ICS67050

CCSX.04

中國(guó)儀器儀表學(xué)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)

T/CIS67002—2021

3種劇毒鵝膏菌的物種鑒別

PCR擴(kuò)增-Sanger測(cè)序法

Speciesidentificationofthreelethalamanitas—PCRamplification-

Sangersequencing

2021-11-01發(fā)布2022-01-01實(shí)施

中國(guó)儀器儀表學(xué)會(huì)發(fā)布

本標(biāo)準(zhǔn)由中國(guó)儀器儀表學(xué)會(huì)制定其著作權(quán)為中國(guó)儀器儀表學(xué)會(huì)所有除

,。

了用于法律許可范圍或事先得到中國(guó)儀器儀表學(xué)會(huì)文字上的許可外不許以任何形式再?gòu)?fù)

,

制本標(biāo)準(zhǔn)如果關(guān)于本標(biāo)準(zhǔn)有任何著作權(quán)/版權(quán)或相關(guān)咨詢請(qǐng)聯(lián)系中國(guó)儀器儀表學(xué)會(huì)或

。,

本標(biāo)準(zhǔn)出版社

!

中國(guó)儀器儀表學(xué)會(huì)簡(jiǎn)稱是中國(guó)儀器儀表與

(ChinaInstrumentandControlSociety)CIS,

測(cè)量控制科學(xué)技術(shù)工作者自愿組成并依法登記成立的學(xué)術(shù)性公益性非營(yíng)利性社團(tuán)法人是

、、,

聯(lián)系儀器儀表與測(cè)量控制科技工作者的橋梁和紐帶是發(fā)展中國(guó)儀器儀表與測(cè)量控制科學(xué)技

,

術(shù)事業(yè)的重要社會(huì)力量

。

地址北京市海淀區(qū)知春路號(hào)錦秋國(guó)際大廈座層郵編

:6A23:100088

電話傳真

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網(wǎng)址電子郵箱

::scis@

T/CIS67002—2021

目次

前言

…………………………Ⅲ

引言

…………………………Ⅳ

范圍

1………………………1

規(guī)范性引用文件

2…………………………1

術(shù)語(yǔ)和定義

3………………1

縮略語(yǔ)

4……………………2

原理

5………………………2

試劑及配制

6………………2

儀器和設(shè)備

7………………3

鑒別分析步驟

8……………3

采樣

8.1…………………3

試樣制備

8.2……………4

提取

8.3DNA……………4

擴(kuò)增

8.4PCR……………4

產(chǎn)物電泳檢測(cè)

8.5PCR…………………5

產(chǎn)物純化及膠回收

8.6PCR……………5

克隆純化

8.7……………5

測(cè)序

8.8…………………5

序列分析

8.9……………5

結(jié)果判斷與表述

9…………………………5

結(jié)果判斷

9.1……………5

結(jié)果表述

9.2……………6

檢測(cè)過(guò)程中防止交叉污染的措施

10………………………6

危害性廢棄物處理

11………………………6

附錄資料性產(chǎn)物純化及膠回收示例

A()PCR…………7

附錄資料性克隆純化示例

B()…………9

附錄資料性參考序列

C()………………10

Ⅰ

T/CIS67002—2021

前言

本文件按照標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第部分標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的規(guī)定

GB/T1.1—2020《1:》

起草

。

請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任

。。

本文件由中國(guó)儀器儀表學(xué)會(huì)提出并歸口

。

本文件起草單位國(guó)家食品安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中心湖南師范大學(xué)江西省疾病預(yù)防控制中心浙江省疾

:、、、

病預(yù)防控制中心遼寧省疾病預(yù)防控制中心

、。

本文件主要起草人李楠陳作紅江濤王佳慧何正蜜張眉眉劉洋陳鴻鵠耿英芝

:、、、、、、、、。

Ⅲ

T/CIS67002—2021

引言

采用擴(kuò)增測(cè)序法鑒別致命鵝膏等種劇毒鵝膏菌以鵝膏菌基因組為模板針

PCR-Sanger3,DNA,

對(duì)區(qū)域進(jìn)行擴(kuò)增克隆和測(cè)序通過(guò)與參考序列比對(duì)進(jìn)而對(duì)物種進(jìn)行鑒

ITS1-5.8SrDNA-ITS2PCR、,

別其優(yōu)點(diǎn)在于突破了形態(tài)學(xué)鑒定的局限性不受樣品個(gè)體形態(tài)特征發(fā)育階段的影響和限制從

。,、,DNA

水平為引發(fā)食物中毒或相關(guān)研究的鵝膏菌的物種鑒別提供依據(jù)

。

本文件的制定目的是為致命鵝膏等種劇毒鵝膏菌的物種鑒別提供統(tǒng)一的操作程序使其鑒別實(shí)

3,

現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化從而顯著提升蘑菇中毒事件的檢測(cè)鑒別和防控能力

,、。

Ⅳ

T/CIS67002—2021

3種劇毒鵝膏菌的物種鑒別

PCR擴(kuò)增-Sanger測(cè)序法

1范圍

本文件給出了種劇毒鵝膏菌物種鑒別的擴(kuò)增測(cè)序法

3PCR-Sanger。

本文件適用于致命鵝膏Amanitaexitialis灰花紋鵝膏Amanitauliinea和裂皮鵝膏

()、(fg)

Amanitarimosa的物種鑒別

()。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款其中注日期的引用文

。,

件僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于

,;,()

本文件

。

分析試驗(yàn)用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T6682—2008

轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)要求

GB/T19495.2—2004

實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品分子生物學(xué)檢測(cè)

GB/T27403—2008

動(dòng)物制品中動(dòng)物源性檢測(cè)基因條碼技術(shù)測(cè)序法

GB/T35918—2018Sanger

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件

。

31

.

鵝膏菌amanita

隸屬于真菌界擔(dān)子菌門擔(dān)子菌綱傘菌目鵝膏菌科鵝膏屬的真菌

、、、、、。

32

.

Sanger測(cè)序法Sa