消毒與滅菌復(fù)習(xí)引入1.細(xì)菌群體生長曲線是怎樣的？3.與細(xì)菌致病性有關(guān)的細(xì)菌代謝產(chǎn)物有哪些？2.細(xì)菌在培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象？4.滅菌的指標(biāo)是什么？細(xì)菌數(shù)目的對數(shù)培養(yǎng)時(shí)間（小時(shí)）510152025306.06.57.07.58.08.59.0活菌數(shù)總菌數(shù)教學(xué)內(nèi)容和目標(biāo)3.說出影響化學(xué)消毒劑作用的因素。2.闡述主要的熱力滅菌法、日光與紫外線滅菌法。

1.說出消毒、滅菌、防腐、無菌、無菌操作的概念。4.知道常用消毒劑的種類、使用濃度和用途。消毒(disinfection)：殺死物體上病原微生物的方法,并不一定能殺死細(xì)菌的芽孢，用以消毒的化學(xué)藥品稱為消毒劑。消毒劑對芽孢起作用則需要提高消毒劑的作用濃度和延長作用時(shí)間。基本概念滅菌(sterilization)：殺滅物體上所有微生物的方法，包括殺滅細(xì)菌芽胞、霉菌孢子在內(nèi)的全部病原微生物和非病原微生物。經(jīng)過滅菌的物品稱“無菌物品”。凡需要進(jìn)人人體內(nèi)部包括進(jìn)入血液、組織、體腔的醫(yī)用器材,如手術(shù)器械、注射用具、一切置入體腔的引流管等,都要求絕對無菌。在實(shí)驗(yàn)室,培養(yǎng)基和相關(guān)的試劑、器材也需要滅菌。防腐(antisepsis)：防止或抑制體外微生物生長繁殖的方法，細(xì)菌一般不死亡。無菌(asepsis)：不存在活的微生物，多是滅菌的結(jié)果?；靖拍顭o菌操作：防止微生物進(jìn)入機(jī)體或局部環(huán)境的操作技術(shù)。大家能舉例說出你們知道的消毒與滅菌的操作嗎？？？外科無菌手術(shù)消毒滅菌法化學(xué)消毒滅菌法物理消毒滅菌法(一)熱力滅菌法(二)輻射殺菌法(三)濾過殺菌法(四)干燥與低溫滅菌法高效消毒劑中效消毒劑低效消毒劑一、物理消毒滅菌法(一)熱力滅菌法?熱力滅菌法主要是利用高溫使菌體蛋白質(zhì)變性或凝固，酶失去活性，而使細(xì)菌死亡。

?熱力滅菌是最可靠且普遍應(yīng)用的滅菌法。

?在同樣溫度下，濕熱滅菌的效果比干熱好。

1.干熱滅菌法

焚燒：直接點(diǎn)燃或焚燒爐內(nèi)焚燒燒灼：直接火焰滅菌干烤：利用干烤箱滅菌171℃1h或160℃2h/121℃16h可滅菌，用于高溫下不變質(zhì)、不損壞、不蒸發(fā)的物品，如玻璃器皿、瓷器、玻璃注射器等。

干烤箱焚燒爐接種環(huán)酒精燈操作2.濕熱滅菌法煮沸消毒法?100℃、5min----殺死細(xì)菌的繁殖體100℃、1~2h----殺死細(xì)菌的芽孢?用途：飲水、食具和一般器械（刀、剪、注射器）等的消毒，水中加入2%碳酸鈉或2~5%石炭酸增強(qiáng)滅菌效果。流通蒸汽消毒法?又稱常壓蒸汽滅菌法，利用1個(gè)大氣壓下100℃的水蒸氣進(jìn)行消毒細(xì)菌繁殖體15~30分鐘可被殺滅,常不能殺滅全部細(xì)菌芽胞。2.濕熱滅菌法間歇滅菌法?利用反復(fù)多次的流動(dòng)蒸汽間歇加熱以達(dá)到滅菌的目的。將需要滅菌的物品置于流通蒸汽滅菌器內(nèi),100℃加熱15~30分鐘,殺死其中的繁殖體取出后放37℃孵箱過夜,使殘存的芽胞發(fā)育成繁殖體,次日再蒸一次。如此連續(xù)三次以上,可達(dá)到滅菌的效果。?此法適用于一些不耐高熱的含糖,牛奶等培養(yǎng)基。巴氏消毒法：

用較低溫度殺滅液體中的病原菌或特定微生物、以保持物品中所需的不耐熱成分不被破壞的消毒方法。用于消毒牛乳酒類61.1～62.8℃30min；71.7℃15～30s。2.濕熱滅菌法高壓蒸汽滅菌法?最普遍、最有效的滅菌方法?壓力蒸汽滅菌器(autoclave)是一個(gè)密閉、耐高壓蒸鍋。滅菌的溫度取決于蒸汽的壓力,在1個(gè)標(biāo)準(zhǔn)大氣壓下,蒸汽的溫度是100℃。如果蒸汽被限制在密閉的容器中,隨著壓力升高,蒸汽的溫度也相應(yīng)升高。在超過標(biāo)準(zhǔn)大氣壓103.4kPa(1.05kg/cm”)蒸汽壓下,溫度達(dá)到121.3℃，維持15-20分鐘,可殺滅包括細(xì)菌芽胞在內(nèi)的所有微生物。高壓滅菌鍋?常用于一般培養(yǎng)基、生理鹽水、手術(shù)敷料等耐高溫、高壓、耐濕物品的滅菌。一、物理消毒滅菌法(一)輻射滅菌法紅外線?是一種0.77~1000μm波長的電磁波,尤以1~10um波長的熱效應(yīng)最強(qiáng)。有較好的熱效應(yīng)，但只能在照射到的表面產(chǎn)生。?殺菌作用與干熱相似，多用于醫(yī)療器械和食具的滅菌。?操作時(shí)應(yīng)戴防護(hù)鏡。日光與紫外線(二)輻射滅菌法紫外線波長240~300nm的紫外線具有殺菌作用(包括日光中的紫外線),其中以265-266nm最強(qiáng),這與DNA的吸收光譜范圍一致。紫外線主要作用于DNA,使一條DNA鏈上兩個(gè)相鄰的胸腺嘧啶以共價(jià)鍵結(jié)合,形成二聚體,干擾DNA的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄,導(dǎo)致細(xì)菌的變異或死亡。紫外線穿透力較弱,可被普通玻璃、紙張、塵埃、水蒸氣等阻擋,故一般用于手術(shù)室、傳染病房、無菌實(shí)驗(yàn)室的空氣消毒,或用于不耐熱物品的表面消毒。殺菌波長的紫外線對人體皮膚、眼睛有損傷作用,使用時(shí)應(yīng)注意防護(hù)。(二)輻射滅菌法微波微波是波長為1~1000mm的電磁波,可穿透玻璃、陶瓷和薄塑料等物。主要用于食品、非金屬器械、檢驗(yàn)室用品、食品用具、藥杯等消毒。微波主要靠熱效應(yīng)發(fā)揮作用,微波通過介質(zhì)時(shí),使極性分子快速運(yùn)動(dòng),摩擦生熱,里外溫度同時(shí)上升。但微波的熱效應(yīng)必須在有一定含水量的條件下才能顯示出來,在干燥條件下,即使再延長消毒時(shí)間也不能達(dá)到有效滅菌。金屬具有導(dǎo)電性，會(huì)導(dǎo)致微波輻射在金屬表面產(chǎn)生電流，從而產(chǎn)生火花，引起火災(zāi)?。。。。?！NONONO!!!電離輻射(二)輻射滅菌法?主要包括β射線、γ射線，產(chǎn)生游離基破壞DNA，破壞細(xì)胞膜。?電離輻射常用于大量的一次性醫(yī)用塑料制品的消毒;亦可用于食品、藥品和生物制品的消毒滅菌,而不破壞其營養(yǎng)成分?具有較高的能量與穿透力，對各種細(xì)菌均有致死作用。(三)濾過除菌法

濾過除菌法是用物理阻留的方法除去液體或空氣中的細(xì)菌、真菌,以達(dá)到無菌目的,但不能除去病毒和支原體。液體除菌所用的器具是濾菌器(flter),濾菌器含有微細(xì)小孔,只允許液體通過,而大于孔徑的細(xì)菌、真菌等顆粒不能通過。濾過法主要用于一些不耐高溫的血清、毒素、抗生素的除菌。濾菌器的種類很多,目前常用的有薄膜濾菌器,由硝基纖維素膜制成,依孔徑大小分為多種規(guī)格用于除菌的濾膜孔徑在0.45μm以下,最小為0.1μm。此外還有玻璃濾菌器、石棉濾菌器、素陶瓷濾菌器等。(三)干燥和低溫抑菌法?有些細(xì)菌的繁殖體在空氣中于燥時(shí)會(huì)很快死亡,例如腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、霍亂弧菌、蒼白密螺旋體等。但有些細(xì)菌的抗干燥力較強(qiáng),如溶血性鏈球菌在塵埃中可存活25天,結(jié)核分枝桿菌在干痰中數(shù)月不死。細(xì)菌芽胞的抵抗力更強(qiáng),如炭疽芽胞桿菌的芽胞耐干燥20余年，干燥法常用于保存食物,濃鹽或糖漬食品可使細(xì)菌體內(nèi)水分逸出,造成生理性干燥,使細(xì)菌的生命活動(dòng)停止,從而防止食物變質(zhì)。干燥法常用于保存食物。?多數(shù)細(xì)菌耐低溫，低溫常用作保存菌種，當(dāng)溫度回升至適宜范圍時(shí)，細(xì)菌又能生長繁殖。為避免解凍時(shí)對細(xì)菌的損傷,可在低溫狀態(tài)下真空抽去水分,此方法稱為冷凍真空干燥法。該法是目前保存菌種的最好方法,一般可保存微生物數(shù)年至數(shù)十年。超低溫冰箱冷凍真空干燥器二、化學(xué)消毒滅菌法化學(xué)消毒滅菌法是使用化學(xué)消毒劑,其原理是:①促進(jìn)菌體蛋白質(zhì)變性或凝固;②干擾細(xì)菌的酶系統(tǒng)和代謝;③損傷細(xì)菌的細(xì)胞膜而影響細(xì)菌的化學(xué)組成、物理結(jié)構(gòu)和生理活動(dòng),從而發(fā)揮防腐、消毒甚至滅菌的作用?；瘜W(xué)消毒劑一般都對人體組織有害,只能外用或用于環(huán)境的消毒。需要強(qiáng)調(diào)的是,化學(xué)消毒劑的應(yīng)用要適度、適量和消毒時(shí)間不能過長。要注意消毒劑對人類的毒副作用、對環(huán)境的污染作用和對物體的腐蝕作用。使之既達(dá)到消毒目的,又不造成對環(huán)境污染和對人類健康的損害。（一）高效消毒劑（high-leveldisinfectants）殺滅包括細(xì)菌芽胞在內(nèi)的所有微生物，適用于不耐熱力滅菌，但要進(jìn)入人體內(nèi)部的物品，如內(nèi)鏡，塑料外科器材消毒等的消毒。二、化學(xué)消毒滅菌法1.含氯消毒劑：次氯酸鈉、漂白粉等可用于物品表面、飲用水、皮膚、地面、排泄物、污水的消毒。但對金屬制品有腐蝕作用。2.過氧化物消毒劑：二氧化氯3.醛類消毒劑：戊二醛和甲醛，其殺菌機(jī)制是對細(xì)菌蛋白質(zhì)和核酸的烷化作用，2%戊二醛適用于精密儀器/內(nèi)鏡的消毒。4.環(huán)氧乙烷：氣體消毒劑/易燃/對人體有害。（二）中效消毒劑(intermediate-leveldisinfectants)不能殺滅細(xì)菌芽胞,但能殺滅細(xì)菌繁殖體(包括結(jié)核分枝桿菌)、真菌和大多數(shù)病毒。適用于纖維內(nèi)鏡、喉鏡、陰道窺器、麻醉器材等。二、化學(xué)消毒滅菌法1.含碘消毒劑:常用為碘酊和碘伏。殺菌作用主要依靠其沉淀蛋白和強(qiáng)大的氧化能力。碘酊為碘的乙醇溶液;碘伏為碘與載體的結(jié)合物(常為聚維酮碘)。多用于皮膚黏膜、體溫計(jì)以及其他物品表面的消毒。碘酊對皮膚有刺激性,消毒后需以75%乙醇將其擦凈;碘伏著色易洗脫,刺激性較輕微。2.醇類消毒劑:醇類的殺菌活性隨碳鏈的長度增加而增加(最高活性見于5~8個(gè)碳原子)。乙醇(alcohols)或異丙醇最為常用,可迅速殺死細(xì)菌繁殖體、結(jié)核分枝桿菌、某些真菌和有包膜病毒。

殺菌機(jī)制在于去除細(xì)菌胞膜中的脂類,并使菌體蛋白質(zhì)變性。乙醇濃度為70%~75%時(shí)殺菌力最強(qiáng)。異丙醇的殺菌作用比乙醇強(qiáng),且揮發(fā)性低,但毒性較高。一般多用于醫(yī)療護(hù)理器材、皮膚的消毒和浸泡體溫計(jì)，二、化學(xué)消毒滅菌法（三）低效消毒劑(Low-leveldisinfectants)可殺滅多數(shù)細(xì)菌繁殖體,但不能殺滅細(xì)菌芽胞、結(jié)核分枝桿菌及某些抵抗力較強(qiáng)的真菌和病毒。季銨鹽類消毒劑：苯扎溴銨/新潔爾滅，可用于皮膚、黏膜、物品表面、地面消毒。氯已定/洗必泰可用于皮膚、黏膜、物品表面、地面消毒。高錳酸鉀：多用于皮膚、黏膜沖洗、浸泡消毒以及食(飲)具、蔬菜水果的消毒。1.高危器械物品

進(jìn)入無菌組織的物品，所有這些物品都應(yīng)該滅菌。最好用高壓蒸汽滅菌。

2.中危器械物品

接觸黏膜的器械。采用消毒即可。3.低危器械物品

只接觸未損傷皮膚一般用后清洗、消毒即可。4.快速周轉(zhuǎn)的醫(yī)療器械三、化學(xué)消毒滅菌法四、影響消毒滅菌效果的因素（一）微生物的種類（二）微生物的物理狀態(tài)（三）微生物的數(shù)量（四）消毒劑性質(zhì)、濃度與作用時(shí)間（五）溫度（六）酸堿度（七）有機(jī)物（一）微生物的種類微生物對消毒滅菌的敏感性高低排序大致如下:真菌、細(xì)菌繁殖體、有包膜病毒、無包膜病毒、分枝桿菌、細(xì)菌芽胞。然而,不同種或同種不同株間微生物內(nèi)在的抗性相差也很大。（二）微生物的物理狀態(tài)消毒滅菌前微生物的生長情況顯著影響它們的抵抗力。在營養(yǎng)缺陷下生長的微生物比在營養(yǎng)豐富的情況下生長的微生物具有更強(qiáng)的抵抗力。細(xì)菌繁殖體的抵抗力從開始直到對數(shù)期的后期通常較強(qiáng),自穩(wěn)定期才開始不規(guī)則地下降，（三）微生物的數(shù)量微生物最初的數(shù)量越大,所需消毒的時(shí)間就越長。消毒滅菌前嚴(yán)格的洗滌和清潔是保證消毒滅菌成功的基本步驟。如果這點(diǎn)不可能做到,如實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物,就必須延長消毒滅菌時(shí)間。四、影響消毒滅菌效果的因素（四）消毒劑性質(zhì)、濃度與作用時(shí)間（五）溫度（六）酸堿度（七）有機(jī)物氧化劑中的過氧乙酸和含氯化合物對環(huán)境和空氣中的病毒作用效果好。絕大多數(shù)消毒劑在高濃度時(shí)殺菌作用大,當(dāng)降低至一定濃度時(shí)只有抑菌作用,如含氯消毒劑濃度增加一倍,殺菌時(shí)間減少30%。但醇類例外,70%乙醇或50%~80%異丙醇的消毒效果最好,因過高濃度的醇類使菌體蛋白質(zhì)迅速脫水凝固,影響了醇類繼續(xù)向內(nèi)部滲入,降低了殺菌效果。消毒劑在一定濃度下,對細(xì)菌的作用時(shí)間愈長,消毒效果也愈好。消毒劑殺菌的實(shí)質(zhì)是化學(xué)反應(yīng)，溫度升高能提高消毒效果。消毒劑殺菌的作用受酸堿度的影響。環(huán)境中有機(jī)物的存在,能夠顯著影響消毒劑的效果。病原菌常隨同排泄物、分泌物一起存在,這些物質(zhì)如膿、痰、血液和尿可阻礙消毒劑與病原菌的接觸,并消