雌激素雌激素

主要由卵巢產(chǎn)生，但人類的胎盤、腎上腺皮質(zhì)甚至睪丸也產(chǎn)生少量雌激素。生理功能：促進(jìn)女性器官發(fā)育、排卵。卵泡激素黃體激素十八碳固醇類激素---甾醇類激素1、雌激素主要由卵泡和黃體產(chǎn)生。促卵泡激素與黃體生成素統(tǒng)稱促性腺激素。具有促進(jìn)卵泡發(fā)育成熟作用，與黃體生成素一起促進(jìn)雌激素分泌。甾體的一般結(jié)構(gòu)

環(huán)戊烷并多氫菲的母核，其中A環(huán)、B環(huán)、C環(huán)為六元環(huán)，D環(huán)為五元環(huán)。

甾體化合物具有一個(gè)母核（A、B、C、D組成），此母核含有一個(gè)由環(huán)戊烷與氫化菲并聯(lián)的碳骨架，看上去像“田”字，環(huán)上的碳原子按圖示順序編號(hào)。幾乎所有的這類化合物分子中，在C10、C13處均分別連有一個(gè)甲基，稱為角甲基在C17處有一側(cè)鏈，這樣在母核上的三個(gè)側(cè)鏈像“巛（chuān]字，“甾”字十分形象的表示了這類化合物的基本碳架。目錄第一節(jié)典型藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)1第二節(jié)鑒別試驗(yàn)2第三節(jié)特殊雜質(zhì)的檢查3第四節(jié)含量測(cè)定4第一節(jié)典型物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)雌二醇：

一典型藥物的結(jié)構(gòu)化學(xué)名為雌甾-1，3，5（10）-三烯-3,17β-二醇。炔雌醇化學(xué)名為3-羥基-19-去甲-17α-孕甾-1,3,5(10)-三烯-20-炔－17－醇雌二醇就是卵泡激素，一般口服會(huì)引起很多副作用（乳房疼痛、體重增加、高血壓、膽結(jié)石及肝功能異常等）所以是一種通過(guò)皮膚吸收的雌激素治療劑。通常為了使用方便，常通過(guò)對(duì)其進(jìn)行改造修飾，引入乙炔基，可使其效力增加，并且可以口服有α，β兩種類型，α型生理作用強(qiáng)。α，β型就是根據(jù)C3羥基的立體位置與C10上甲基的位置決定。C3上的羥基位置與C10甲基的位置相反（即在平面下）為α型，反之相同者為β型雌激素有天然和人工合成兩大類制劑1天然雌激素類：基本上是體內(nèi)分泌的天然雌激素制劑，包括雌二醇（E2）、雌酮（E0）、雌三醇（E3）。雌二醇是婦女體內(nèi)生物活性最強(qiáng)的雌激素。它們與體內(nèi)代謝過(guò)程及第二性征的發(fā)育與維持有密切關(guān)系。2半合成雌激素類：是在甾體激素的基本結(jié)構(gòu)上經(jīng)過(guò)人工方法去丟某些基團(tuán)或增加某些基團(tuán)而合成的具有雌激素活性的藥物，如炔雌醇、尼爾雌醇等。3合成雌激素類：也稱為非甾體雌激素。此類藥物的基本結(jié)構(gòu)并非甾體的框架結(jié)構(gòu)，但它們具有雌激素活性，如己烯雌酚等天然雌激素對(duì)機(jī)體各系統(tǒng)的影響基本相同，合成制劑的作用就較強(qiáng)，下面我們講講天然雌激素戊酸雌二醇片為天然雌二醇的戊酸鹽，具有雌二醇的藥理作用，天然雌激素雌二醇雌三醇雌酮卵巢主要合成雌二醇(E2)及雌酮(E1)二種雌激素，但在血液循環(huán)內(nèi)尚有雌三醇(E3)。雌三醇是雌二醇和雌酮的降解代謝產(chǎn)物，活性最弱。目前常用雌激素藥物戊酸雌二醇雌二醇貼片炔雌醇補(bǔ)佳樂(lè)是戊酸雌二醇口服劑型，屬天然雌二醇?？赊卓箍肆_米芬抗雌激素的副作用。當(dāng)體內(nèi)的雌激素偏低時(shí)，多數(shù)會(huì)使用它來(lái)迅速補(bǔ)充。而且效果也不錯(cuò)。副作用也少。雌二醇、雌酚酮及雌三醇的生物活性強(qiáng)度比是100∶10∶3。三種天然雌激素在體內(nèi)可相互轉(zhuǎn)化：雌酚酮在脫氫酶的作用下，17位的酮基被還原成醇基，即為雌二醇，雌二醇在羥化酶的作用下，16位引入了一個(gè)羥基，即為雌三醇，這些反應(yīng)都是可逆的二典型藥物的性質(zhì)ABCD1、本類藥物的主要結(jié)構(gòu)特征：A環(huán)：為苯環(huán)，具C3–酚羥基（有些形成酯）；D環(huán)：C17有β–羥基（有些形成酯）；有的具α–乙炔基；C13上有角甲基，C10上無(wú)角甲基。α–乙炔基如炔雌醇

C3-OH、C17-OH在體內(nèi)易與葡萄糖醛酸或H2SO4結(jié)合成酯，可進(jìn)行代謝2化學(xué)性質(zhì)①弱酸性：C3-酚OH遇Fe絡(luò)合顯色②氧化性：仲醇OH（C17-OH）易被氧化，

不能口服，易在消化道破壞，故制成透皮貼劑、栓劑或肌注。③易成酯：C17-OH可成酯其酯水溶性增大，很快由尿排出體外，作用時(shí)間短。一與強(qiáng)酸呈色反應(yīng)

特點(diǎn):操作簡(jiǎn)便,反應(yīng)靈敏,通過(guò)形成的顏色或熒光的不同而互相區(qū)別,但操作條件不易掌握.

第二節(jié)鑒別試驗(yàn)?zāi)壳八姆磻?yīng)機(jī)制尚不明確，可能機(jī)制為濃硫酸與甾體酮基質(zhì)子化反應(yīng),形成正碳離子,然后與HSO4-作用呈色。主要活性基團(tuán)性質(zhì)A環(huán)為3–OH苯環(huán)UV、與重氮苯磺酸鹽反應(yīng)C17–乙炔基與AgNO3反應(yīng)C17–羥基可成酯二結(jié)構(gòu)與性質(zhì)UV紫外分光光度法雌激素類藥物紅色偶氮染料重氮苯磺酸1.酚羥基C3為酚羥基的雌激素，能與重氮苯磺酸反應(yīng)生成紅色偶氮染料。如JP(13)收載的苯甲酸雌二醇利用該法進(jìn)行鑒別。含炔基的雌激素銀鹽沉淀硝酸銀2.乙炔基的沉淀反應(yīng)↓炔雌醇三制備衍生物測(cè)定其熔點(diǎn)

四水解產(chǎn)物的反應(yīng)醋酸,戊酸和己酸酯水解后鑒別酸.生成酯,肟,縮氨基脲,或利用醇制堿液水解甾體酯類生成相應(yīng)的母體,然后測(cè)定其熔點(diǎn).五紫外分光光度法

C=C-C=O和C=C-C=C共軛系統(tǒng),可用規(guī)定波長(zhǎng)和吸收度比值法鑒別六紅外分光光度法

結(jié)構(gòu)復(fù)雜,各國(guó)藥典幾乎均采用紅外分光光度法鑒別,中國(guó)藥典95版.36種原料,其中33種采用該法.酯的生成：如炔雌醇制成苯甲酸酯。戊酸雌二醇先在堿液中水解，經(jīng)酸化加熱分別產(chǎn)生戊酸特臭結(jié)構(gòu)特征：酚羥基、C17–OHC17–乙炔基炔雌醇IR法3500--3600左右3200--37003300—3310cm-11505cm-1ν3505cm-13300cm-1ν1590cm-13610cm-1ν酚羥基醇羥基1615cm-1苯環(huán)的骨架振動(dòng)八高效液相色譜法

保留時(shí)間一致鑒別七薄層色譜法方法:

取本品1片，研細(xì)，加氯仿5ml,充分?jǐn)嚢韬?，濾過(guò)，取濾液作為供試品溶液；另取每1ml中含炔雌醚和炔諾孕酮各1mg的氯仿溶液作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（附錄ⅤB）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各30μl,分別點(diǎn)于同一硅膠Ｇ薄層板上，以氯仿－甲醇(9:1)為展開劑，展開后，晾干，噴以硫酸－無(wú)水乙醇(1:1)，在105℃加熱使顯色。供試品溶液所顯兩個(gè)成分的主斑點(diǎn)顏色和位置應(yīng)與對(duì)照品溶液所顯的斑點(diǎn)相同。簡(jiǎn)便,快速,分離效能高等特點(diǎn).炔雌醚片2000版藥典第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查

原料、中間體、異構(gòu)體、降解產(chǎn)物以及試劑和溶劑等雜質(zhì)（1）可能存在多個(gè)甾體雜質(zhì)（2）結(jié)構(gòu)類似一雜質(zhì)來(lái)源二特點(diǎn)硒雌酮其他甾體↓↑↑其他甾體

與標(biāo)示藥物結(jié)構(gòu)不同的甾體化合物都稱為“其他甾體”甾體激素藥物多由甾體母體或結(jié)構(gòu)類似的其他甾體激素制備而來(lái),也具有一定的藥理作用而又互相不相同,使其他甾體或有關(guān)物質(zhì)的限度檢查顯得非常必要,成為甾體激素藥物純度檢查的一個(gè)重要項(xiàng)目.目前國(guó)內(nèi)外多采用TLC和HPLC，36中原料中34中采用薄層色譜法檢查;10中原料已采用HPLC法.來(lái)源合成中用二氧化硒(SeO2)脫氫1、硒劇毒炔雌酮中雌酮檢查方法如下:

取本品5mg溶于0.5ml乙醇,加間二硝基苯0.05g,再加新配制的稀氫氧化鉀-乙醇液0.5ml,在暗處放置1h后,再加乙醇10ml時(shí),溶液呈現(xiàn)的顏色不得比下面的對(duì)照液更深.

對(duì)照液:不加本品同樣方法制成.

Zimmermann反應(yīng)2、雌酮原理:羰基的鄰位具有活潑亞甲基的化合物,在堿性的氫氧化鉀乙醇溶液中,與間二硝基苯反應(yīng)呈紅~藍(lán)色.Zimmermann反應(yīng),羰基的鄰位具有活潑亞甲基的化合物,在堿性的氫氧化鉀乙醇溶液中,與間二硝基苯反應(yīng)呈紅~藍(lán)色.雌酮是17-酮甾類,因此根據(jù)該反應(yīng)生成紫紅色化合物,必須使用高純度的間二硝基苯,否則呈褐色而難于判定.

齊默爾曼一）薄層色譜法藥典色譜條件:

1.薄層板:硅膠G板硅膠GF254硅膠HF254.

2.供試液和對(duì)照液的制備:取一定量供試品和對(duì)照品,分別用溶劑(如氯仿-甲醇）配成一定濃度的溶液.

3.展開劑系統(tǒng):二氯甲烷-乙醚-甲醇-水混合溶劑用得最多;

4.顯色劑:硫酸-乙醇(2:8或1:1或3:7)

5檢測(cè)法:用硫酸-乙醇顯色劑時(shí),以展開劑展開后,晾干,噴以硫酸-乙醇,在120℃或100℃加熱5min,放冷置紫外光燈(365nm)下檢視

判定法:按各藥品項(xiàng)下規(guī)定得雜質(zhì)斑點(diǎn)的數(shù)目和顏色的要求進(jìn)行判定.3、其他甾體TLCHPLC

1.色譜填充柱:C16硅膠反相色譜柱

2.流動(dòng)相:40%乙腈+60%水混合液。

3.檢測(cè)器:紫外(200nm).

二)高效液相色譜法色譜條件如下:研究表明，水中含有１ｎｇ／Ｌ雌激素或１００ｇ／Ｌ的環(huán)境激素就可引起水生生物生殖系統(tǒng)的改變，一些研究證實(shí)，天然雌激素對(duì)水生生物的Ｖｔｇ的誘導(dǎo)活性不僅遠(yuǎn)大于其它環(huán)境激素，而且還是雄魚產(chǎn)生Ｖｔｇ的主要的引發(fā)劑．隨著人口數(shù)量的增加和養(yǎng)殖業(yè)的迅猛發(fā)展，以及化工產(chǎn)品的迅速增加，排放到環(huán)境中的天然雌激素和環(huán)境激素將不斷增加，這將會(huì)增加對(duì)水環(huán)境中生態(tài)平衡的威脅．所以我們要對(duì)水環(huán)境進(jìn)行雌激素的含量測(cè)定RIA及ELISA具有很高的靈敏度,可檢測(cè)到空氣及受污染的水源中微量的雌激素,但均存在交叉響應(yīng)的問(wèn)題,測(cè)定值常高于真實(shí)值,不宜作為含量測(cè)定方法，hplc具有樣品用量少、靈敏度較高、分離效能好、快速等優(yōu)點(diǎn)因此被USP、JP、BP及中國(guó)藥典等采用。目前常用的測(cè)定雌激素類藥物的方法有比色法和分光光度法、薄層色譜法、氣相色譜法(GC)、高效液相色譜法(HPLC)、放射免疫分析法(RIA)及酶聯(lián)(ELISA)技術(shù)等。第四節(jié)含量測(cè)定比色法Kober反應(yīng)比色法氣相色譜法(GC)

高效液相色譜法(HPLC)苯環(huán)

280nm（±）USP、BP、JP均采用RP－HPLC（大多內(nèi)標(biāo)法）1.原理三、Kober反應(yīng)比色法λmax=465λmax=515△△桃紅黃色雌激素H2SO4-乙醇H2OKober反應(yīng)比色法Kober反應(yīng)是指雌激素與硫酸-乙醇共熱呈色，用水或稀硫酸稀釋后重新加熱發(fā)生顏色改變，并在515nm附近有最大吸收。Kober反應(yīng)有兩步：①與硫酸-乙醇光熱產(chǎn)生黃色，在465nm處有最大吸收；②加水或稀硫酸稀釋，重新加熱顯桃紅色，在515nm處有最大吸收。雌二醇-3-甲醚λmax=465λmax=515二、氣相色譜法(GC)色譜分析條件：色譜柱：HP-5毛細(xì)管柱（30m×0.32mm×0.25um)柱溫：300℃載氣流速：1.0ml/min汽化室和檢測(cè)器溫度：310℃采用分流進(jìn)樣方式主要儀器：HP6890氣相色譜儀，F(xiàn)ID檢測(cè)器，固相萃取柱(500mg/ml)主要試劑：雌三醇，雌二醇，雙酚A和4-壬基酚均用甲醇配成質(zhì)量濃度1g/l的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。臨用時(shí)逐級(jí)稀釋成工作所需的標(biāo)準(zhǔn)液。（甲醇，二氯甲烷均為色譜純）示例炔諾孕酮炔雌醚片--2000版藥典標(biāo)準(zhǔn)高效液相色譜法(HPLC)

填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠流動(dòng)相：乙腈－水（80:20）檢測(cè)波長(zhǎng)：220nm色譜條件取本品2