PAGE14-第01講微生物的利用最新考綱高頻考點(diǎn)核心素養(yǎng)1.微生物的分別和培育2．某種微生物數(shù)量的測(cè)定3．培育基對(duì)微生物的選擇作用4．利用微生物進(jìn)行發(fā)酵來生產(chǎn)特定的產(chǎn)物以及微生物在其他方面的應(yīng)用1.微生物的分別和培育2．培育基對(duì)微生物的選擇作用科學(xué)思維——分析與綜合：分析培育基的成分及其作用；比較與分類：平板劃線法和稀釋涂布平板法異同，選擇培育基和鑒別培育基區(qū)分科學(xué)探究——設(shè)計(jì)試驗(yàn)探究微生物培育的條件社會(huì)責(zé)任——關(guān)注有害微生物的限制及宣揚(yáng)健康生活考點(diǎn)一微生物的試驗(yàn)室培育1．培育基(1)概念：人們依據(jù)微生物對(duì)養(yǎng)分物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的養(yǎng)分基質(zhì)。(2)種類：液體培育基和固體培育基，二者的區(qū)分是是否添加凝固劑。(3)養(yǎng)分成分①主要養(yǎng)分物質(zhì)：碳源、氮源、水和無機(jī)鹽。②其他條件：pH、特別養(yǎng)分和氧氣。2．無菌技術(shù)(1)目的：獲得純凈的培育物。(2)關(guān)鍵：防止外來雜菌的入侵。(3)常用方法：滅菌和消毒。(4)無菌技術(shù)的主要方法及適用對(duì)象(連一連)答案a—Ⅲ—⑤a—V—④a—Ⅵ—③b—Ⅰ—⑥b—Ⅱ—①b—Ⅳ—②3．制備牛肉膏蛋白胨固體培育基(1)計(jì)算：依據(jù)配方比例，計(jì)算配制100mL的培育基時(shí)，各種成分的用量。(2)稱量：精確地稱取各種成分。eq\a\vs4\al\co1(3溶化)eq\b\lc\{\rc\(\a\vs4\al\co1(①牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯,②加入少量水，加熱,③牛肉膏溶化后取出稱量紙,④加入稱量好的蛋白胨和氯化鈉，攪拌,⑤加入瓊脂，加熱使其熔化，并不斷攪拌,⑥補(bǔ)加蒸餾水定容))(5)倒平板：待培育基冷卻至50℃左右時(shí)，在酒精燈火焰旁邊倒平板。4．純化大腸桿菌(1)菌落：由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體。(2)主要方法及純化原理主要方法平板劃線法稀釋涂布平板法純化原理通過接種環(huán)在瓊脂固體培育基的表面連續(xù)劃線操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培育基表面將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，稀釋度足夠高時(shí)，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞主要步驟平板劃線操作系列稀釋操作和涂布平板操作接種工具接種環(huán)涂布器平板示意圖(3)平板劃線操作中灼燒接種環(huán)的目的灼燒時(shí)間灼燒目的第一次劃線前殺死接種環(huán)上原有的微生物，防止外來雜菌污染培育基其次次及以后每次劃線前殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種干脆來源于上次劃線的末端最終一次劃線后殺死接種環(huán)上殘存的菌種，避開細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者5.菌種的保藏方法主要方法臨時(shí)保藏法甘油管藏法保藏對(duì)象頻繁運(yùn)用的菌種長(zhǎng)期保藏的菌種方法步驟先接種到試管的固體斜面培育基上培育，然后放入4℃的冰箱中轉(zhuǎn)入滅菌后的甘油中，混勻后放在－20℃冷凍箱中保存(選修1P18旁欄小資料改編)微生物的接種方法只有平板劃線法和稀釋涂布平板法嗎？微生物接種的核心是什么？答案不是。微生物的接種方法還包括斜面接種、穿刺接種等，其核心是防止雜菌污染，保證培育物的純度。診斷辨析(1)培育基一般都含有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽，有時(shí)還須要加入一些特別的物質(zhì)。(√)(2)倒平板時(shí)，應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培育基濺到皿蓋上。(×)(3)消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又削減消毒劑對(duì)細(xì)胞的損害。(√)(4)為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落。(×)(5)用稀釋涂布平板法純化大腸桿菌時(shí)，只要稀釋度足夠高，就能在培育基表面形成單個(gè)菌落。(√)1．(2024·全國卷Ⅱ)在生產(chǎn)、生活和科研實(shí)踐中，常常通過消毒和滅菌來避開雜菌的污染?；卮鹣铝袉栴}：(1)在試驗(yàn)室中，玻璃和金屬材質(zhì)的試驗(yàn)器具_(dá)_______(填“可以”或“不行以”)放入干熱滅菌箱中進(jìn)行干熱滅菌。(2)牛奶的消毒常采納巴氏消毒法或高溫瞬時(shí)消毒法，與煮沸消毒法相比，這兩種方法的優(yōu)點(diǎn)是____________________________________________________。(3)密閉空間內(nèi)的空氣可采納紫外線照耀消毒，其緣由是紫外線能________________。在照耀前，適量噴灑________，可強(qiáng)化消毒效果。(4)水廠供應(yīng)的自來水通常是經(jīng)過________(填“氯氣”“乙醇”或“高錳酸鉀”)消毒的。(5)某同學(xué)在運(yùn)用高壓蒸汽滅菌鍋時(shí)，若壓力達(dá)到設(shè)定要求，而鍋內(nèi)并沒有達(dá)到相應(yīng)溫度，最可能的緣由是__________________________。解析(1)能耐高溫的、須要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培育皿)和金屬用具等可以放入干熱滅菌箱中進(jìn)行干熱滅菌。(2)煮沸消毒法即在100℃煮沸5～6min可以殺死微生物細(xì)胞和一部分芽孢；巴氏消毒法即在70～75℃煮30min或在80℃煮15min，可以殺死微生物，并且保證養(yǎng)分物質(zhì)不被破壞。因此，與煮沸消毒法相比，牛奶消毒常采納的巴氏消毒法或高溫瞬時(shí)消毒法的優(yōu)點(diǎn)是在達(dá)到消毒目的的同時(shí)，養(yǎng)分物質(zhì)損失較少。(3)因紫外線能破壞DNA結(jié)構(gòu)，所以密閉空間內(nèi)的空氣可采納紫外線照耀消毒。在照耀前，適量噴灑消毒液，可強(qiáng)化消毒效果。(4)通常乙醇消毒是75%的酒精，有氣味，影響水質(zhì)，不相宜消毒自來水；高錳酸鉀本身有顏色，消毒后溶液呈紫紅色，無法運(yùn)用；因此水廠供應(yīng)的自來水通常是經(jīng)過氯氣消毒的。(5)采納高壓蒸汽滅菌時(shí)，鍋內(nèi)的水加熱煮沸，將其中原有的冷空氣徹底解除后才能將鍋密閉。假如未將鍋內(nèi)冷空氣排盡，則會(huì)出現(xiàn)壓力達(dá)到設(shè)定要求，而鍋內(nèi)并沒有達(dá)到相應(yīng)溫度的現(xiàn)象。答案(1)可以(2)在達(dá)到消毒目的的同時(shí)，養(yǎng)分物質(zhì)損失較少(3)破壞DNA結(jié)構(gòu)消毒液(4)氯氣(5)未將鍋內(nèi)冷空氣排盡2．(2024·廣州一測(cè))養(yǎng)殖池中存在的亞硝酸鹽能被硝化細(xì)菌汲取利用。圖甲表示探討人員從養(yǎng)殖池沉積物中分別得到硝化細(xì)菌的流程。圖乙是選擇培育時(shí)運(yùn)用的培育基配方。請(qǐng)回答：(1)圖甲中選擇培育(步驟二)的作用是__________________。在培育過程中對(duì)培育瓶進(jìn)行振蕩的目的是_____________。分別純化(步驟三)時(shí)，常采納的接種方法是________。(2)制備培育液時(shí)，應(yīng)先調(diào)整pH再進(jìn)行滅菌，目的是____________________________。制備用于分別純化(步驟三)的培育基時(shí)，圖乙所示的配方中還應(yīng)添加適量________。(3)臨時(shí)保藏菌種時(shí)，可將菌種接種到________上，在合適的溫度下培育，待菌落長(zhǎng)成后，將試管放入溫度為________的冰箱中保藏。(4)探討發(fā)覺硝化細(xì)菌汲取利用亞硝酸鹽的效果與環(huán)境中亞硝酸鹽含量有關(guān)，若要探究?jī)烧叩年P(guān)系，請(qǐng)簡(jiǎn)要寫出試驗(yàn)思路____________________________________________________。解析(1)進(jìn)行選擇培育的目的是增加目的菌的數(shù)量。振蕩的目的是增加溶氧量、使菌體與養(yǎng)分物質(zhì)充分接觸。分別純化常用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法。(2)先調(diào)pH后滅菌的目的是防止雜菌污染。分別純化目的菌需用固體培育基，因此培育基中需添加適量的瓊脂。(3)臨時(shí)保存菌種，應(yīng)將菌種接種在固體斜面培育基上，在合適的溫度下培育，待菌落長(zhǎng)出后，將試管放在4℃的冰箱中保存。答案(1)篩選出硝化細(xì)菌，并增加硝化細(xì)菌的濃度使細(xì)胞與培育液充分接觸以利于充分汲取養(yǎng)分物質(zhì)，增加溶解氧平板劃線法(或稀釋涂布平板法)(2)防止其他微生物污染瓊脂(3)固體斜面培育基4℃(4)將等量的硝化細(xì)菌分別接種到等體積的含不同濃度梯度的亞硝酸鹽的培育液中，在相宜條件下培育相同時(shí)間后，檢測(cè)并比較亞硝酸鹽的剩余量1．微生物對(duì)主要養(yǎng)分物質(zhì)的需求特點(diǎn)不同種類的微生物代謝特點(diǎn)不同，因此對(duì)培育基中養(yǎng)分物質(zhì)的需求也不同。(1)自養(yǎng)型微生物所需的主要養(yǎng)分物質(zhì)是無機(jī)物，碳源可來自大氣中的CO2，氮源可由含氮無機(jī)鹽供應(yīng)。(2)異養(yǎng)型微生物所需的養(yǎng)分物質(zhì)主要是有機(jī)物，即碳源必需由含碳有機(jī)物供應(yīng)，氮源也主要是由有機(jī)物供應(yīng)，部分異養(yǎng)型微生物也可以利用無機(jī)氮源。2．消毒和滅菌的辨析3.兩種純化細(xì)菌方法的比較項(xiàng)目?jī)?yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)適用范圍平板劃線法可以視察菌落特征，對(duì)混合菌進(jìn)行分別不能計(jì)數(shù)適用于好氧菌稀釋涂布平板法可以計(jì)數(shù)，可以視察菌落特征汲取量較少，較麻煩，平板不干燥效果不好，簡(jiǎn)潔擴(kuò)散適用于厭氧菌和兼性厭氧菌4．稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)微生物的留意問題用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)微生物時(shí)，要求選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。解題時(shí)易出現(xiàn)以下誤會(huì)：(1)只得到1個(gè)菌落數(shù)在30～300的平板是錯(cuò)誤的，錯(cuò)誤的緣由是不符合試驗(yàn)的重復(fù)原則，易受到偶發(fā)因素的影響。(2)得到3個(gè)或3個(gè)以上菌落數(shù)在30～300的平板，也不肯定正確，這可能有兩種狀況：①不同平板間差異較大，如得到3個(gè)平板，菌落數(shù)分別為230、34、240，雖然菌落數(shù)均在“30～300”之間，這也是不正確的，因?yàn)椤?4”與“230”“240”差異太大，應(yīng)重新試驗(yàn)找出緣由。②不同平板之間差異不大，是符合要求的，用其平均值作為估算的最終結(jié)果。可見，并不是只要得到3個(gè)“菌落數(shù)在30～300的平板”即可，而應(yīng)當(dāng)是涂布的同一稀釋度的平板均符合“菌落數(shù)在30～300的平板”且無較大差異，說明試驗(yàn)操作合格，才能依據(jù)計(jì)算公式進(jìn)行計(jì)算?？键c(diǎn)二微生物的分別和計(jì)數(shù)1．土壤中分解尿素的細(xì)菌的分別與計(jì)數(shù)(1)分別原理：土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗鼈兡芎铣呻迕福@種物質(zhì)在把尿素分解成無機(jī)物的過程中起到催化作用。(2)統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目一般用稀釋涂布平板法。①統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，培育基表面生長(zhǎng)的1個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中1個(gè)活菌。為了保證結(jié)果精確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。②從平板上的菌落數(shù)推想出每克樣品中的菌落數(shù)的計(jì)算方法是(平均菌落數(shù)÷涂布的稀釋液體積)×稀釋倍數(shù)。③利用稀釋涂布平板法勝利統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵是恰當(dāng)?shù)南♂尪?。走出誤區(qū)用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞在一起時(shí)，平板上視察到的只是一個(gè)菌落，而顯微計(jì)數(shù)法中由于不能區(qū)分死菌與活菌，故所得數(shù)值可能“偏高”。(3)試驗(yàn)流程：土壤取樣→樣品的稀釋→微生物的培育與視察→細(xì)菌的計(jì)數(shù)。2．分解纖維素的微生物的分別(1)纖維素酶①組成：纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。②作用纖維素eq\o(→,\s\up17(C1酶),\s\do15(CX酶))纖維二糖eq\o(→,\s\up17(葡萄糖苷酶),\s\do15())葡萄糖(2)纖維素分解菌的篩選①原理纖維素分解菌↓eq\b\lc\\rc\}(\a\vs4\al\co1(剛果紅,纖維素))→紅色復(fù)合物eq\o(→,\s\up17(纖維素酶),\s\do15())紅色消逝，出現(xiàn)透亮圈②篩選方法：剛果紅染色法，即通過是否產(chǎn)生透亮圈來篩選纖維素分解菌。③培育基：以纖維素為唯一碳源的選擇培育基。④試驗(yàn)流程土壤取樣：富含纖維素的環(huán)境↓選擇培育：用選擇培育基培育，以增加纖維素分解菌的濃度↓梯度稀釋：制備系列稀釋液↓涂布平板：將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培育基上↓選擇產(chǎn)生透亮圈的菌落(3)分別纖維素分解菌所用的兩種培育基比較分別纖維素分解菌的試驗(yàn)中先用選擇培育基，再用鑒別培育基。①選擇培育基為液體培育基，以纖維素作為碳源和能源的微生物可以正常生長(zhǎng)，而其他絕大多數(shù)微生物不能正常生長(zhǎng)。②鑒別培育基含瓊脂，為固體培育基，細(xì)菌可在培育基上形成肉眼可見的菌落。剛果紅染色法應(yīng)用的就是鑒別培育基。3．結(jié)果分析與評(píng)價(jià)走出誤區(qū)辨析兩種“比照組”與“重復(fù)組”(1)兩種比照組作用比較①推斷培育基中“是否有雜菌污染”，需將未接種的培育基同時(shí)進(jìn)行培育。②推斷選擇培育基“是否具有篩選作用”，需設(shè)立牛肉膏蛋白胨培育基進(jìn)行接種后培育，視察兩種培育基上菌落數(shù)目，進(jìn)行對(duì)比得出結(jié)論。(2)重復(fù)組的設(shè)置及作用為解除偶然因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的干擾，在每一稀釋度下宜設(shè)置3個(gè)平板作重復(fù)組，選擇菌落數(shù)均在30～300且數(shù)目相差不大的三個(gè)平板，用“平均值”代入計(jì)數(shù)公式予以計(jì)算菌落數(shù)。診斷辨析(1)選擇培育基可以鑒定某種微生物的種類。(×)(2)對(duì)細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)只能采納稀釋涂布平板法，而不能用平板劃線法。(×)(3)篩選能分解尿素的細(xì)菌所利用的培育基中，尿素是唯一的氮源。(√)(4)分解尿素的細(xì)菌在分解尿素時(shí)，可以將尿素轉(zhuǎn)化為氨，使得培育基的酸堿度降低。(×)(5)剛果紅可以與纖維素形成透亮復(fù)合物，所以可以通過是否產(chǎn)生透亮圈來篩選纖維素分解菌。(×)考向一選擇培育基的配制及應(yīng)用1．(2024·贛中南五校聯(lián)考)回答下列有關(guān)微生物培育與運(yùn)用的問題：KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2gFeCl30.1gX1g維生素微量瓊脂15g(1)如上表是篩選異養(yǎng)型細(xì)菌的培育基配方。從物理性質(zhì)上看該培育基屬于________培育基，其中成分X除了為目的菌供應(yīng)能源外，還能供應(yīng)______________________。制備該培育基的一般操作依次是計(jì)算→稱量→________→滅菌→________。對(duì)培育基進(jìn)行滅菌的常用方法是_____________________。(2)如圖A、B是純化微生物培育的兩種接種方法，C、D是接種后培育的效果。某同學(xué)接種培育后獲得圖C所示效果，則其采納的接種方法是[]____________([]填“A”或“B”)；接種時(shí)可能的失誤操作是______________________________。ABCD(3)微生物強(qiáng)化采油是利用某些微生物能降解石油、增大石油的乳化度、降低石油黏度的原理，通過向油井中注入含微生物的水來提高采油率的新技術(shù)。為篩選和純化該類微生物，應(yīng)向培育基中添加________作為唯一碳源；培育一段時(shí)間后在培育基上形成降油圈，此時(shí)選取________就可獲得高效菌株。解析(1)題表中培育基的成分有凝固劑——瓊脂，因此該培育基為固體培育基。培育基除應(yīng)含有水、無機(jī)鹽、特別養(yǎng)分物質(zhì)(維生素等)外，還應(yīng)有碳源和氮源。制備固體培育基的一般操作依次是計(jì)算→稱量→溶化→滅菌→倒平板。(2)圖A運(yùn)用接種環(huán)接種，表示的是平板劃線法，相應(yīng)培育效果如圖D所示；圖B運(yùn)用涂布器接種，表示的是稀釋涂布平板法，相應(yīng)培育效果如圖C所示。圖C所示培育基上菌落分布不勻稱，可能是接種過程中涂布不勻稱所致。(3)篩選和純化能降解石油的微生物時(shí)，應(yīng)以石油為唯一碳源。降油圈越大，說明該處微生物降解石油的實(shí)力越強(qiáng)。答案(1)固體碳源和氮源溶化倒平板高壓蒸汽滅菌法(2)B稀釋涂布平板法涂布不勻稱(3)石油降油圈大的菌落選擇培育基的制作方法1．在培育基全部養(yǎng)分成分具備的前提下，加入物質(zhì)：依據(jù)某些微生物對(duì)某些物質(zhì)的抗性，在培育基中加入某些物質(zhì)，以抑制不須要的微生物生長(zhǎng)，促進(jìn)所須要的微生物生長(zhǎng)，如培育基中加入高濃度食鹽時(shí)可抑制多種細(xì)菌的生長(zhǎng)，但不影響金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)，從而可將該菌分別出來；而在培育基中加入青霉素時(shí)可抑制細(xì)菌、放線菌的生長(zhǎng)，從而分別得到酵母菌和霉菌。2．通過變更培育基的養(yǎng)分成分達(dá)到分別微生物的目的：培育基中缺乏氮源時(shí)，可分別自生固氮微生物，非自生固氮微生物因缺乏氮源而無法生存；培育基中若缺乏有機(jī)碳源則異養(yǎng)微生物無法生存，而自養(yǎng)微生物可利用空氣中的CO2制造有機(jī)物生存。3．利用培育基的特定化學(xué)成分分別特定微生物：如當(dāng)石油是唯一碳源時(shí)，可抑制不能利用石油的微生物生長(zhǎng)，使能夠利用石油的微生物生長(zhǎng)，從而分別出能消退石油污染的微生物。4．通過某些特別環(huán)境分別微生物：如在高鹽環(huán)境中可分別耐鹽菌，其他菌在鹽濃度高時(shí)易失水而不能生存；在高溫環(huán)境中可分別得到耐高溫的微生物，其他微生物在高溫環(huán)境中因酶失活而無法生存?？枷蚨⑸锏姆謩e與計(jì)數(shù)2.(2024·石家莊二檢)資料一：瘤胃是反芻動(dòng)物的第一胃，不同品種的反芻動(dòng)物瘤胃內(nèi)微生物的種類和數(shù)量不同，含細(xì)菌多的氮利用率高，含真菌多的碳利用率高。資料二：經(jīng)探討發(fā)覺，A品種牛瘤胃內(nèi)容物每毫升細(xì)菌數(shù)為7.30×1010、真菌數(shù)為1.36×105；B品種牛瘤胃內(nèi)容物每毫升細(xì)菌數(shù)為3.78×1010、真菌數(shù)為1.6×105。依據(jù)資料回答下列問題：(1)華北地區(qū)每年6月份都會(huì)產(chǎn)生大量的小麥秸稈，要得到能分解秸稈的目的菌，最好選擇________(填“A品種?！被颉癇品種?！?的瘤胃內(nèi)容物，還需將培育基的pH調(diào)至________(填“酸性”“堿性”或“中性”)。獲得該類目的菌還須要選擇培育，緣由是________________________________。(2)將得到的目的菌涂布到鑒別纖維素分解菌的培育基上，該培育基加入的________能與纖維素形成紅色復(fù)合物?？蒲腥藛T分別得到了表中的4個(gè)菌株，其中最適合作為目的菌的是________號(hào)，推斷依據(jù)是________最大。菌株透亮圈直徑R菌株直徑rR/r1號(hào)0.40.31.32號(hào)1.20.62.03號(hào)2.20.73.14號(hào)2.10.92.3(3)現(xiàn)利用稀釋涂布平板法測(cè)定該目的菌的數(shù)量，在同一稀釋倍數(shù)下4個(gè)平板上均接種0.1mL樣品溶液，菌落數(shù)分別為156、178、486、191，通過計(jì)算得知原樣品溶液中每毫升含有目的菌1.75×108個(gè)，則稀釋倍數(shù)是________。(4)因有些微生物也能降解色素，為了確定篩選分別得到的微生物是產(chǎn)生纖維素酶的纖維素分解菌，還須要進(jìn)一步測(cè)定，最好的方法是________。A．對(duì)分解的纖維素進(jìn)行定量測(cè)定B．對(duì)纖維素酶分解纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖進(jìn)行定量測(cè)定C．對(duì)纖維素酶分解纖維素后所產(chǎn)生的纖維二糖進(jìn)行定量測(cè)定D．對(duì)纖維素分解菌進(jìn)行定量測(cè)定解析(1)秸稈的主要成分為纖維素，含碳較多，而題干信息顯示，含真菌多的碳利用率高，故欲得到能分解秸稈的目的菌，最好選擇瘤胃內(nèi)容物中真菌數(shù)多的B品種牛。胃內(nèi)容物的pH為酸性，因此需將培育基的pH調(diào)至酸性。B品種牛瘤胃內(nèi)容物中雖然真菌數(shù)多，但能分解纖維素的目的菌不肯定多，為確保能夠從樣品中分別得到目的菌，還須要選擇培育。(2)剛果紅能與纖維素形成紅色復(fù)合物，但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。當(dāng)纖維素被纖維素分解菌分解后，剛果紅—纖維素的復(fù)合物就無法形成，培育基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透亮圈。透亮圈直徑R/菌株直徑r的值越大，說明其分解纖維素的實(shí)力越強(qiáng)，最適合作為目的菌。依據(jù)表格中的數(shù)據(jù)可知，3號(hào)最適合作為目的菌。(3)為了保證結(jié)果精確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，因此原樣品溶液中每毫升含有的目的菌數(shù)1.75×108＝eq\f(156＋178＋191,3)×10×稀釋倍數(shù)，計(jì)算可知稀釋倍數(shù)為105。(4)為了確定分別得到的微生物是產(chǎn)生纖維素酶的纖維素分解菌，還需對(duì)纖維素酶分解纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖進(jìn)行定量測(cè)定。答案(1)B品種牛酸性真菌的數(shù)量雖然多，但能分解纖維素的目的菌不肯定多(答出目的菌少即可，或答“可以確保能夠從樣品中分別得到目的菌”也可)(2)剛果紅3R/r(3)105(4)B3．(2024·全國卷Ⅰ)將馬鈴薯去皮切塊，加水煮沸肯定時(shí)間，過濾得到馬鈴薯浸出液。在馬鈴薯浸出液中加入肯定量蔗糖和瓊脂，用水定容后滅菌，得到M培育基?；卮鹣铝袉栴}：(1)M培育基若用于真菌的篩選，則培育基中應(yīng)加入鏈霉素以抑制________的生長(zhǎng)，加入了鏈霉素的培育基屬于________培育基。(2)M培育基中的馬鈴薯浸出液為微生物生長(zhǎng)供應(yīng)了多種養(yǎng)分物質(zhì)，養(yǎng)分物質(zhì)類型除氮源外還有______________(答出兩點(diǎn)即可)。氮源進(jìn)入細(xì)胞后，可參加合成的生物大分子有____________________(答出兩點(diǎn)即可)。(3)若在M培育基中用淀粉取代蔗糖，接種土壤濾液并培育，平板上長(zhǎng)出菌落后可通過加入顯色劑篩選出能產(chǎn)淀粉酶的微生物。加入的顯色劑是________，該方法能篩選出產(chǎn)淀粉酶微生物的原理是____________________________。(4)甲、乙兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測(cè)定某一土壤樣品中微生物的數(shù)量，在同一稀釋倍數(shù)下得到以下結(jié)果：甲同學(xué)涂布了3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是110、140和149，取平均值133；乙同學(xué)涂布了3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是27、169和176，取平均值124。有人認(rèn)為這兩位同學(xué)的結(jié)果中，乙同學(xué)的結(jié)果可信度低，其緣由是__________________________________。解析(1)M培育基若用于真菌的篩選，說明M培育基能滿意真菌的生長(zhǎng)，而能抑制其他微生物的生長(zhǎng)，鏈霉素是一種抗生素，可以抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)。加入了鏈霉素的培育基能篩選出真菌，該培育基屬于選擇培育基。(2)微生物生長(zhǎng)須要多種養(yǎng)分物質(zhì)除氮源外，還須要碳源、無機(jī)鹽、水以及特別養(yǎng)分物質(zhì)等。氮元素是蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子的組成元素，因此氮源進(jìn)入細(xì)胞后，可參加合成的生物大分子有蛋白質(zhì)和核酸。(3)淀粉遇碘液會(huì)變成藍(lán)色，篩選產(chǎn)淀粉酶的微生物，依據(jù)淀粉遇碘液顯藍(lán)色，產(chǎn)淀粉酶的菌落四周淀粉被水解，形成透亮圈，再依據(jù)透亮圈，來篩選產(chǎn)淀粉酶的微生物。(4)乙同學(xué)結(jié)果不合理，因?yàn)?個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另2個(gè)相差懸殊，結(jié)果的重復(fù)性差，不能簡(jiǎn)潔地用其平均數(shù)作為最終結(jié)果。答案(1)細(xì)菌選擇(2)碳源、無機(jī)鹽蛋白質(zhì)、核酸(3)碘液淀粉遇碘液顯藍(lán)色，產(chǎn)淀粉酶的菌落四周淀粉被水解，形成透亮圈(4)乙同學(xué)的結(jié)果中，1個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另2個(gè)相差懸殊，結(jié)果的重復(fù)性差1．(2024·江蘇高考)酵母的蛋白質(zhì)含量可達(dá)自身干重的一半，可作為飼料蛋白的來源。有些酵母可以利用工業(yè)廢甲醇作為碳源進(jìn)行培育，這樣既可削減污染又可降低生產(chǎn)成本。探討人員擬從土壤樣品中分別該類酵母，并進(jìn)行大量培育。如圖所示為操作流程，請(qǐng)回答下列問題：(1)配制培育基時(shí)，依據(jù)培育基配方精確稱量各組分，將其溶解、定容后，調(diào)整培育基的________，剛好對(duì)培育基進(jìn)行分裝，并進(jìn)行________滅菌。(2)取步驟②中不同梯度的稀釋液加入標(biāo)記好的無菌培育皿中，在步驟③中將溫度約________(填“25℃”“50℃”或“80℃”)的培育基倒入培育皿混勻，冷凝后倒置培育。(3)挑取分別平板中長(zhǎng)出的單菌落，按步驟④所示進(jìn)行劃線。下列敘述合理的有________。a．為保證無菌操作，接種針、接種環(huán)運(yùn)用前都必需滅菌b．劃線時(shí)應(yīng)避開劃破培育基表面，以免不能形成正常菌落c．挑取菌落時(shí)，應(yīng)挑取多個(gè)菌落，分別測(cè)定酵母細(xì)胞中甲醇的含量d．可以通過逐步提高培育基中甲醇的濃度，獲得甲醇高耐受株(4)步驟⑤中，為使酵母數(shù)量快速增加，培育過程中需保證足夠的養(yǎng)分和________供應(yīng)。為監(jiān)測(cè)酵母的活細(xì)胞密度，將發(fā)酵液稀釋1000倍后，經(jīng)等體積臺(tái)盼藍(lán)染液染色，用25×16型血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)5個(gè)中格中的細(xì)胞數(shù)，理論上________色細(xì)胞的個(gè)數(shù)應(yīng)不少于________，才能達(dá)到每毫升3×109個(gè)活細(xì)胞的預(yù)期密度。解析(1)配制培育基時(shí)，依據(jù)培育基配方精確稱取各組分，之后溶解定容，再調(diào)整培育基的pH，一般狀況下，采納高壓蒸汽滅菌法對(duì)培育基進(jìn)行滅菌。(2)對(duì)培育基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌后，需將溫度降至50℃左右后倒入培育皿混勻，冷凝后倒置培育。(3)在對(duì)酵母菌進(jìn)行劃線純化時(shí)，為保證無菌操作，接種針、接種環(huán)運(yùn)用前都必需滅菌；且在劃線時(shí)應(yīng)避開劃破培育基表面，以免不能形成正常菌落；本試驗(yàn)是為了獲得能以工業(yè)廢甲醇作為碳源的酵母，故在試驗(yàn)過程中可以通過逐步提高培育基中甲醇的濃度，獲得甲醇耐受株。(4)酵母菌是兼性厭氧型真菌，有氧條件下大量繁殖。酵母菌擴(kuò)大培育時(shí)，需保證足夠的養(yǎng)分和氧氣供應(yīng)?！敖?jīng)等體積臺(tái)盼藍(lán)染液染色”，即計(jì)數(shù)室中培育液體積實(shí)際只有0.1÷2＝0.05mm3，設(shè)5個(gè)中方格中無色(活細(xì)胞不被臺(tái)盼藍(lán)染色)的