第八章食品中蛋白質(zhì)和氨基酸態(tài)氮的測(cè)定一蛋白質(zhì)的生理功能及在食品中的作用食品中蛋白質(zhì)的含量蛋白質(zhì)測(cè)定的意義四蛋白質(zhì)系數(shù)五蛋白質(zhì)的組成六蛋白質(zhì)水解七蛋白質(zhì)測(cè)定方法第一節(jié)概述蛋白質(zhì)是生命的物質(zhì)基礎(chǔ)，是構(gòu)成生物體細(xì)胞組織的重要成分，是生物體發(fā)育及修補(bǔ)組織的原料，一切有生命的活體都含有不同類型的蛋白質(zhì)。人體的酸堿平衡、水平衡的維持；遺傳信息的傳遞；物質(zhì)的代謝及運(yùn)轉(zhuǎn)都與蛋白質(zhì)有關(guān)。供給能量．人體內(nèi)每天所需的能量約14％左右來自蛋白質(zhì)，每克蛋白質(zhì)提供4千卡熱量．

一蛋白質(zhì)的生理功用

二

食品中的蛋白質(zhì)含量

在各種不同的食品中蛋白質(zhì)的含量各不相同，一般說來動(dòng)物性食品的蛋白質(zhì)含量高于植物性食品。食品中蛋白質(zhì)來源

Thesourceofproteininfood大豆（蛋白質(zhì)含量30－40％）蛋類（12%）魚類（10－12％）牛乳（3.3%）瘦肉（16％）糧谷類一般含量為7—10%，蔬菜類0.5－3％．

我國(guó)人民由谷類供給的蛋白質(zhì)占膳食中蛋白質(zhì)供給的50-60％．隨著人民生活的提高．這方面供給的蛋白質(zhì)數(shù)量減少，而肉、蛋和牛乳類蛋白質(zhì)增加。三蛋白質(zhì)測(cè)定的意義

測(cè)定食品中蛋白質(zhì)的含量，對(duì)于評(píng)價(jià)食品的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、合理開發(fā)利用食品資源、提高產(chǎn)品質(zhì)量、優(yōu)化食品配方、指導(dǎo)經(jīng)濟(jì)核算及生產(chǎn)過程控制均具有極重要的意義。四蛋白質(zhì)系數(shù)

蛋白質(zhì)是復(fù)雜的含氮有機(jī)化合物，分子量很大，大部分高達(dá)5000－1000000，分子的長(zhǎng)軸則長(zhǎng)數(shù)nm~100nm,它們由20種氨基酸通過酰胺鍵以一定的方式結(jié)合起來，并具有一定的空間結(jié)構(gòu)，所含的主要化學(xué)元素為C、H、O、N,在某些蛋白質(zhì)中還含有微量的P、Cu、Fe、I等元素，但含氮?jiǎng)t是蛋白質(zhì)區(qū)別其他有機(jī)化合物的主要標(biāo)志。五蛋白質(zhì)的組成Theelementsofprotein

C:50-55%H:6-8%O:20-23%S:0-4%N:15-18%微量元素：P、Fe、Zn、Cu、I等

不同的蛋白質(zhì)其氨基酸構(gòu)成比例及方式不同，故各種不同的蛋白質(zhì)其含氮量也不同，一般蛋白質(zhì)含氮量為16%，即一份氮素相當(dāng)于6.25份蛋白質(zhì)，此數(shù)值（6.25）稱為蛋白質(zhì)系數(shù)，

不同種類食品的蛋白質(zhì)系數(shù)有所不同，如玉米，蕎麥，青豆，雞蛋等為6.25，花生為5.46，大米為5.95，大豆及其制品為5.71，小麥粉為5.70，牛乳及其制品為6.38。六蛋白質(zhì)水解

在構(gòu)成蛋白質(zhì)的氨基酸中，亮氨酸、異亮氨酸、賴氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸、色氨酸和纈氨酸等8種氨基酸在人體內(nèi)不能合成，必須依靠食品提供，故被稱為必需氨基酸，他們對(duì)人體有極其重要的生理作用。

蛋白質(zhì)胨肽氨基酸酸、堿、酶七蛋白質(zhì)測(cè)定原理與方法

測(cè)定蛋白質(zhì)的基本原理是：

利用蛋白質(zhì)的氮、肽鍵、芳香族氨基酸、游離基和紫外吸收的性質(zhì)。1、利用蛋白質(zhì)共性的方法2、利用特定氨基酸殘基法八蛋白質(zhì)的測(cè)定方法凱氏定氮法物理法雙縮脲法染料結(jié)合法福林—酚比色法蛋白質(zhì)含量測(cè)定最常用的方法是凱氏定氮法

蛋白質(zhì)的測(cè)定，目前多采用將蛋白質(zhì)消化，測(cè)定其含氮量，再換算為蛋白質(zhì)含量的凱氏定氮法。不同食品的蛋白質(zhì)系數(shù)有所不同。

凱氏定氮法是測(cè)定總有機(jī)氮量較為準(zhǔn)確、操作較為簡(jiǎn)單的方法之一，可用于所有動(dòng)、植物食品的分析及各種加工食品的分析，可同時(shí)測(cè)定多個(gè)樣品，故國(guó)內(nèi)外應(yīng)用較為普遍，是個(gè)經(jīng)典分析方法，至今仍被作為標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法。第二節(jié)蛋白質(zhì)的測(cè)定一凱氏定氮法：常量法、微量法及經(jīng)改進(jìn)

后的改良凱氏定氮法

微量凱氏定氮法樣品質(zhì)量及試劑用量較少，且有一套微量凱氏定氮器。目前通用以硫酸銅作催化劑的常量、半微量、微量凱氏定氮法。在凱氏法改良中主要的問題是，氮化合物中氮的完全氨化問題及縮短時(shí)間、簡(jiǎn)化操作的問題，即分解試樣所用的催化劑。常量改良凱氏定氮法在催化劑中增加了二氧化鈦。

1、原理

樣品與濃硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質(zhì)分解，其中碳和氫被氧化為二氧化碳和水逸出，而樣品中的有機(jī)氮轉(zhuǎn)化為氨與硫酸結(jié)合成硫酸銨。然后加堿蒸餾，使氨蒸出，用硼酸吸收后再以標(biāo)準(zhǔn)鹽酸或硫酸溶液滴定。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)酸消耗量可計(jì)算出蛋白質(zhì)的含量。２、整個(gè)過程分三步：消化、蒸餾、吸收與滴定（一）常量凱氏定氮法

消化反應(yīng)方程式如下：

使有機(jī)物脫水后被炭化為碳、氫氮。

，將有機(jī)物炭化后的碳化為二氧化碳，硫酸則被還原成二氧化硫

2H2SO4

＋C＝2SO2＋2H2O＋CO2

二氧化硫使氮還原為氨，本身則被氧化為三氧化硫，氨隨之與硫酸作用生成硫酸銨留在酸性溶液中。

（1）樣品消化2NH2(CH)2COOH＋13H2SO4＝(NH4)2SO4＋6CO2＋12SO2＋16H2O濃硫酸具有脫水性，濃硫酸又具有氧化性H2SO4＋2NH3＝(NH4)2SO4消化催化劑：硫酸銅－硫酸鉀（2）蒸餾

在消化完全的樣品溶液中加入濃氫氧化鈉使呈堿性，加熱蒸餾，即可釋放出氨氣，反應(yīng)方程式如下：2NaOH＋(NH4)2SO4＝

2NH3↑＋Na2SO4＋2H2O（3）吸收與滴定

加熱蒸餾所放出的氨，可用硼酸溶液進(jìn)行吸收，待吸收完全后，再用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，因硼酸呈微弱酸性（k＝5.8×10-10），用酸滴定不影響指示劑的變色反應(yīng)，但它有吸收氨的作用，吸收及滴定的反應(yīng)方程式如下：2NH3+

4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3

樣品消化

蒸餾、吸收

滴定

此法可應(yīng)用于各類食品中蛋白質(zhì)含量測(cè)定

①硫酸銅

；

②硫酸鉀；③

硫酸；④

40g∕L硼酸溶液：⑤

混合指示劑：1g∕L甲基紅乙醇溶液與1g∕L甲基藍(lán)乙醇溶液，臨用時(shí)按2：1的比例混合?；蛘?g∕L甲基紅乙醇溶液與1g∕L溴甲酚綠乙醇溶液，臨用時(shí)按1：5的比例混合；

⑥400g∕L氫氧化鈉；⑦0．1mol∕L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液

2、適用范圍3、儀器4、試劑①500ml凱氏燒瓶②定氮蒸餾裝置

5、結(jié)果計(jì)算：

X=X—為樣品中蛋白質(zhì)的含量V1為樣品消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液的體積V2為試劑空白消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液的體積C為鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液的濃度MN為氮的摩爾質(zhì)量W為樣品的質(zhì)量K為氮換算為蛋白質(zhì)的系數(shù)

微量ｑ凱氏定氮法的原理與操作方法，與常量法基本相同，所不同的是樣品質(zhì)量及試劑用量較少，且有一套適于微量測(cè)定的定型儀器——微量凱氏定氮器。1、原理（二）微量凱氏定氮法（1）100ml凱氏燒瓶。（2）微量凱氏定氮器。

2、儀器

（1）20g/L硼酸溶液。

（2）400g/L氫氧化鈉。

（3）1g/L甲基紅乙醇溶液與1g/L溴甲酚綠乙醇溶液，臨用時(shí)按1：5混合。

（5）0.01000mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液

（6）其他試劑同常量法。

3、試劑4、測(cè)定方法

：準(zhǔn)確稱取均勻的固體樣品0.5～3g,或半固體樣品2～5g,或吸取溶液樣品15～25ml。小心移入干燥的凱氏燒瓶中(勿粘附在瓶壁上)。加入0.5～1g硫酸銅、10g硫酸鉀及25ml濃硫酸，小心搖勻后，于瓶口置一小漏斗，瓶頸45°角傾斜置電爐上，在通風(fēng)櫥內(nèi)加熱消化（若無通風(fēng)櫥可于瓶口倒插入一口徑適宜的干燥管，用膠管與水力真空管相連接，利用水力抽除消化過程所產(chǎn)生的煙氣）。先以小火緩慢加熱，待內(nèi)容物完全炭化、泡沫消失后，加大火力消化至溶液呈藍(lán)綠色。取下漏斗，繼續(xù)加熱0.5h，冷卻至室溫。（1）

樣品消化電子天平全自動(dòng)凱氏定氮儀（2）蒸餾

按圖安裝好微量定氮蒸餾裝置。于水蒸氣發(fā)生瓶?jī)?nèi)裝水至2/3容積處，加甲基橙指示劑數(shù)滴及硫酸數(shù)毫升，以保持水呈酸性，加入數(shù)粒玻璃珠，加熱煮沸水蒸氣發(fā)生瓶?jī)?nèi)的水。

在接受瓶?jī)?nèi)加入10ml40g/L硼酸及2滴混合指示劑，將冷凝管下端插入液面以下。

吸取10.00ml樣品消化稀釋液由進(jìn)樣漏斗進(jìn)入反應(yīng)室，以少量水沖洗進(jìn)樣漏斗，并流入反應(yīng)室。再?gòu)倪M(jìn)樣口加入10ml400g/L氫氧化鈉溶液的使呈強(qiáng)堿性，用少量蒸餾水洗漏斗數(shù)次，蓋塞，進(jìn)行水蒸氣蒸餾。冷凝管下端預(yù)先插入盛有10mL4%（或2%)硼酸吸收液下。蒸餾至吸收液中所加的混合指示劑變?yōu)榫G色開始記時(shí)，繼續(xù)蒸餾10min后，將冷凝管尖端提離液面再蒸餾1min，用蒸餾水沖洗冷凝管尖端后停止蒸餾。廢液與蒸汽冷凝水

：取下接受瓶，以0.01000mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至微紅色為終點(diǎn)。（3）滴定

(4)結(jié)果計(jì)算催化劑：硫酸鉀作用：加入硫酸鉀可以提高溶液的沸點(diǎn)而加快有機(jī)物的分解，它與硫酸鉀作用生成硫酸氫鉀可提高反應(yīng)溫度一般純硫酸的沸點(diǎn)在340攝氏度左右，而添加硫酸鉀后，可使溫度提高到4000C以上，原因主要在于隨著消化過程中硫酸不斷地被分解，水分不斷逸出而使硫酸鉀濃度增大，故沸點(diǎn)升高，其反應(yīng)式如下：

K2SO4+H2SO4=2KHSO42KHSO4=K2SO4+H2O↑+SO3

注意：

但硫酸鉀加入量不能太大，否則消化體系溫度過高，又會(huì)引起已生成的銨鹽發(fā)生熱分解而造成損失

（NH4）2SO4=NH3↑+(NH4)HSO42(NH4)HSO4=2NH3↑+2SO3↑+2H2O

除硫酸鉀外也可加入硫酸鈉，氯化鉀等鹽類來提高沸點(diǎn)，但效果不如硫酸鉀。①催化劑2CuSO4=CuSO4+SO2↑+O2C+2CuSO4=Cu2SO4+SO2↑+O2↑Cu2SO4+2H2SO4=2CuSO4+2H2O+SO2↑

此反應(yīng)不斷進(jìn)行，待有機(jī)物被消化完后，不再有硫酸亞銅（褐色）生成，溶液呈現(xiàn)清澈的藍(lán)綠色。②可以指示消化終點(diǎn)的到達(dá)③下一步蒸餾時(shí)作為堿性反應(yīng)的指示劑。

1、作用硫酸銅

CuSO4（三）微量凱氏定氮法的三個(gè)步驟總結(jié)1、消化：

將有機(jī)物和濃硫酸、催化劑一起煮沸，使有機(jī)物分解的過程.

有機(jī)物+濃硫酸------黑色物質(zhì)-----碳被氧化成為二氧化碳,氨被濃硫酸吸收成為硫酸銨.(白煙中有三氯化硫、二氧化硫等)．

注:

消化有機(jī)物時(shí)，加入少量硫酸銅和硫酸鉀作為催化劑．其中硫酸銅起催化劑作用，硫酸鉀起提高硫酸沸點(diǎn)的作用消化終點(diǎn)：顏色轉(zhuǎn)變?yōu)樽詈蟮臏\藍(lán)色。淺藍(lán)色是硫酸詞的顏色，

2、蒸餾：將消化好的樣品（其中含有硫酸銨）和濃氫氧化鈉作用，分解出氨，氨被水蒸汽蒸餾出來。被吸收于一定體積的標(biāo)準(zhǔn)溶液中．

3、滴定：用來吸收NH3的酸是過量的，可用標(biāo)準(zhǔn)的堿滴定剩余的酸（沒有和氨作用的酸）．可計(jì)算出氨的量。注：在冷卻時(shí)務(wù)必在三角燒瓶上加表面皿。滴定終點(diǎn)的控制

1、所用試劑應(yīng)用無蒸餾水配制。

2、消化過程應(yīng)注意轉(zhuǎn)動(dòng)凱氏燒瓶，利用冷凝酸

液將附在瓶壁上的炭粒沖下，以促進(jìn)消化完全。

3、若樣品含脂肪或糖較多時(shí)，應(yīng)注意發(fā)生的大量泡沫少量辛醇或液體石蠟，或硅消泡劑，防止其溢出瓶外，并注意適當(dāng)控制熱源強(qiáng)度。

4、若樣品消化液不易澄清透明，可將凱氏燒瓶冷卻，加入300g/L2~3ml過氧化氫后再加熱。（四）注意事項(xiàng)5、硫酸銅起到催化作用，加速氧化分解。硫酸銅也是蒸餾時(shí)樣品液堿化的指示劑，若所加堿量不足，分解液呈藍(lán)色不生成氫氧化銅沉淀，需再增加氫氧化鈉用量。6、若取樣量較大，如干試樣超過5g，可按每克試樣5ml的比例增加硫酸用量。7、消化時(shí)間一般約4小時(shí)左右即可，消化時(shí)間過長(zhǎng)會(huì)引起氨的損失。一般消化至透明后，繼續(xù)消化30min即可，但當(dāng)含有特別難以氨化的氮化合物的樣品，如含賴氨酸或組氨酸時(shí)，消化時(shí)間需適當(dāng)延長(zhǎng)，因?yàn)檫@兩種氨基酸中的氮在短時(shí)間內(nèi)不易消化完全，往往導(dǎo)致總氮量偏低。有機(jī)物如分解完全，分解液呈藍(lán)色或淺綠色。但含鐵量多時(shí)，呈較深綠色。8、蒸餾過程應(yīng)注意接頭處無松漏現(xiàn)象，蒸餾完畢，先將蒸餾出口離開液面，繼續(xù)蒸餾1min，將附著在尖端的吸收液完全洗入吸收瓶?jī)?nèi)，再將吸收瓶移開，最后關(guān)閉電源，絕不能先關(guān)閉電源，否則吸收液將發(fā)生倒吸。9、硼酸吸收液的溫度不應(yīng)超過40°C，否則氨吸收減弱，造成損失，可置于冷水浴中。10、混合指示劑在堿性溶液中呈綠色，在中性溶液中呈紅色，在酸性溶液中呈灰色。１、原理：脲（尿素）NH2—CO—NH2

加熱至150~160℃時(shí)，兩分子縮和成雙縮脲。雙縮脲能和硫酸銅的堿性溶液生成紫色絡(luò)和物，這種反應(yīng)叫雙縮脲反應(yīng)。二雙縮脲法２方法特點(diǎn)及應(yīng)用范圍本法靈敏度較低，但操作簡(jiǎn)單快速，故在生物化學(xué)領(lǐng)域中測(cè)定蛋白質(zhì)含量時(shí)常用此法。本法亦適用于豆類、油料、米谷等作物種子及肉類等樣品測(cè)定。特點(diǎn)：適用于發(fā)酵工業(yè)，如發(fā)酵液中含氮量，其發(fā)酵過程中氮量減少情況等。（適于食品中游離氨基酸的測(cè)定）１、原理：

蛋白質(zhì)與福林（Folin）—酚試劑反應(yīng)，產(chǎn)生藍(lán)色復(fù)合物。作用機(jī)理主要是蛋白質(zhì)中的肽鍵與堿性銅鹽產(chǎn)生雙縮脲反應(yīng)，同時(shí)也是由于蛋白質(zhì)中存在的酪氨酸與色氨酸同磷鉬酸—磷鎢酸試劑反應(yīng)產(chǎn)生顏色，呈色強(qiáng)度與蛋白質(zhì)含量成正比，是檢測(cè)可溶性蛋白質(zhì)含量最靈敏的經(jīng)典方法之一。三福林-酚比色法２、兩步反應(yīng)(1)在堿性條件下，蛋白質(zhì)與銅離子作用生成蛋白質(zhì)—銅絡(luò)合物。(2)此絡(luò)合物將試劑磷鉬酸—磷鎢酸(Ｆolin試劑)還原，混合物深藍(lán)色(磷鉬藍(lán)和磷鎢藍(lán)混合物)說明：福林—酚法靈敏度高，實(shí)測(cè)下限較雙縮脲法約小兩個(gè)數(shù)量級(jí)。但對(duì)雙縮脲法有干擾的物質(zhì)對(duì)福林酚法的影響更大。酚類及檸檬酸均對(duì)本法有干擾。測(cè)定方法：第三節(jié)氨基酸的定量測(cè)定一雙指示劑甲醛滴定法1、原理

氨基酸具有酸性的-COOH基和堿性的-NH2基。它們相互租用而使氨基酸成為中性的內(nèi)鹽。當(dāng)加入甲醛溶液時(shí)，-NH2基與甲醛結(jié)合，從而使其堿性消失。這樣就可以用強(qiáng)堿標(biāo)準(zhǔn)溶液來滴定-COOH基，并用間接的方法測(cè)定氨基酸的總量。反應(yīng)式（有三種不同的推論）如下：2、方法特點(diǎn)及應(yīng)用

此法簡(jiǎn)單易行、快速方便，與亞硝酸氮?dú)馊萘糠ǚ治鼋Y(jié)果相近。在發(fā)酵工業(yè)中常用此法測(cè)定發(fā)酵液中氨基酸含量的變化，以了解可被微生物利用的氮源的量及利用情況，并以此作為控制發(fā)酵生產(chǎn)的指標(biāo)之一。普氨酸與甲作用時(shí)產(chǎn)生不穩(wěn)定的化合物，使結(jié)果偏高;溶液中若有存在也可與甲醛反應(yīng)，往往使結(jié)果高。3、試劑（1）40%中性甲醛溶液：以百里酚酞作指示劑，用氫氧化鈉將40%甲醛中和至淡藍(lán)色。（2）0.1%百里酚酞乙醇溶液（3）0.1%中性紅50%乙醇溶液（4）0.1%mol/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液4、操作方法

移取含氨基酸約20～30mg的樣品溶液2份，分別置于250ml錐形瓶中，各加50ml蒸餾水，其中1份加入3滴中性紅置試劑，用0.1mol/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至由紅變?yōu)殓晟珵榻K點(diǎn)；另1份加入3滴百里酚酞指示劑及中性甲醛20ml，搖勻，靜置1分鐘，用0.1ml/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至淡藍(lán)色為終點(diǎn)。分別紀(jì)錄兩次所消耗的堿液ml數(shù)。

c——?dú)溲趸c標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/L;V1——用中性紅作指示劑滴定時(shí)消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL;V2——用百里酚酞作指示劑滴定時(shí)消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL;m——測(cè)定用樣品溶液相當(dāng)于樣品的質(zhì)量，g0.014——氮的毫摩爾質(zhì)量，g/mmol

5、結(jié)果計(jì)算氨基酸態(tài)氮（%）1、原理

根據(jù)氨基酸的兩性作用，加入甲醛以固定氨基的堿性，使羧基顯示出酸性，將酸度計(jì)的玻璃電極及甘汞電極同時(shí)插入被測(cè)液中構(gòu)成電池，用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，依據(jù)酸度計(jì)指示的pH值判斷和控制滴定終點(diǎn)。二電位滴定法臺(tái)式酸度計(jì)酸度計(jì)2、儀器酸度計(jì)（附磁力攪攔器）酸式滴定管：25mL胖肚吸管：10mL酸式滴定管磁力攪拌器胖肚吸管3、試劑（1）酚酞乙醇指示液：1%

硼砂（標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)）緩沖液：PH9.22稱取3.8克（2）Na2B4O7

溶解后，定容至1000mL（3）甲醛：36%-----38%（4）氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液：0.0500mol/l。酸度計(jì)4、試驗(yàn)步驟（1）吸取含氨基酸約20mg的樣品溶液，置于100mL容量瓶中，加水至刻度，混勻后吸取20.0mL燒杯中，加60mL水，開動(dòng)磁力攪拌器，用0.05mol/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至酸度計(jì)指示pH8.2（記下消耗0.05mol/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的毫升數(shù)，可計(jì)算總酸含量）。（2）加入0.1mL甲醛溶液，混勻。再用0.05mol/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)的溶液繼續(xù)滴定至pH9.2，記下消耗0.05mol/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的毫升數(shù)。（3）同時(shí)取80mL水，先用0.05mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)至pH為8.2，再加入10.0mL甲醛溶液，用0.05mol/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至pH9.2，做試劑空白試驗(yàn)。

ρ--------------氨基酸態(tài)氮質(zhì)量濃度，g/100mL;c--------------氫氧化鈉濃度，mol/L；

V1------------加入甲醛后耗NaOH的量，ml；

V2------------空白試驗(yàn)加甲醛后耗