一、微生物

1.培養(yǎng)基

1.1成分

培養(yǎng)基的化學(xué)成分包括水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源、生長(zhǎng)因子

2、NaHCOs等無(wú)機(jī)碳源（自養(yǎng)）；糖類(lèi)、石油、生粉餅等有機(jī)碳源。異養(yǎng)微生物只

能利用有機(jī)碳源。單質(zhì)碳不能作為碳源。

2、N%、NO八NH；（無(wú)機(jī)氮源）蛋白質(zhì)、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白凍（有機(jī)氮

源）等。只有固氮微生物才能利用N2O

乳酸桿菌時(shí)需要在培養(yǎng)基中添加維生素，培養(yǎng)霉菌時(shí)須將培養(yǎng)基的PH調(diào)至酸性，

培養(yǎng)細(xì)菌是需要將PH調(diào)至中性或微堿性，培養(yǎng)厭氧型微生物是則需要提供

無(wú)氧的條件

1.2分類(lèi)

物理性質(zhì)可分為液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基

1.2.2按照用途可將培養(yǎng)基分為選擇培養(yǎng)基和鑒定培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基是指

在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物生長(zhǎng)，促進(jìn)所需要

的微生物的生長(zhǎng)。鑒另！I培養(yǎng)基是根對(duì)確定培養(yǎng)基制作是否合格的方法［口入某種

將未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1?

指示劑或化學(xué)藥品配制而成的，用以2天，無(wú)菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基的制備口加入青

是成功的，否則需要重新制備。

霉素分離得到醉母菌和霉菌，利用伊紅-關(guān)監(jiān)塔喬是鑒別大腸葉鬲

1.2.3人工合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基

1.3制備牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基

①稱量時(shí)，牛肉膏蛋白腺都易吸潮，稱量要迅速②融化加瓊脂時(shí)要不斷攪

拌，防止脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂③滅菌時(shí)，裝有培養(yǎng)基的錐形瓶要用直醫(yī)

蒸汽滅菌法,培養(yǎng)皿要用干熱滅菌法④平板冷凝后需要倒置,,既可以使

培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，防止皿蓋上冷凝的水珠落入培養(yǎng)基,造成

污染。（微生物培養(yǎng)的時(shí)候也需要倒置，另一個(gè)原因：由于重力的作用使

培養(yǎng)基表面及次層能富集微生物生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，利于微生物生長(zhǎng)。）

2滅菌與消毒

2.1消毒較為溫和的理化方法,僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分有害微生物。

包括：煮沸消毒法，巴氏消毒法（對(duì)于一些不耐高溫的液體）還有化學(xué)藥劑消毒

（如酒精、氯氣、石炭酸等）、紫外線消毒法

2.2強(qiáng)烈理化因素,殺死物體內(nèi)外所有微生物，包括芽抱和胞子。

包括：灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。

2.3滅菌①接種環(huán)、接種針、試管口等使用灼燒滅菌法；（防止x的微生物污

染培養(yǎng)基）

②玻璃器皿、金屬用具等使用干熱滅菌法，所用器械是干熱滅菌箱；

③培養(yǎng)基、無(wú)菌水等使用高壓蒸汽滅菌法，所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋。

3純化微生物的接種方法

3.1平板劃線法（適用好氧菌）和稀釋涂布平板法（適用好氧菌以及兼性厭氧菌）。

3.2平板劃線法是通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作。將聚集的菌

種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個(gè)細(xì)

胞繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的子細(xì)胞群體，這就是菌落。

3.2.1操作的第一步以、每次劃線之前、劃線操作結(jié)束時(shí)均需要灼燒接種環(huán)的目的

操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)

物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的

菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端，從

而通過(guò)劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少,最終能得到

由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及口寸殺死接種環(huán)

上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。

3.2.3在灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻后再進(jìn)行劃線，以免接種環(huán)溫度太高，殺死

菌種

3.2.4最后一區(qū)不能與第一區(qū)相連，劃線力度要適中。

3.3稀釋涂布平板法是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分

別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。分為系列稀釋操作和涂布平板

操作兩步。

3.4用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種的目的是:使聚集在一起的微生物分散成

單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落，以便于純化菌種。

4統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目

4.1測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法有稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計(jì)數(shù)。

4.2釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)（可以區(qū)分活死菌）

3?2個(gè)平板，選擇菌落數(shù)在30?300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，并取平均值。

4.3顯微鏡直接計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)（不能區(qū)分活死菌）

菌種保存

利用特定的細(xì)菌計(jì)數(shù)板或者血細(xì)胞計(jì)數(shù)板

斜面保藏4℃

2土壤中分解尿素與纖維素的細(xì)菌的分離

2.1原理

COfNH^,是因?yàn)樗麄兡芎铣煞?將尿素分解為C02,限

纖維素酶，纖維素酶是一種復(fù)合酶，即G酶、Cx酶和葡萄糖昔酶，前兩種酶使纖

維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。（棉花是自然

界中纖維素含量最高的天然產(chǎn)物）

2.2選擇培養(yǎng)基以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，富含纖維素的選擇培養(yǎng)基

2.3鑒別方法

酚紅指示劑，分解產(chǎn)生氨氣，指示劑變紅

剛果紅，剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被纖維素酶分

解后，剛果紅一纖維素的復(fù)合物就無(wú)法形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分

解菌為中心的透明圈。

二、發(fā)酵

1.果酒、果醋

L1發(fā)酵：通過(guò)微生物技術(shù)的培養(yǎng)來(lái)生產(chǎn)大量代謝產(chǎn)物的過(guò)程。

1.1.1有氧發(fā)醉：醋酸發(fā)醉谷氨酸發(fā)醉

無(wú)氧發(fā)醉：酒精發(fā)酵乳酸發(fā)醉

1.2酵母菌是兼性厭氧菌型微生物真菌

酵母菌的生殖方式：出芽生殖（主要）分裂生殖狗子生殖

1.2.1在有氧條件下，酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，大量繁殖。C6Hl2。6+6。2-6c。2+

6H2。

在無(wú)氧條件下，酵母菌能進(jìn)行酒精發(fā)酵。C此2（）6-2C2H20H+2c。2

1.2.2酒精發(fā)酹時(shí)一般將溫度控制在18℃-25℃

附著在葡萄皮表面的野生型酵母菌.在發(fā)酵過(guò)程中，隨著酒精濃度的提高,紅葡萄

皮的色素也進(jìn)入發(fā)酵液,使葡萄酒呈現(xiàn)深紅色.在缺氧、呈酸性的發(fā)醉液中，

酵母菌可以生長(zhǎng)繁殖，而絕大多數(shù)其他微生物都因無(wú)法適應(yīng)這一環(huán)境而受到

制約。

1.3醋酸菌是單細(xì)胞細(xì)菌（原核生物），代謝類(lèi)型是異養(yǎng)需氧型,生殖方式為二分裂

2GH20H+4。2-CLCOOH+6H2。

短時(shí)間中斷通入氧氣,也會(huì)引起醋酸菌死亡。②醋酸菌最適生長(zhǎng)溫度為30?35℃,

控制好發(fā)酵溫度，使發(fā)障時(shí)間縮短，又減少雜菌污染的機(jī)會(huì)。

L4實(shí)驗(yàn)流程：挑選葡萄,沖洗一榨汁-酒精發(fā)醉果酒（-＞醋酸發(fā)酵,果醋）

新鮮葡萄除去枝梗，沖洗以除去灰塵為目的，防止洗去野生酵母菌。

L2酒精檢驗(yàn)：重銘酸鉀。在酸性條件下，重銘酸鉀與酒精反應(yīng)呈現(xiàn)灰綠色。先在

試管中加入發(fā)酵液2mL,再滴入物質(zhì)的量濃度為3mol/L的H2s0,3

滴，振蕩混勻，最后滴加常溫下飽和的重銘酸鉀溶液3滴，振蕩試

管，觀察顏色

1.5實(shí)驗(yàn)裝置

長(zhǎng)而彎曲的膠管與瓶身相連接,其目的是防止空氣

生物的污染。開(kāi)口向下的目的是有利于二氧

的排出。使用該裝置制酒時(shí)，應(yīng)該關(guān)閉充氣

醋時(shí)，應(yīng)該充氣口連接氣泵，輸入氧/空氣。

進(jìn)行有氧呼吸快速繁殖，耗盡氧氣后再進(jìn)行酒精發(fā)醉，防止發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生C02

造成發(fā)醉液溢出。

2.腐乳

2.1參與微生物

多種微生物參與了豆腐的發(fā)酵，如青霉、酵母、曲霉、毛霉等，其中起主要

作用的是毛霉。毛霉是一種絲狀真菌。代謝類(lèi)型是異養(yǎng)需氧型。生殖方式是

抱子生殖。

22原理

2.2.1毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基

酸；脂肪酶可將脂肪水解為甘油和脂肪酸。

222毛霉的生長(zhǎng)：條件：將豆腐塊平放在籠屜內(nèi)，將籠屜中的控制在15?18℃,

并保持一定的濕度。（溫度過(guò)低不利于毛霉生長(zhǎng)，溫度高時(shí)菌絲易老化死

亡，影響腐乳品質(zhì)）

223來(lái)源：1.來(lái)自空氣中的毛霉泡子2.直接接種優(yōu)良毛霉菌種

2.3實(shí)驗(yàn)流程：讓豆腐上長(zhǎng)出毛霉一加鹽腌制一加鹵湯裝瓶一密封腌制

24實(shí)驗(yàn)材料

2.4.1豆腐的含水量為70%左右，水分過(guò)多則腐乳不易成形；過(guò)低，不利于毛霉生

長(zhǎng)。

2.4.2加鹽腌制：將長(zhǎng)滿毛霉的豆腐塊分層整齊地?cái)[放在瓶中，同時(shí)逐層加鹽，隨

著層數(shù)的加高而增加鹽量，接近瓶口表面的鹽要鋪厚一些。

2.4.3用鹽腌制時(shí)，注意控制鹽的用量（毛胚：食鹽=5：1）:鹽的濃度過(guò)低，不

足以抑制微生物的生長(zhǎng)，可能導(dǎo)致豆腐腐敗變質(zhì)；鹽的濃度過(guò)高會(huì)影響腐

乳的口味

2.4.4食鹽的作用：1.抑制微生物的生長(zhǎng)，避免腐敗變質(zhì)2.析出水分，是豆腐變硬，

在后期制作過(guò)程中不易酥爛3.調(diào)味作用，給腐乳以必要的咸味4.浸提毛酶

菌絲上的蛋白酶。

245鹵湯：鹵湯、香辛料一調(diào)味、殺菌防腐。鹵湯中酒的含量一般控制在12%左

右。

2.4.6酒的作用：1.防止雜菌污染2.與有機(jī)酸結(jié)合形成酯，賦予腐乳風(fēng)味3.酒精含量

越高，對(duì)蛋白酶的抑制作用也越大，使腐乳成熟期延長(zhǎng)；酒精含量過(guò)低，蛋

白酶的活性高，加快蛋白質(zhì)的水解，雜菌繁殖快，豆腐易腐敗，難以成塊。

2.5防止雜菌污染：①用來(lái)腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干凈后要用沸水消毒。②裝瓶

時(shí)，操作要迅速小心。整齊地?cái)[放好豆腐、加入鹵湯后，要用膠條將瓶口密

封。封瓶時(shí)，最好將瓶口通過(guò)酒精燈的火焰,防止瓶口被污染。

3.泡菜

3.1參與微生物及原理

3.1.1制作泡菜所用微生物是乳酸菌，其代謝類(lèi)型是異養(yǎng)厭氧型。在無(wú)基條件下,

醯、

降糖分解為乳酸。分裂方式是二分裂。反應(yīng)式為：C6Hl--------->2C3H能

旦

里。

3.1.2含抗生素牛奶不能生產(chǎn)酸奶的原因是抗生素殺死乳酸菌。常見(jiàn)的乳酸菌有

乳酸鏈球菌和乳酸桿菌。乳酸桿菌常用于生產(chǎn)酸奶。

3.1.3發(fā)酵溫度在18-20℃,過(guò)高其他雜菌活動(dòng)能力高，過(guò)低不利于乳酸菌代謝。

3.2實(shí)驗(yàn)材料

亞硝酸鹽易被還原為亞硝酸鹽。

清水與鹽的質(zhì)量比是4:1。鹽水要煮沸后冷卻，煮沸的作用①除去水中的氧

氣②殺滅水中的其他微生物。

保證乳酸菌發(fā)酵所需要的無(wú)氧環(huán)境。而且，在發(fā)酵過(guò)程中要經(jīng)常補(bǔ)水。

3.3發(fā)酵中的各類(lèi)曲線

a.有氧氣，乳酸菌活動(dòng)受到抑

制

b.乳酸菌含量達(dá)到最大，抑制

田心苗4th2,時(shí)

一般在腌制10天后亞硝酸鹽含量開(kāi)

始降低，故在10天之后食用最好

r>IJ轉(zhuǎn)。寺F際

發(fā)酵時(shí)間(d)

3.4測(cè)定亞硝酸鹽含量

在鹽酸酸化條件下,亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后，與N-1-蔡

基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料,與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)顯色液目測(cè)比較

（比色法），值算泡菜中亞硝酸鹽含量。

三、植物組織培養(yǎng)

3.1植物組織培養(yǎng)技術(shù)

3.1.1原理植物細(xì)胞的全能性。具有某種生物全套遺傳信息的任何一個(gè)活細(xì)胞，都

具有發(fā)育成完整個(gè)體的能力，即每個(gè)生物細(xì)胞都具有全能性。但在生物體的

生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中并不表現(xiàn)出來(lái)，這是因?yàn)樵谔囟ǖ臅r(shí)間和空間條件下，通過(guò)

基因的選擇性表達(dá)，構(gòu)成不同組織和器官。細(xì)胞分化使細(xì)胞生物體中細(xì)胞結(jié)

構(gòu)和功能趨向?qū)ｉT(mén)化，有利于提高各種生理功能的效率。

3.1.2基本過(guò)程外植體—愈傷組織,根、芽-植物體

離體的植物組織或細(xì)胞，在培養(yǎng)了一段時(shí)間以后，會(huì)通過(guò)細(xì)胞分裂，形成

愈傷組織，愈傷組織的細(xì)胞排列疏松而無(wú)規(guī)則，是一種高度液泡化的呈無(wú)

定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞。由高度分化的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過(guò)程,

稱為植物細(xì)胞的脫分化，或者叫做去分化。脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)

行培養(yǎng)，又可以重新分化成根或芽等器官，這個(gè)過(guò)程叫做再分化。

實(shí)現(xiàn)優(yōu)良品種的快速繁殖;培育脫毒作物;制作人工種子;培育作物新品

獨(dú)。

3.2菊花的植物組織培養(yǎng)

3.2.1材料

菊花組織培養(yǎng)一般選擇未開(kāi)花植物的莖上部新萌生的側(cè)枝作材料。一般來(lái)

說(shuō)，容易進(jìn)行無(wú)性繁殖的植物容易進(jìn)行組織培養(yǎng)。選取生長(zhǎng)旺盛嫩枝進(jìn)行

組培的是嫩枝生理狀態(tài)好，容易誘導(dǎo)脫分化和再分化。

一般將PH控制在5.8左右，溫度控制在18~22℃,并且每日用日光燈照射

12ho

3.2.3培養(yǎng)基

MS固體培養(yǎng)基：大量元素、微量元素和有機(jī)物（包括細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素）。

（在菊花組織培養(yǎng)中，可以不添加植物激素，原因是菊花莖段組織培養(yǎng)

比較容易）。

70%的酒精中搖動(dòng)2~3次，持續(xù)6~7s,立即將外植體取出,在無(wú)菌水中清洗。取出

后仍用無(wú)菌吸水紙吸干外植體表面水分，放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的氯化汞

溶液中廣2min。取出后，在無(wú)菌水中至少清洗3次，漂洗消毒液。

植物的耐受能力。

接種：接種過(guò)程中插入外植體時(shí)形態(tài)學(xué)上端朝上,每個(gè)錐形瓶接種7?8

個(gè)外植體。外植體接種與細(xì)菌接種相似，操作步驟相同，而且都要求無(wú)

菌操作。

外植體消毒不徹底；培養(yǎng)基滅菌不徹底；接種中被雜菌污染；錐形瓶密封性差等。

3.2.5移植

栽前應(yīng)先打開(kāi)培養(yǎng)瓶的封口膜，讓其在培養(yǎng)間生長(zhǎng)幾日，然后用流水清洗

根部培養(yǎng)基。然后先將幼苗移植到消過(guò)毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境中生活一

段時(shí)間，進(jìn)行壯苗。最后進(jìn)行露天栽培

組織類(lèi)細(xì)胞形細(xì)胞排

細(xì)胞來(lái)源細(xì)胞結(jié)構(gòu)細(xì)胞去向

型態(tài)列

根尖分化成多種

分生組受精卵正方形無(wú)液泡緊密

細(xì)胞組織

織

3.2月季的花藥培養(yǎng)

完全未開(kāi)放的花蕾，處于單核靠邊期的花粉。細(xì)胞核由中央移向細(xì)胞一側(cè)的時(shí)期,

花藥培養(yǎng)成功率最高

3.2.2鏡檢確定花粉發(fā)育時(shí)期的最常用的方法是醋酸洋紅法。但是，某些植物的

花粉細(xì)胞核不易著色，需采用焙花青-銘磯法，這種方法能將花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑

色

3.2.3誘導(dǎo)產(chǎn)生單倍體植株

產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑通過(guò)花藥培養(yǎng)產(chǎn)生花粉植株（即單倍體植株）一

般有兩種途徑，一種是花粉通過(guò)胚狀體階段發(fā)育為植物,另一種是花粉在

誘導(dǎo)培養(yǎng)基上先形成愈傷組織,再將其誘導(dǎo)分化成植株。這兩種途徑之間

并沒(méi)有絕對(duì)的界限，主要取決于培養(yǎng)基中激素的種類(lèi)及其濃度配比。

3.2.4培養(yǎng)條件

培養(yǎng)溫度控制在25℃左右,不需要光照.幼小植株形成后才需要光照.一般

經(jīng)過(guò)20?30大培養(yǎng)后,會(huì)發(fā)現(xiàn)花藥開(kāi)裂,長(zhǎng)出愈傷組織或形成胚狀體。將愈

傷組織及時(shí)轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，以便進(jìn)一步分化出再生植株。如果花藥

開(kāi)裂釋放出胚狀體，則一個(gè)花藥內(nèi)就會(huì)產(chǎn)生大量幼小植株，必須在花藥開(kāi)

裂后盡快將幼小植株分開(kāi)，分別移植到新的培養(yǎng)基上，否則這些植株將很

難分開(kāi)。

愈傷組高度分化高度液泡再分化成新

無(wú)定形疏松

織細(xì)胞化個(gè)體

相面點(diǎn)都通過(guò)有絲分裂進(jìn)行細(xì)胞增殖

3.2.6生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素等植物激素使用的先后順序、用量的比例影響

使用順序?qū)嶒?yàn)結(jié)果三、植.長(zhǎng)素/細(xì)胞分裂素比值與結(jié)

先生長(zhǎng)素，物果

有利于分裂但不

后細(xì)胞分裂有促根分化，

分化比值高時(shí)

素效抑芽形成

先細(xì)胞分裂成促芽分化，

細(xì)胞既分裂也分比值低時(shí)

素，分抑根形成

化

后生長(zhǎng)素的比值適中促進(jìn)愈傷組織生長(zhǎng)

同時(shí)使用分化頻率提高提

取

3.1植物芳香油的提取

3.1.1芳香油的提取方法：蒸馀、壓榨、萃取。

3.L2芳香油的性質(zhì)：揮發(fā)性強(qiáng)，成分復(fù)雜，以菇類(lèi)化合物及其衍生物為主。

3.1.3水蒸氣蒸譙法

水上蒸儲(chǔ)：原料隔放在沸水上加熱蒸儲(chǔ)。

水汽蒸鐳：利用外來(lái)高溫水蒸氣加熱蒸饋。

有些原料不適宜于水中蒸儲(chǔ)，如柑橘、檸檬等易焦糊,有效原分容易水解。

鐵架臺(tái)、酒精燈、石棉網(wǎng)、蒸播瓶、橡膠塞、蒸偏頭、溫度計(jì)、直型冷凝管、

接液管、錐形瓶，橡皮管。所有儀器必須事先干燥，保證無(wú)水安裝儀器一般

都按照自下而上、從左到右的順序。拆卸儀器的順序與安裝時(shí)相反。具體安

裝順序和方法如下。

(1)固定熱源酒精燈。

(2)固定蒸儲(chǔ)瓶，并且保持蒸鐳瓶軸心與鐵架臺(tái)的水平面垂直。

(3)安裝蒸福頭，使蒸福頭的橫截面與鐵架臺(tái)平行。

(4)連接冷凝管。保證上端出水口向上，通過(guò)橡皮管與水池相連；下端進(jìn)水

口向下，通過(guò)橡皮管與水龍頭相連。

(5)連接接液管(或稱尾接管)。

(6)將接收瓶瓶口對(duì)準(zhǔn)尾接管的出口。常壓蒸鐳一般用錐形瓶而不用燒杯作

接受器，接收瓶應(yīng)在實(shí)驗(yàn)前稱重，并做好記錄。

(7)將溫度計(jì)固定在蒸鐳頭上，使溫度計(jì)水銀球的上限與蒸鐳頭側(cè)管的下限

處在同一水平線上。

(8)蒸儲(chǔ)裝置安裝完畢后，在蒸儲(chǔ)瓶中加幾粒沸石，防止液體過(guò)度沸騰口在

整個(gè)蒸儲(chǔ)過(guò)程中，應(yīng)保證溫度計(jì)的水銀球上常有因冷凝作用而形成的液滴。

控制蒸制的時(shí)間和速度,通常以每秒1?2滴為宜。蒸鐲完畢，應(yīng)先撤出熱源,

然后停止通水，最后拆卸蒸僧裝置。

3.1.4壓榨法

分離困難，出油率低

有機(jī)溶劑中的雜質(zhì)影響芳香油的品質(zhì)

3.2玫瑰精油的提取

3.2.1試劑目的

0.Ig/mL氯化鈉溶液：促使油水混合物(乳濁液)中油和水的分離。

無(wú)水硫酸鈉：吸收油層中的水分。

①采集玫瑰花：采集盛花期（5月中上旬）的玫瑰花，清水清洗瀝干。

②裝入蒸儲(chǔ)原料：稱取50g玫瑰花放入蒸儲(chǔ)瓶，添加200mL蒸福水。4:1

③安裝蒸儲(chǔ)裝置：按照從左向右、自下到上次序安裝水蒸氣蒸播裝置。

④加熱蒸儲(chǔ)：控制蒸儲(chǔ)時(shí)間和速度（1?2滴/秒），獲得乳白色乳濁液；拆

卸裝置。

⑤分離油層：向乳濁液加入NaCl溶液后，利用分液漏斗分離出上面的油層。

⑥除去水分：向油層中加入無(wú)水硫酸鈉，24h后過(guò)濾,得到玫瑰油。

蒸播時(shí)間不能過(guò)短，溫度不能過(guò)高。

3.3橘皮精油的提取

：檸檬烯，主要分布在橘皮中。

石灰水：防止壓榨時(shí)滑脫，提高出油率，降低壓榨液黏稠度，過(guò)濾不堵塞

篩眼。

小蘇打、硫酸鈉:促進(jìn)油和水的分離（用量分別為橘皮質(zhì)量的0.25%和5%）。

①橘皮的處理：將新鮮橘皮用清水清洗瀝干。

②石灰水浸泡：用7?8%石灰水浸泡橘皮24h。

③清水漂洗：浸泡好的橘皮用流水徹底漂洗干凈，瀝干。

④粉碎和壓榨：將橘皮粉碎，加入小蘇打和硫酸鈉后,用壓榨機(jī)壓榨得到

壓榨液。

⑤過(guò)濾壓榨液：用布袋過(guò)濾，濾液再高速離心處理，分離出上層橘皮油。

⑥靜置處理：將橘皮油在5?10℃冰箱中靜置5?7d,分離出上層澄清橘皮

油。

⑦再次過(guò)濾：將下層橘皮油用濾紙過(guò)濾，濾液與上層橘皮油合并，得到橘

皮精油。

3.3.4靜置處理目的：除去果蠟和水分。

3.4胡蘿卜素的提取

橘黃色結(jié)晶，化不溶于水，微溶于乙醵，易溶于石油酸等有機(jī)溶劑。

依據(jù)碳碳雙鍵的數(shù)目劃分為a、0、丫三類(lèi)。其中最主要的組成成分為廣胡

蘿卜素。

3.4.2提取§一胡蘿卜素的方法主要有三種：①?gòu)闹参镏刑崛、趶拇竺娣e養(yǎng)殖的

巖藻中獲得③利用微生物的發(fā)酵生產(chǎn)

（影響萃取的主要因素）

水溶性的：乙醇、丙酮

水不溶性的：石油酸、乙酸乙酯、乙酸、苯、四氯化碳等（石油酸沸點(diǎn)最

高最合適）

選擇：具有較高的沸點(diǎn)，能夠充分溶解胡蘿卜素，并且不與水混溶。

3.4.4實(shí)驗(yàn)步驟粉碎T(mén)干燥T萃取T過(guò)濾一濃縮

①粉碎：使原料與有機(jī)溶劑充分接觸，增大溶解度。

②干燥：脫水溫度太高，干燥時(shí)間太長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致胡蘿卜素分解。

萃取過(guò)程應(yīng)該避免明火加熱，采用水浴加熱,這是因?yàn)橛袡C(jī)溶劑都是易燃

物，直接使用明火加熱容易引起燃燒爆炸。為了防止加熱時(shí)有機(jī)溶劑揮發(fā),

還要在加熱瓶口安裝回流冷凝裝置。萃取液的濃縮可直接使用蒸儲(chǔ)裝置。

在濃縮之前，還要進(jìn)行過(guò)濾，除去萃取液中的不溶物。

:紙層析法

濾紙：18cmX30cm

基線：濾紙下端距底邊2cm處做一基線，在基線上取A、B、C、D四點(diǎn)。

點(diǎn)樣：用最細(xì)的注射器針頭（毛細(xì)吸管）吸取樣品進(jìn)行點(diǎn)樣。點(diǎn)樣應(yīng)該快

速細(xì)致，在基線上形成直徑2mm左右的圓點(diǎn)，每次點(diǎn)樣后，可用吹風(fēng)機(jī)

將溶劑吹干，注意保持濾紙干燥。等濾紙上的點(diǎn)樣液自然揮發(fā)干后，將濾

紙卷成圓筒狀，至于裝有1cm深的石油醛的密封玻漓瓶中。等各種色素

完全分開(kāi)后，觀察標(biāo)潴樣品中位于展開(kāi)劑前沿的胡蘿、素層析帶。

四、酶、DNA、細(xì)胞固化

4.1酶

4.1.1果膠酶

果膠是植物細(xì)胞壁以及胞間層的主要成分之一，不溶于水

果膠酶不特指某一種，是一類(lèi)酶的統(tǒng)稱，

包括多聚半乳糖醛酸酚，果膠分解酶和果

膠酯酶

果膠酶的主要作用是分解果膠變成可溶

性的半乳糖醛酸，從而使果汁變得

澄清，提升水果的出汁率

探究果膠酶活性

因素：T、pH、酶抑制劑

單一變量原則

分別預(yù)熱、預(yù)pH處理，再混合

最適用量：增加酶用量，直至果汁量不再增加。最適用量與T、pH有關(guān)。

4.1.2加酶洗衣粉

包含的