實時熒光pcr技術(shù)試題及答案

一、單項選擇題（每題2分，共10題）1.實時熒光PCR技術(shù)中，熒光信號主要來自（）A.模板DNAB.引物C.熒光探針D.緩沖液2.實時熒光PCR反應(yīng)的基本步驟不包括（）A.變性B.退火C.延伸D.轉(zhuǎn)錄3.用于實時熒光PCR定量分析的方法是（）A.終點法B.熒光強度法C.Ct值法D.吸光度法4.實時熒光PCR技術(shù)中，常用的熒光基團是（）A.溴酚藍B.熒光素C.二甲苯青D.考馬斯亮藍5.以下哪種物質(zhì)不是實時熒光PCR反應(yīng)體系的成分（）A.dNTPB.Taq酶C.限制性內(nèi)切酶D.引物6.實時熒光PCR檢測的是（）A.反應(yīng)開始時模板量B.反應(yīng)結(jié)束時產(chǎn)物量C.反應(yīng)過程中熒光信號變化D.引物結(jié)合情況7.實時熒光PCR技術(shù)可用于（）A.基因克隆B.蛋白質(zhì)測序C.病毒核酸定量D.細胞培養(yǎng)8.一般實時熒光PCR反應(yīng)的退火溫度范圍是（）A.30-40℃B.50-65℃C.70-80℃D.85-95℃9.實時熒光PCR實驗中，陰性對照的作用是（）A.檢測試劑是否污染B.確定最佳反應(yīng)條件C.比較不同樣本差異D.優(yōu)化引物設(shè)計10.熒光閾值一般設(shè)定在（）A.基線期B.指數(shù)增長期C.平臺期D.任何時期二、多項選擇題（每題2分，共10題）1.實時熒光PCR技術(shù)的優(yōu)點有（）A.靈敏度高B.特異性強C.可定量分析D.操作簡單2.實時熒光PCR反應(yīng)體系包含（）A.模板DNAB.引物C.熒光探針D.緩沖液3.熒光定量PCR常用的探針類型有（）A.TaqMan探針B.SYBRGreenIC.分子信標(biāo)D.引物二聚體4.影響實時熒光PCR結(jié)果準(zhǔn)確性的因素有（）A.模板質(zhì)量B.引物設(shè)計C.反應(yīng)條件D.儀器性能5.實時熒光PCR可應(yīng)用于（）A.疾病診斷B.藥物研發(fā)C.基因表達分析D.親子鑒定6.實時熒光PCR技術(shù)中的熒光信號來源可能是（）A.結(jié)合雙鏈DNA的熒光染料B.標(biāo)記在探針上的熒光基團C.引物自身發(fā)出的熒光D.反應(yīng)緩沖液的熒光7.關(guān)于Ct值，以下說法正確的是（）A.與起始模板量成反比B.是熒光信號達到設(shè)定閾值時的循環(huán)數(shù)C.可以用于定量分析D.不同儀器測得的Ct值不同8.實時熒光PCR實驗中，陽性對照的作用是（）A.驗證實驗體系有效性B.檢測儀器是否正常C.比較不同樣本結(jié)果D.優(yōu)化引物濃度9.在實時熒光PCR反應(yīng)中，可能出現(xiàn)的問題有（）A.引物二聚體形成B.非特異性擴增C.熒光信號弱D.反應(yīng)時間過長10.實時熒光PCR技術(shù)與傳統(tǒng)PCR技術(shù)相比，其特點在于（）A.能夠?qū)崟r監(jiān)測反應(yīng)進程B.可進行定量分析C.無需進行電泳檢測D.對實驗環(huán)境要求低三、判斷題（每題2分，共10題）1.實時熒光PCR技術(shù)只能用于DNA檢測，不能檢測RNA。（）2.熒光閾值設(shè)定越高，Ct值越小。（）3.實時熒光PCR反應(yīng)體系中引物濃度越高越好。（）4.只要實驗操作規(guī)范，實時熒光PCR結(jié)果就一定準(zhǔn)確可靠。（）5.SYBRGreenI可以特異性結(jié)合雙鏈DNA和單鏈DNA。（）6.實時熒光PCR可用于檢測基因的突變情況。（）7.Ct值相同的樣本，其起始模板量一定相同。（）8.實時熒光PCR實驗中，實驗結(jié)果出現(xiàn)假陽性可能是由于模板污染。（）9.實時熒光PCR技術(shù)不需要引物就可以進行反應(yīng)。（）10.不同廠家生產(chǎn)的實時熒光PCR儀器，其工作原理完全不同。（）四、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述實時熒光PCR技術(shù)定量的基本原理。答：基于Ct值與起始模板量的對數(shù)成反比關(guān)系。在熒光信號指數(shù)增長期，熒光信號達到設(shè)定閾值時的循環(huán)數(shù)Ct可反映起始模板量，通過已知濃度標(biāo)準(zhǔn)品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，進而對未知樣本定量。2.實時熒光PCR反應(yīng)體系中各成分的作用是什么？答：模板DNA是擴增的對象；引物引導(dǎo)DNA合成；熒光探針（或熒光染料）用于產(chǎn)生熒光信號；dNTP提供合成原料；Taq酶催化DNA合成；緩沖液維持反應(yīng)的適宜環(huán)境。3.列舉兩種實時熒光PCR常用的熒光標(biāo)記方法并簡要說明。答：①TaqMan探針法：探針兩端分別標(biāo)記熒光報告基團和淬滅基團，PCR延伸時Taq酶將探針降解，使熒光信號釋放。②SYBRGreenI法：該染料能特異性結(jié)合雙鏈DNA，隨著雙鏈DNA合成，熒光信號增強。4.實時熒光PCR實驗中，如何避免非特異性擴增？答：優(yōu)化引物設(shè)計，提高特異性；合理調(diào)整反應(yīng)條件，如退火溫度、時間等；確保模板純度，避免雜質(zhì)干擾；設(shè)置合適的陰性對照，監(jiān)控反應(yīng)體系是否存在污染。五、討論題（每題5分，共4題）1.實時熒光PCR技術(shù)在疾病診斷領(lǐng)域有哪些應(yīng)用及優(yōu)勢？答：應(yīng)用于病原體檢測，如新冠病毒核酸檢測；基因異常檢測用于腫瘤診斷等。優(yōu)勢在于靈敏度高，能早期發(fā)現(xiàn)病原體；特異性強，結(jié)果準(zhǔn)確；可定量，利于病情監(jiān)測和治療評估，且檢測快速，能及時診斷。2.在進行實時熒光PCR實驗時，若出現(xiàn)熒光信號異常，可能有哪些原因及解決方法？答：原因可能是模板質(zhì)量差、引物或探針設(shè)計不合理、反應(yīng)條件不當(dāng)、儀器故障、試劑污染等。解決方法：重新制備高質(zhì)量模板，優(yōu)化引物探針設(shè)計，調(diào)整反應(yīng)條件，檢查儀器，更換無污染試劑，必要時重新實驗。3.討論實時熒光PCR技術(shù)在基因表達分析中的作用及應(yīng)用實例。答：作用是精確測量基因轉(zhuǎn)錄水平，分析基因表達差異。實例：研究腫瘤細胞與正常細胞中某些基因表達差異，探索腫瘤發(fā)生機制；分析植物在不同環(huán)境脅迫下相關(guān)基因表達變化，了解植物應(yīng)激反應(yīng)機制。4.隨著技術(shù)發(fā)展，實時熒光PCR技術(shù)面臨哪些挑戰(zhàn)和機遇？答：挑戰(zhàn)：對實驗人員技術(shù)要求高，易出現(xiàn)實驗誤差；成本較高；存在交叉污染風(fēng)險。機遇：不斷改進優(yōu)化，提高靈敏度和特異性；在更多領(lǐng)域如精準(zhǔn)醫(yī)療、食品安全檢測等有廣闊應(yīng)用前景，與其他技術(shù)聯(lián)用可拓展功能。答案一、單項選擇題1.C2.D3.C4.B5.C6.C7.C8.B9.A10.B二、多項選