ICS65.020DB13B40河北省地方標(biāo)準(zhǔn)DB13/T2954—2019畜禽飼料中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的測(cè)定高效液相色譜法河北省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布DB13/T2954—2019前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由衡水市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局提出。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：河北美創(chuàng)檢測(cè)科技有限公司、衡水市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心、衡水市農(nóng)業(yè)農(nóng)村本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：耿春輝、崔婧、梁勃、段培姿、王暉、王哲、王權(quán)、路明、高晶、劉志祥、局。陳寧。IDB13/T2954—2019畜禽飼料中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的測(cè)定高效液相色譜法警告―使用本標(biāo)準(zhǔn)的人員應(yīng)有正規(guī)實(shí)驗(yàn)室工作的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。本標(biāo)準(zhǔn)并未指出所有可能的安全問題。使用者有責(zé)任采取適當(dāng)?shù)陌踩徒】荡胧?，并保證符合國(guó)家有關(guān)法規(guī)規(guī)定的條件。1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了畜禽飼料中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇高效液相色譜測(cè)定方法的原理、試劑、儀器和設(shè)備、檢測(cè)步驟、結(jié)果計(jì)算、準(zhǔn)確度和精密度。本標(biāo)準(zhǔn)適用于飼料原料、配合飼料中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的測(cè)定。本標(biāo)準(zhǔn)的方法檢出限為10μg/kg，定量限為20μg/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3試樣中的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇用水和乙腈的混合溶液提取,經(jīng)層析柱凈化,濃縮、定容和過濾后用高效液相色譜-紫外檢測(cè)器測(cè)定,外標(biāo)法定量。4甲醇(CH3OH，CAS號(hào)：67-56-1)，色譜純。乙腈(CH3CN，CAS號(hào)：75-05-8)，色譜純。正己烷(C6H14，CAS號(hào)：110-54-3)，色譜純。活性炭，120～400目。1DB13/T2954—20194.8脫氧雪腐鐮刀菌烯醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1.0mg/mL），準(zhǔn)確稱取脫氧雪腐鐮刀菌烯醇標(biāo)準(zhǔn)品(4.7)10.0mg于50mL燒杯中，用乙腈溶解，轉(zhuǎn)移到10mL棕色容量瓶中，用乙腈定容。避光放置于4℃冰箱中，有效期為6個(gè)月。4.9脫氧雪腐鐮刀菌烯醇標(biāo)準(zhǔn)中間液（100μg/mL），準(zhǔn)確吸取10.0mL脫氧雪腐鐮刀菌烯醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(4.8)于100mL容量瓶中，用乙腈定容。避光放置于4℃冰箱中，有效期為1個(gè)月。4.10脫氧雪腐鐮刀菌烯醇標(biāo)準(zhǔn)工作液，分別準(zhǔn)確吸取脫氧雪腐鐮刀菌烯醇標(biāo)準(zhǔn)中間液(4.9)適量，用水配制成1μg/mL、2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL系列標(biāo)準(zhǔn)工作液。5儀器和設(shè)備5.15.25.35.45.55.65.75.8高效液相色譜儀，配有紫外檢測(cè)器。粉碎機(jī)。渦旋混合器。振蕩器。離心機(jī)，轉(zhuǎn)速不低于5000r/min。超聲波清洗機(jī)。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。天平，感量分別為0.1g和0.01mg。6按GB/T14699.1采集有代表性的樣品，按GB/T20195進(jìn)行試樣的制備，粉碎，通過0.85mm試驗(yàn)篩，稱取試樣25g（精確至0.01g）置于250mL具塞錐形瓶中，準(zhǔn)確加入100mL乙腈-水溶液（84+16），置于振蕩器振蕩30min，5000r/min離心5min，收集上清液于干凈的容器中備用，取10.0mL上清液置于50mL離心管中，加10.0ml乙腈飽和正己烷溶液，渦旋混合2min，5000r/min離心2min，棄去正己烷層后，待凈化。2DB13/T2954—2019a)b)c)酸性氧化鋁1g；活性炭0.5g。脫脂棉少量注：如果其他等效產(chǎn)品具有相同的效果，則可使用這些等效產(chǎn)品。6.4.2過柱、洗脫，當(dāng)柱內(nèi)溶劑液面降至上層脫脂棉與活性炭界面時(shí)，加入提取液，控制流速為每秒1～2滴，待溶液全部過柱后，用5mL乙腈淋洗柱子，收集全部流出液于雞心瓶中，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至干，加1mL水溶解殘留物，渦旋混勻1min，過0.22μm微孔濾膜于進(jìn)樣瓶，待測(cè)。6.5儀器條件高效液相色譜參考條件：a)b)c)d)e)f)色譜柱，C18柱，250mm×4.6mm，粒徑5μm；流動(dòng)相，甲醇+乙腈+水（10+10+80），用前過0.45μm濾膜，脫氣；流速，1mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)，218nm；柱溫，40℃；進(jìn)樣量，50μL。注：當(dāng)存在干擾峰或需要輔助定性時(shí)，可以采用乙腈+水=8+92為流動(dòng)相來(lái)測(cè)定。6.6定量測(cè)定以脫氧雪腐鐮刀菌烯醇標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，將系列標(biāo)準(zhǔn)溶液由低到高濃度依次進(jìn)樣檢測(cè)，得到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。試樣液中待測(cè)物的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)，超過線性范圍則應(yīng)適當(dāng)稀釋處理后再進(jìn)樣分析。7mm——試樣的稱樣量，單位為克（g）；?——1000。8重復(fù)性在重復(fù)條件下，獲得的兩次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)差值不超過這兩個(gè)測(cè)定值的算術(shù)平均值的15%。3DB13/T2954—2019