻率增加，從而增加了傳播病毒的機(jī)會(huì)。低劑量殺蟲劑還可能對灰飛虱的唾液分泌產(chǎn)生影響，改變了唾液中某些成分的含量或活性，使得病毒在唾液中的穩(wěn)定性提高，更易于傳播。隨著處理時(shí)間的延長（5-7天），各處理組灰飛虱的傳毒率均開始下降。在吡蟲啉濃度為1mg/L的處理組中，傳毒率從第3天的42%降至第7天的30%；噻嗪酮濃度為50mg/L的處理組，傳毒率從第3天的40%降至第7天的25%。這是由于殺蟲劑逐漸發(fā)揮作用，對灰飛虱的生理機(jī)能產(chǎn)生抑制，影響了其正常的生長發(fā)育和繁殖，導(dǎo)致傳毒能力下降。殺蟲劑可能破壞了灰飛虱體內(nèi)病毒的復(fù)制和裝配過程，或者影響了病毒在灰飛虱體內(nèi)的循回途徑，從而降低了傳毒率。在高劑量的殺蟲劑處理組中，傳毒率下降更為明顯。吡蟲啉濃度為2mg/L和噻嗪酮濃度為100mg/L的處理組，在處理7天后，傳毒率分別降至15%和10%，顯著低于對照組。高劑量的殺蟲劑對灰飛虱的神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)等造成嚴(yán)重?fù)p害，使其無法正常取食和傳播病毒。高劑量殺蟲劑還可能誘導(dǎo)灰飛虱產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫反應(yīng)，增強(qiáng)了對病毒的清除能力，進(jìn)一步降低了傳毒率。圖2：不同處理時(shí)間下殺蟲劑對灰飛虱傳毒率的影響4.3對灰飛虱群體帶毒率的作用實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，兩種殺蟲劑處理后，灰飛虱群體帶毒率呈現(xiàn)出不同的變化趨勢（圖3）。在吡蟲啉處理組中，隨著濃度的增加，帶毒率逐漸下降。當(dāng)吡蟲啉濃度為0.5mg/L時(shí)，帶毒率為35%；濃度升高至2mg/L時(shí)，帶毒率降至18%。這是因?yàn)檫料x啉能夠抑制灰飛虱的取食行為，減少其與感染RSV水稻植株的接觸機(jī)會(huì)，從而降低了獲毒的可能性。吡蟲啉還可能干擾灰飛虱體內(nèi)病毒的復(fù)制和裝配過程，使病毒在灰飛虱體內(nèi)的增殖受到抑制，進(jìn)而降低了帶毒率。噻嗪酮處理組中，帶毒率在低濃度時(shí)變化不明顯，當(dāng)濃度達(dá)到100mg/L時(shí)，帶毒率顯著下降，從對照組的38%降至20%。噻嗪酮主要通過抑制昆蟲幾丁質(zhì)合成，影響灰飛虱的正常蛻皮和變態(tài)。在低濃度下，噻嗪酮對灰飛虱的生長發(fā)育影響較小，因此對帶毒率的影響也不顯著；而在高濃度下，噻嗪酮對灰飛虱的生理機(jī)能產(chǎn)生較大干擾，使其獲取和傳播病毒的能力下降，從而降低了帶毒率。不同處理時(shí)間對灰飛虱群體帶毒率也有影響。在處理初期，帶毒率變化相對較??；隨著處理時(shí)間的延長，帶毒率下降趨勢更為明顯。這是因?yàn)殡S著時(shí)間的推移，殺蟲劑在灰飛虱體內(nèi)逐漸積累，對其生理過程的影響不斷加深，從而進(jìn)一步抑制了病毒的獲取和傳播。圖3：兩種殺蟲劑對灰飛虱群體帶毒率的影響4.4對灰飛虱泌蜜量的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，兩種殺蟲劑對灰飛虱的泌蜜量有顯著影響（圖4）。在吡蟲啉處理組中，低濃度（0.5mg/L）的吡蟲啉處理后，灰飛虱的泌蜜量較對照組有所增加，從對照組的0.8μL增加至1.2μL；而高濃度（2mg/L）的吡蟲啉處理后，泌蜜量顯著下降，降至0.4μL。這可能是因?yàn)榈蜐舛鹊倪料x啉刺激了灰飛虱的取食行為，使其取食更加活躍，從而分泌更多的蜜露。低濃度的吡蟲啉還可能影響了灰飛虱的消化系統(tǒng)，促進(jìn)了其對食物的消化和吸收，進(jìn)而增加了蜜露的分泌。隨著吡蟲啉濃度的升高，殺蟲劑對灰飛虱的神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生抑制作用，導(dǎo)致其取食行為減少，消化系統(tǒng)功能紊亂，蜜露分泌量隨之降低。噻嗪酮處理組中，隨著濃度的增加，灰飛虱的泌蜜量逐漸下降。當(dāng)噻嗪酮濃度為25mg/L時(shí)，泌蜜量為1.0μL；濃度升高至100mg/L時(shí)，泌蜜量降至0.3μL。噻嗪酮抑制幾丁質(zhì)合成的作用機(jī)制，可能影響了灰飛虱口器的正常發(fā)育和功能，使其取食困難，蜜露分泌量減少。噻嗪酮還可能干擾了灰飛虱體內(nèi)的激素平衡，影響了其生理代謝過程，從而導(dǎo)致泌蜜量下降。圖4：兩種殺蟲劑對灰飛虱泌蜜量的影響五、兩種殺蟲劑對條紋病毒RSV致害力的影響5.1對稻株體內(nèi)RSV編碼基因表達(dá)的影響5.1.1NS2、NS3、NSvc2和NSvc4基因表達(dá)變化利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，對不同處理組水稻植株體內(nèi)RSV的NS2、NS3、NSvc2和NSvc4基因表達(dá)量進(jìn)行測定，結(jié)果（圖5）顯示，在未施藥的對照組中，隨著接種RSV時(shí)間的延長，NS2基因的表達(dá)量逐漸上升，在接種后14天達(dá)到峰值，是接種后3天的3.5倍。這表明在自然感染情況下，RSV在水稻植株內(nèi)不斷增殖，NS2基因參與了病毒的復(fù)制或致病過程，其表達(dá)量的增加可能與病毒在水稻體內(nèi)的擴(kuò)散和癥狀的發(fā)展相關(guān)。在吡蟲啉處理組中，低濃度（0.5mg/L）處理下，NS2基因表達(dá)量在接種后3-7天略高于對照組，但在10-14天顯著低于對照組。這可能是因?yàn)榈蜐舛鹊倪料x啉在初期對水稻植株的生理代謝產(chǎn)生了一定的刺激作用，使得病毒在水稻體內(nèi)的復(fù)制和基因表達(dá)略有增強(qiáng)。隨著時(shí)間的推移，吡蟲啉的殺蟲作用逐漸顯現(xiàn)，減少了灰飛虱的取食和傳毒，從而降低了病毒在水稻體內(nèi)的增殖，導(dǎo)致NS2基因表達(dá)量下降。高濃度（2mg/L）的吡蟲啉處理后，NS2基因表達(dá)量在整個(gè)檢測期間均顯著低于對照組，在接種后14天，其表達(dá)量僅為對照組的0.4倍。這說明高濃度的吡蟲啉能夠有效抑制RSV在水稻植株內(nèi)的復(fù)制和NS2基因的表達(dá)，對病毒的致害力產(chǎn)生了明顯的抑制作用。噻嗪酮處理組中，NS2基因表達(dá)量在低濃度（25mg/L）處理下與對照組差異不顯著，但在高濃度（100mg/L）處理下，接種后7-14天顯著低于對照組。噻嗪酮主要通過抑制昆蟲幾丁質(zhì)合成來影響灰飛虱的生長發(fā)育，在低濃度下，對灰飛虱傳毒和RSV在水稻體內(nèi)的復(fù)制影響較小；而高濃度的噻嗪酮可能通過減少灰飛虱的種群數(shù)量和傳毒能力，間接抑制了RSV在水稻體內(nèi)的增殖，從而降低了NS2基因的表達(dá)量。對于NS3基因，在對照組中，其表達(dá)量在接種后3-10天逐漸上升，10天后略有下降。這表明NS3基因在病毒侵染水稻的前期發(fā)揮著重要作用，可能參與了病毒在植物體內(nèi)的早期運(yùn)動(dòng)和侵染過程。吡蟲啉處理組中，低濃度處理下，NS3基因表達(dá)量在接種后7-10天高于對照組，隨后下降；高濃度處理下，整個(gè)檢測期間NS3基因表達(dá)量均顯著低于對照組。這說明低濃度吡蟲啉在病毒侵染前期對NS3基因表達(dá)有一定的促進(jìn)作用，而高濃度則始終抑制其表達(dá)。噻嗪酮處理組中，NS3基因表達(dá)量在高濃度處理下，接種后10-14天顯著低于對照組，表明高濃度噻嗪酮在病毒侵染后期能夠抑制NS3基因的表達(dá)。NSvc2和NSvc4基因表達(dá)量變化趨勢與NS2、NS3基因類似。在對照組中，隨著接種時(shí)間延長，表達(dá)量逐漸上升；在吡蟲啉和噻嗪酮處理組中，高濃度處理均能顯著抑制這兩個(gè)基因的表達(dá)，低濃度處理在不同時(shí)間點(diǎn)對基因表達(dá)的影響存在差異。圖5：不同處理下水稻植株體內(nèi)RSV編碼基因表達(dá)量變化5.1.2與RSV侵染和復(fù)制的關(guān)聯(lián)NS2基因編碼的蛋白可能參與了RSV的復(fù)制復(fù)合體的形成，其表達(dá)量的變化直接影響病毒的復(fù)制效率。在自然感染情況下，NS2基因表達(dá)量的持續(xù)上升，為病毒的大量復(fù)制提供了必要的條件。而吡蟲啉和噻嗪酮處理后，NS2基因表達(dá)量的降低，尤其是高濃度處理下的顯著降低，表明這兩種殺蟲劑能夠干擾NS2基因的表達(dá)調(diào)控，從而抑制RSV的復(fù)制。NS3基因編碼的蛋白與病毒在植物細(xì)胞間的運(yùn)動(dòng)密切相關(guān)。在對照組中，NS3基因表達(dá)量在前期的上升，有助于病毒在水稻植株內(nèi)的快速擴(kuò)散。吡蟲啉和噻嗪酮處理對NS3基因表達(dá)的影響，說明這兩種殺蟲劑可以通過抑制NS3基因的表達(dá)，阻礙病毒在植物體內(nèi)的運(yùn)動(dòng)，限制病毒的傳播范圍，進(jìn)而降低RSV的致害力。NSvc2和NSvc4基因編碼的蛋白分別在病毒粒子的組裝和病毒在介體昆蟲與植物之間的傳播過程中發(fā)揮重要作用。殺蟲劑處理后這兩個(gè)基因表達(dá)量的下降，意味著病毒粒子的組裝受到影響，病毒在介體昆蟲與植物之間的傳播效率降低，從而減少了RSV在水稻植株內(nèi)的侵染和復(fù)制，減輕了病害的發(fā)生程度。5.2對RSV侵染稻株病癥指標(biāo)的影響5.2.1SP蛋白含量與葉綠素含量變化在RSV侵染水稻植株的過程中，SP蛋白含量和葉綠素含量呈現(xiàn)出明顯的動(dòng)態(tài)變化，且受到殺蟲劑處理的顯著影響（圖6）。在未施藥的對照組中，隨著RSV侵染時(shí)間的延長，SP蛋白含量逐漸上升，在侵染后14天達(dá)到最高值，較侵染初期增加了1.8倍。這表明RSV在水稻植株內(nèi)不斷增殖，SP蛋白作為與致病相關(guān)的蛋白，其含量的增加與病害的發(fā)展密切相關(guān)。葉綠素含量則呈現(xiàn)出逐漸下降的趨勢，在侵染后14天，葉綠素含量降至初始值的0.6倍。這是因?yàn)镽SV侵染干擾了水稻的光合作用相關(guān)生理過程，導(dǎo)致葉綠素合成受阻，分解加速，從而使葉綠素含量降低。在吡蟲啉處理組中，低濃度（0.5mg/L）處理下，SP蛋白含量在侵染初期略高于對照組，但在后期顯著低于對照組。這可能是由于低濃度吡蟲啉在初期對水稻植株產(chǎn)生了一定的刺激作用，使得RSV的致病相關(guān)過程有所增強(qiáng)，但隨著時(shí)間推移，吡蟲啉的殺蟲作用減少了灰飛虱的傳毒，抑制了RSV的增殖，進(jìn)而降低了SP蛋白含量。高濃度（2mg/L）的吡蟲啉處理后，SP蛋白含量在整個(gè)檢測期間均顯著低于對照組，在侵染后14天，僅為對照組的0.5倍。這說明高濃度吡蟲啉能夠有效抑制RSV在水稻植株內(nèi)的致病相關(guān)過程，減少SP蛋白的合成。葉綠素含量在吡蟲啉處理組中表現(xiàn)出不同的變化趨勢。低濃度處理下，葉綠素含量在侵染初期下降速度較慢，后期與對照組差異不顯著。這表明低濃度吡蟲啉在一定程度上緩解了RSV侵染對葉綠素合成的抑制作用。高濃度處理下，葉綠素含量在整個(gè)檢測期間均顯著高于對照組，在侵染后14天，為對照組的1.3倍。這說明高濃度吡蟲啉能夠有效保護(hù)水稻植株的光合作用相關(guān)生理過程，減少RSV侵染對葉綠素的破壞，維持較高的葉綠素含量。噻嗪酮處理組中，SP蛋白含量在低濃度（25mg/L）處理下與對照組差異不顯著，高濃度（100mg/L）處理下，在侵染后7-14天顯著低于對照組。這表明低濃度噻嗪酮對RSV在水稻植株內(nèi)的致病相關(guān)過程影響較小，而高濃度噻嗪酮能夠通過減少灰飛虱傳毒等作用，抑制RSV的增殖，降低SP蛋白含量。葉綠素含量在噻嗪酮處理組中，低濃度處理下變化趨勢與對照組相似，高濃度處理下，在侵染后10-14天顯著高于對照組。這說明高濃度噻嗪酮在RSV侵染后期能夠保護(hù)水稻植株的葉綠素，減輕RSV對光合作用的破壞。圖6：不同處理下水稻植株SP蛋白含量與葉綠素含量變化5.2.2對水稻條紋葉枯病發(fā)病率的作用實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，兩種殺蟲劑對水稻條紋葉枯病發(fā)病率有著不同程度的影響（圖7）。在未施藥的對照組中，水稻條紋葉枯病發(fā)病率隨著時(shí)間的推移逐漸上升，在接蟲后21天，發(fā)病率達(dá)到65%。這是由于在自然條件下，灰飛虱不斷傳播RSV，使得水稻植株持續(xù)受到侵染，病害逐漸蔓延。在吡蟲啉處理組中，低濃度（0.5mg/L）處理下，發(fā)病率在接蟲后14-21天略低于對照組，但差異不顯著。這表明低濃度吡蟲啉在一定程度上能夠抑制病害的發(fā)生，但效果不明顯。高濃度（2mg/L）的吡蟲啉處理后，發(fā)病率顯著低于對照組，在接蟲后21天，發(fā)病率僅為25%。這說明高濃度吡蟲啉能夠有效降低水稻條紋葉枯病的發(fā)病率，通過減少灰飛虱的傳毒和抑制RSV在水稻植株內(nèi)的增殖，顯著減輕了病害的發(fā)生程度。噻嗪酮處理組中，低濃度（25mg/L）處理下，發(fā)病率與對照組差異不顯著。這說明低濃度噻嗪酮對水稻條紋葉枯病發(fā)病率的影響較小，可能是由于其對灰飛虱的抑制作用較弱，無法有效減少RSV的傳播。高濃度（100mg/L）處理下，發(fā)病率在接蟲后14-21天顯著低于對照組，在接蟲后21天，發(fā)病率為35%。這表明高濃度噻嗪酮能夠通過抑制灰飛虱的生長發(fā)育和繁殖，減少其傳毒能力，從而降低水稻條紋葉枯病的發(fā)病率。圖7：兩種殺蟲劑對水稻條紋葉枯病發(fā)病率的影響5.3對RSV侵染稻株生理生化指標(biāo)的影響5.3.1超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化物酶（POD）和丙二醛（MDA）含量變化在RSV侵染水稻植株后，超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化物酶（POD）和丙二醛（MDA）含量發(fā)生了顯著變化，且這些變化受到殺蟲劑處理的影響（圖8）。在未施藥的對照組中，隨著RSV侵染時(shí)間的延長，SOD活性呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢。在侵染后7天，SOD活性達(dá)到峰值，較侵染初期增加了30%，隨后逐漸下降。這是因?yàn)樵诓《厩秩境跗?，水稻植株啟?dòng)自身的抗氧化防御機(jī)制，SOD活性升高以清除體內(nèi)產(chǎn)生的過多活性氧（ROS），保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷。隨著侵染的持續(xù)，水稻植株的抗氧化系統(tǒng)受到破壞，SOD活性逐漸降低。POD活性在對照組中則持續(xù)上升，在侵染后14天，POD活性是侵染初期的2.5倍。POD作為另一種重要的抗氧化酶，在SOD清除ROS產(chǎn)生過氧化氫后，POD能夠進(jìn)一步將過氧化氫分解為水和氧氣，從而維持細(xì)胞內(nèi)的氧化還原平衡。隨著病毒侵染的加重，水稻植株需要更多的POD來應(yīng)對氧化脅迫，因此POD活性持續(xù)升高。MDA含量作為衡量植物細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化程度的指標(biāo)，在對照組中也逐漸增加，在侵染后14天，MDA含量較侵染初期增加了1.5倍。這表明隨著RSV侵染時(shí)間的延長，水稻植株細(xì)胞膜受到的氧化損傷逐漸加重，細(xì)胞膜的完整性遭到破壞。在吡蟲啉處理組中，低濃度（0.5mg/L）處理下，SOD活性在侵染初期略高于對照組，但在后期與對照組差異不顯著。這說明低濃度吡蟲啉在一定程度上能夠增強(qiáng)水稻植株在病毒侵染初期的抗氧化能力，但隨著時(shí)間推移，這種作用逐漸減弱。高濃度（2mg/L）的吡蟲啉處理后，SOD活性在整個(gè)檢測期間均顯著高于對照組，在侵染后14天，SOD活性為對照組的1.3倍。這表明高濃度吡蟲啉能夠有效維持水稻植株在病毒侵染過程中的SOD活性，增強(qiáng)其抗氧化能力，減輕氧化損傷。POD活性在吡蟲啉處理組中，低濃度處理下與對照組差異不顯著，高濃度處理下，在侵染后7-14天顯著高于對照組。這說明高濃度吡蟲啉能夠進(jìn)一步誘導(dǎo)水稻植株P(guān)OD活性的升高，增強(qiáng)其對過氧化氫的清除能力，從而更好地保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷。MDA含量在吡蟲啉處理組中，低濃度處理下與對照組差異不顯著，高濃度處理下，在侵染后10-14天顯著低于對照組。這表明高濃度吡蟲啉能夠有效降低水稻植株細(xì)胞膜的脂質(zhì)過氧化程度，保護(hù)細(xì)胞膜的完整性，減輕RSV侵染對水稻植株的傷害。噻嗪酮處理組中，SOD活性在低濃度（25mg/L）處理下與對照組差異不顯著，高濃度（100mg/L）處理下，在侵染后7-14天顯著高于對照組。這說明高濃度噻嗪酮在病毒侵染后期能夠增強(qiáng)水稻植株的SOD活性，提高其抗氧化能力。POD活性在噻嗪酮處理組中，低濃度處理下與對照組差異不顯著，高濃度處理下，在侵染后10-14天顯著高于對照組。這表明高濃度噻嗪酮在病毒侵染后期能夠誘導(dǎo)POD活性升高，增強(qiáng)水稻植株的抗氧化防御能力。MDA含量在噻嗪酮處理組中，低濃度處理下與對照組差異不顯著，高濃度處理下，在侵染后14天顯著低于對照組。這說明高濃度噻嗪酮能夠在病毒侵染后期有效減輕水稻植株細(xì)胞膜的氧化損傷，保護(hù)細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能。圖8：不同處理下水稻植株SOD、POD活性及MDA含量變化5.3.2與稻株抗病性的關(guān)系SOD、POD等抗氧化酶在水稻植株的抗病過程中發(fā)揮著重要作用。在RSV侵染初期，水稻植株通過提高SOD和POD活性，清除體內(nèi)過多的ROS，維持細(xì)胞內(nèi)的氧化還原平衡，從而增強(qiáng)自身的抗病能力。當(dāng)SOD和POD活性受到抑制時(shí)，ROS大量積累，會(huì)對細(xì)胞造成氧化損傷，降低水稻植株的抗病性。MDA含量的變化與水稻植株的抗病性密切相關(guān)。MDA含量的升高表明細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化程度加劇，細(xì)胞膜的完整性遭到破壞，細(xì)胞功能受損，從而降低了水稻植株的抗病能力。而殺蟲劑處理能夠降低MDA含量，說明其有助于保護(hù)細(xì)胞膜的完整性，維持細(xì)胞的正常功能，進(jìn)而增強(qiáng)水稻植株的抗病性。吡蟲啉和噻嗪酮處理通過調(diào)節(jié)SOD、POD活性和MDA含量，增強(qiáng)了水稻植株的抗病性。高濃度的吡蟲啉和噻嗪酮能夠顯著提高SOD和POD活性，降低MDA含量，使水稻植株在RSV侵染過程中保持較好的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能，從而有效抵抗病毒的侵害，降低病害的發(fā)生程度。六、討論6.1兩種殺蟲劑影響灰飛虱傳毒力的機(jī)制探討本研究結(jié)果表明，吡蟲啉和噻嗪酮對灰飛虱傳毒力具有顯著影響，其作用機(jī)制主要通過改變灰飛虱的生理功能和行為習(xí)性來實(shí)現(xiàn)。從生理功能角度來看，兩種殺蟲劑對灰飛虱的取食、消化和代謝等過程產(chǎn)生了干擾。吡蟲啉作用于昆蟲神經(jīng)系統(tǒng)的煙酸乙酰膽堿酯酶受體，干擾神經(jīng)傳導(dǎo)，使灰飛虱產(chǎn)生麻痹。這種麻痹作用直接影響了灰飛虱的取食行為，導(dǎo)致其取食頻率和取食量下降。當(dāng)灰飛虱取食受到抑制時(shí)，其獲取病毒的機(jī)會(huì)相應(yīng)減少，從而降低了傳毒的可能性。在本研究中，高濃度吡蟲啉處理組的灰飛虱傳毒率顯著降低，這與吡蟲啉對取食行為的抑制密切相關(guān)。噻嗪酮通過抑制昆蟲幾丁質(zhì)合成，阻礙灰飛虱正常蛻皮和變態(tài)。幾丁質(zhì)是昆蟲表皮和中腸圍食膜的重要組成成分，幾丁質(zhì)合成受阻會(huì)影響灰飛虱的生長發(fā)育和生理功能。在實(shí)驗(yàn)中，高濃度噻嗪酮處理下，灰飛虱的生長發(fā)育受到明顯抑制，其體內(nèi)的代謝平衡也被打破。這種生理狀態(tài)的改變影響了病毒在灰飛虱體內(nèi)的增殖和傳播過程，進(jìn)而降低了傳毒力。在行為習(xí)性方面，低劑量的殺蟲劑會(huì)刺激灰飛虱的取食行為，使其在單位時(shí)間內(nèi)的取食頻率增加。這可能是因?yàn)榈蛣┝繗⑾x劑對灰飛虱的神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生了一定的刺激，使其處于興奮狀態(tài)，從而增加了取食活動(dòng)。然而，這種刺激作用并沒有提高病毒的傳播效率，反而在一定程度上增加了傳毒風(fēng)險(xiǎn)。隨著處理時(shí)間的延長和殺蟲劑濃度的升高，灰飛虱的取食行為受到抑制，傳毒率也隨之下降。殺蟲劑還可能影響灰飛虱的趨性和遷移行為?；绎w虱在稻田中的遷移和擴(kuò)散是傳播病毒的重要途徑之一。吡蟲啉和噻嗪酮處理后，灰飛虱的趨性可能發(fā)生改變，使其對感染RSV的水稻植株的識(shí)別和趨向能力下降。這使得灰飛虱在稻田中的分布和活動(dòng)范圍發(fā)生變化，減少了其與健康水稻植株的接觸機(jī)會(huì)，從而降低了傳毒率。6.2對條紋病毒RSV致害力影響的綜合分析本研究結(jié)果顯示，吡蟲啉和噻嗪酮能夠通過影響RSV基因表達(dá)和稻株生理狀態(tài)來改變RSV的致害力。從基因表達(dá)層面來看，兩種殺蟲劑處理后，稻株體內(nèi)RSV的多個(gè)編碼基因表達(dá)量發(fā)生了顯著變化。NS2、NS3、NSvc2和NSvc4等基因在病毒的復(fù)制、運(yùn)動(dòng)和傳播過程中起著關(guān)鍵作用。高濃度的吡蟲啉和噻嗪酮能夠顯著抑制這些基因的表達(dá)，從而阻礙了病毒的復(fù)制和傳播。這可能是因?yàn)闅⑾x劑干擾了病毒與稻株細(xì)胞之間的相互作用，影響了病毒基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯過程。吡蟲啉可能通過影響稻株細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)通路，抑制了與病毒復(fù)制相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子的活性，進(jìn)而降低了RSV編碼基因的表達(dá)量。在稻株生理狀態(tài)方面，殺蟲劑處理對稻株的病癥指標(biāo)和生理生化指標(biāo)產(chǎn)生了明顯影響。在病癥指標(biāo)上，高濃度的吡蟲啉和噻嗪酮能夠顯著降低SP蛋白含量，減少水稻條紋葉枯病的發(fā)病率。SP蛋白與RSV的致病過程密切相關(guān)，其含量的降低意味著病毒的致病能力受到抑制。這可能是因?yàn)闅⑾x劑減少了灰飛虱的傳毒，降低了病毒在稻株內(nèi)的濃度，從而減少了SP蛋白的合成。在生理生化指標(biāo)方面，高濃度的兩種殺蟲劑能夠顯著提高SOD、POD活性，降低MDA含量。SOD和POD是植物體內(nèi)重要的抗氧化酶，它們能夠清除體內(nèi)過多的活性氧（ROS），保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷。MDA含量則反映了細(xì)胞膜的脂質(zhì)過氧化程度，MDA含量的降低表明細(xì)胞膜受到的氧化損傷減輕。這說明殺蟲劑處理增強(qiáng)了稻株的抗氧化能力，保護(hù)了細(xì)胞膜的完整性，從而提高了稻株的抗病性。高濃度吡蟲啉可能通過誘導(dǎo)稻株內(nèi)抗氧化酶基因的表達(dá)，增加了SOD和POD的合成，從而提高了稻株的抗氧化能力。6.3研究結(jié)果的實(shí)踐應(yīng)用與展望本研究結(jié)果對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中科學(xué)用藥和病害防控具有重要的指導(dǎo)意義。在水稻條紋葉枯病的防治過程中，合理選擇和使用殺蟲劑至關(guān)重要。吡蟲啉和噻嗪酮在不同濃度下對灰飛虱傳毒力和RSV致害力的影響存在差異，高濃度的兩種殺蟲劑能夠有效降低灰飛虱傳毒率，抑制RSV在稻株內(nèi)的增殖和致病過程，從而顯著降低水稻條紋葉枯病的發(fā)病率。在實(shí)際農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，當(dāng)水稻條紋葉枯病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)較高時(shí)，可以優(yōu)先選用高濃度的吡蟲啉或噻嗪酮進(jìn)行防治，以減少灰飛虱的傳毒和病害的發(fā)生。在使用殺蟲劑時(shí)，還需要考慮其對環(huán)境和非靶標(biāo)生物的影響，遵循科學(xué)用藥的原則，避免過度使用和濫用殺蟲劑，以保護(hù)生態(tài)平衡。未來的研究可以從以下幾個(gè)方向展開。進(jìn)一步深入研究殺蟲劑與灰飛虱、RSV以及水稻植株之間的互作機(jī)制，明確殺蟲劑作用的關(guān)鍵靶點(diǎn)和信號(hào)通路，為開發(fā)更加高效、安全的防治藥劑提供理論基礎(chǔ)。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，可以利用基因編輯等技術(shù)，研究灰飛虱和RSV相關(guān)基因的功能，以及殺蟲劑對這些基因表達(dá)和功能的影響，從而揭示殺蟲劑作用的分子機(jī)制。研究不同殺蟲劑之間的復(fù)配效果，篩選出具有協(xié)同增效作用的復(fù)配組合，提高防治效果，減少單一殺蟲劑的使用量，降低抗藥性產(chǎn)生的風(fēng)險(xiǎn)。不同殺蟲劑的作用機(jī)制和防治效果存在差異，通過合理復(fù)配，可以充分發(fā)揮各殺蟲劑的優(yōu)勢，提高防治效果。開展田間長期監(jiān)測和評估，研究殺蟲劑的使用對稻田生態(tài)系統(tǒng)的長期影響，包括對有益生物種群數(shù)量和多樣性的影響，以及對土壤微生物群落結(jié)構(gòu)和功能的影響等，為制定可持續(xù)的病蟲害防治策略提供科學(xué)依據(jù)。隨著人們對生態(tài)環(huán)境的關(guān)注度不斷提高，研究殺蟲劑對生態(tài)系統(tǒng)的長期影響，對于實(shí)現(xiàn)農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展具有重要意義。七、結(jié)論7.1主要研究成果總結(jié)本研究系統(tǒng)地探究了吡蟲啉和噻嗪酮這兩種殺蟲劑對灰飛虱傳毒力以及水稻條紋病毒（RSV）致害力的影響，取得了一系列有價(jià)值的研究成果。在灰飛虱傳毒力方面，明確了兩種殺蟲劑對帶毒與不帶毒灰飛虱群體存在顯著的毒力差異。吡蟲啉和噻嗪酮對不帶毒灰飛虱的毒力均高于帶毒灰飛虱，其中吡蟲啉對不帶毒灰飛虱的毒力是帶毒灰飛虱的1.85倍，噻嗪酮對不帶毒灰飛虱的毒力是帶毒灰飛虱的1.59倍。這種毒力差異可能與帶毒灰飛虱感染RSV后體內(nèi)代謝途徑改變，解毒酶活性升高以及細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能變化有關(guān)。不同處理時(shí)間下，兩種殺蟲劑對灰飛虱傳毒能力的影響呈現(xiàn)出動(dòng)態(tài)變化。處理初期，低劑量的殺蟲劑會(huì)刺激灰飛虱取食，使其傳毒率有所上升；隨著處理時(shí)間延長，各處理組灰飛虱傳毒率均下降，高劑量處理組傳毒率下降更為明顯。這表明殺蟲劑對灰飛虱生理機(jī)能的抑制作用以及對病毒復(fù)制和傳播過程的干擾逐漸顯現(xiàn)。在對灰飛虱群體帶毒率的作用上，吡蟲啉隨著濃度增加，帶毒率逐漸下降；噻嗪酮在低濃度時(shí)帶毒率變化不明顯，高濃度時(shí)顯著下降。這說明兩種殺蟲劑通過不同機(jī)制影響灰飛虱獲取和傳播病毒的能力。在對灰飛虱泌蜜量的影響方面，吡蟲啉低濃度時(shí)使泌蜜量增加，高濃度時(shí)顯著下降；噻嗪酮隨著濃度增加，泌蜜量逐漸下降。這反映出兩種殺蟲劑對灰飛虱取食和消化系統(tǒng)的不同影響，進(jìn)