第九章G-兼性厭氧桿菌本章細(xì)菌含有3個(gè)科及2個(gè)關(guān)系未確定的屬腸桿菌科弧菌科巴氏桿菌科第一節(jié)腸桿菌科（有28個(gè)屬）共同特征：1．G－中等大小桿菌，運(yùn)動(dòng)者周身鞭毛，無芽胞，無莢膜（個(gè)別有），非抗酸染色。2．需氧兼性厭氧，普通培養(yǎng)基上生長好。3．糖發(fā)酵產(chǎn)酸（+）或產(chǎn)酸產(chǎn)氣。4．接觸酶陽性（志賀氏菌除外）。5．硝酸鹽還原試驗(yàn)陽性（歐文氏菌除外）6．在含0.5%膽鹽的培養(yǎng)基上生長。一、埃希氏菌屬本屬有5個(gè)種：大腸埃希氏菌，蟑螂～菌，費(fèi)格森～菌，赫曼氏～菌，傷口～菌。其中最重要的是大腸～菌，俗稱大腸桿菌。（一）形態(tài)及染色特征G－中等大小桿菌，八根鞭毛，能運(yùn)動(dòng)，無芽胞，無莢膜但常有微莢膜。（二）培養(yǎng)特性1．普通培養(yǎng)基上：生長良好，37℃24h形成圓形，光滑，隆起，濕潤，半透明灰白色菌落。2．普通肉湯：均勻渾濁，管底有粘性沉淀，管壁有菌環(huán)。3．麥康凱瓊脂：紅色菌落（沙門氏菌無色）原理，麥康凱平板含有乳糖有膽鹽，分解乳糖的細(xì)菌產(chǎn)酸使指示劑變紅，膽鹽有利于腸桿菌科細(xì)菌生長，對(duì)其它菌有抑制作用。大腸桿菌微菌落照片

大腸桿菌革蘭氏染色照片大腸桿菌平板菌落照片4．伊紅美藍(lán)瓊脂：黑色帶金屬閃光的菌落（沙門氏菌無色）。原理：伊紅，美蘭均為指示劑，又能抑G+生長，含有乳糖。大腸桿菌分解乳糖產(chǎn)酸時(shí)細(xì)菌帶正電荷，染上紅色，再與美蘭結(jié)合形成紫黑色菌落，不分解乳糖不著色，伊紅美藍(lán)不結(jié)合，故沙門氏菌無色。5．遠(yuǎn)藤氏瓊脂：帶金屬光澤的紅色菌落。6．SS瓊脂（沙門氏菌—志賀氏菌分離培養(yǎng)基）：紅色小菌落。7．三糖鐵（TSI）：斜面黃色，底部黃色，不產(chǎn)生H2S。原理：三糖鐵含葡萄糖、乳糖，蔗糖。其中乳糖、蔗糖含量為G的10倍，大腸桿菌三種糖均發(fā)酵產(chǎn)酸，足以使底部和斜面變黃。沙門氏菌不發(fā)酵乳糖和蔗糖，只發(fā)酵G產(chǎn)酸，斜面部分先變黃，但產(chǎn)酸量少且接觸空氣又受到氧化，另外分解含氮物質(zhì)產(chǎn)堿，所以斜面又變?yōu)榧t色，而下端的酸不被氧化，一直呈黃色。（三）生化特征G乳麥蔗⊕⊕⊕⊕靛基質(zhì)實(shí)驗(yàn)：+（I）；MR（甲基紅試驗(yàn)）+（M）VP（乙酰甲基醇）－（Vi）；檸檬酸基利用試驗(yàn)－（C）IMViC++－－硝酸鹽還原試驗(yàn)+、H2S－、尿素分解－三糖鐵：斜面黃色/底部黃色，不產(chǎn)生H2S。（四）抗原構(gòu)造及血清型：大腸桿菌抗原主要有O抗原（菌體抗原，有173種），K抗原（被膜或莢膜抗原，有80種），H抗原（鞭毛抗原，有56種）。1．O抗原：存在于細(xì)胞壁中，由脂多糖（LPS）中的特異性多糖側(cè)鏈組成，O抗原是S型菌的一種耐熱菌體抗原，121℃2h不破壞其抗原性，當(dāng)S型菌丟失特異性多糖側(cè)鏈時(shí)，即變?yōu)镽型菌，O抗原也隨之丟失。2．K抗原：位于菌體表面的莢膜或被膜中，在80種K抗原中，除K88，K99是兩種蛋白質(zhì)抗原外，其余均為多糖。具有K抗原的菌株不能被其相應(yīng)的抗O血清所凝集叫“O不凝集性”。因?yàn)镵抗原可抑制活細(xì)菌在相應(yīng)抗O血清中的凝集反應(yīng)，這樣可作為判定大腸桿菌是否具有K抗原的一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)。據(jù)耐熱性不同，K抗原又分為：L、A、B三型。L型K抗原：對(duì)熱敏感100℃1h破壞其抗原性，并失去與相應(yīng)抗體的結(jié)合力和凝集性，位于被膜中，偶見于莢膜中。A型K抗原：耐100℃1h，但121℃2.5h破壞其抗原性和O不凝集性，但保留與相應(yīng)抗體結(jié)合能力。位于莢膜中，抗A血清可使具有相應(yīng)A抗原的菌體出現(xiàn)莢膜腫脹現(xiàn)象。B型K抗原：100℃1h破壞其抗原性與相應(yīng)抗體的凝集性，但保留其與相應(yīng)抗體結(jié)合力。3．H抗原：不耐熱，是一種蛋白質(zhì)，抗原性好，80℃破壞其抗原性，每一個(gè)有動(dòng)力的細(xì)菌僅含一種H抗原，且無兩相變異，無鞭毛細(xì)菌無H抗原。根據(jù)大腸桿菌抗原的鑒定，可用O∶K∶H排列表示其血清型即大腸桿菌抗原結(jié)構(gòu)式：O8∶K23（L）∶H19表示該菌具有O抗原8，L型K抗原23，H抗原為19。（五）致病性大多數(shù)是在正常條件下不致病的共棲菌，但特定條件下，如移位侵入腸外組織或器官可致腸桿菌??；但也有極少數(shù)是病原性大腸桿菌。據(jù)毒力因子與發(fā)病機(jī)制不同可分五類：（1）產(chǎn)腸毒素大腸桿菌（ETEC）：引起人和幼畜腹瀉（黃?。＃?）產(chǎn)類志賀毒素大腸桿菌（SLTEC）：引起豬水腫病，犢牛出血性腸炎。（3）腸致病性大腸桿菌（EPEC）：兔腹瀉，豬腹瀉。（4）敗血性大腸桿菌（SEPEC）：豬，犢牛敗血癥，雞的大腸桿菌敗血癥，氣腸炎，腦膜炎，腸炎，肉芽腫。（5）尿道致病性大腸桿菌（UPEC）：犬、豬的尿道感染。

（一）產(chǎn)腸毒素大腸桿菌：由粘附表性菌毛和腸毒素兩類毒力因子構(gòu)成，具致病力與二者密切相關(guān)，缺一不可。1．粘附素性菌毛：又叫粘附素或定居因子，其對(duì)應(yīng)的抗原叫粘附素抗原或定居因子抗原。已發(fā)現(xiàn)的粘附素有F4（K88）、F5（K99）、F6（987P），F(xiàn)41，F(xiàn)42，F(xiàn)17。它不是導(dǎo)致宿主腹瀉的直接致病因子，但是構(gòu)成ETEC感染的重要毒力因子。ETEC必須首先粘附于宿主的小腸上皮細(xì)胞，才能避免腸蠕動(dòng)和腸液分泌的清除作用，并得以在腸內(nèi)定居和繁殖，進(jìn)而發(fā)揮致病作用。2．在體內(nèi)或體外生長時(shí)產(chǎn)生并分泌到細(xì)胞外的一種蛋白質(zhì)毒素，根據(jù)對(duì)熱的耐受性不同分為：①不耐熱腸毒素（LT）：65℃30min滅活，有抗原性。作用于小

腸和兔回腸引起腸液積蓄，引起水樣腹瀉。②耐熱腸毒素（ST）：100℃30min不滅活，無抗原性。又可分為：

STⅠa：來源豬，牛STⅠ：對(duì)人和豬、牛、羊均有腸毒性。

STⅠb：來源于人STⅡ：僅在豬源ETEC中產(chǎn)生。ETEC的致病機(jī)理：通過口腔進(jìn)入宿主的小腸，以其菌毛粘附素黏附于腸粘膜上，以抵御腸蠕動(dòng)和流動(dòng)腸液的沖刷作用，從而定居于腸內(nèi)，大量繁殖。此時(shí)大量產(chǎn)生并釋放腸毒素，對(duì)其靶細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用。導(dǎo)致腸絨毛細(xì)胞吸收功能降低，造成在腸管內(nèi)水和電解質(zhì)大量積蓄，引起水樣腹瀉和迅速脫水。（二）產(chǎn)類志賀毒素大腸桿菌（SLTEC）又稱產(chǎn)Vero細(xì)胞毒素大腸桿菌，系一類在體內(nèi)或體外生長可產(chǎn)生類志賀毒素的病原性大腸桿菌?？芍仑i的水腫，以頭部，腸素膜和胃壁漿液性水腫為特征，常伴有共濟(jì)失調(diào)，麻痹或驚厥等神經(jīng)癥狀，發(fā)病率低但致死率高，有兩類毒力因子：1．粘附性菌毛：F18，它有助于細(xì)菌在豬腸粘膜上皮細(xì)胞定居和繁殖。2．致水腫病2型類志賀毒素（SLT-2e）：是蛋白質(zhì)性細(xì)菌毒素，用粗制的或純化的SLT-2e靜脈或腹腔注射適齡仔豬，可復(fù)制出水腫病，SLT-2e是致該病發(fā)生的主要毒素因子。SLTEC的致病機(jī)理：以F18菌毛粘附于小腸上皮細(xì)胞，定居和繁殖的細(xì)菌在腸內(nèi)產(chǎn)生SLT-2e并被吸收，造成細(xì)胞死亡和組織病變。另外，SLT-2e也是一種血管毒素，可引起血管內(nèi)皮組織損傷，改變血管的通透性，導(dǎo)致豬出現(xiàn)水腫和典型的神經(jīng)癥狀。神經(jīng)癥狀是由腦水腫所致并非毒素對(duì)神經(jīng)細(xì)胞直接作用。（六）微生物診斷1．取材：腸系膜淋巴結(jié)，心，肝，脾，涂片染色鏡檢：G－中等大小桿菌。2．分離培養(yǎng)：接種麥康凱平板和血平板劃線分離，挑取麥康凱上的紅色菌落或血平板上呈β溶血的菌落（仔豬黃痢與水腫病菌株）進(jìn)行以下生化實(shí)驗(yàn)。3．三糖鐵：斜面黃色/底部黃色，有氣體產(chǎn)生。4．接種普通肉湯：24~36h均勻混濁，底部有粘稠沉淀，液面有菌環(huán)。5．生化試驗(yàn)：G蔗麥乳IMViC⊕⊕⊕⊕++--6．動(dòng)物致病性試驗(yàn)：24h肉湯培養(yǎng)小白鼠腹腔0.2-0.4ml，24～48h小鼠死亡。7．對(duì)ETEC各種粘附性抗原鑒定：應(yīng)先將待檢菌在粘附素專用培養(yǎng)基上培養(yǎng)。培養(yǎng)物用已知的各種粘附素單因子血清或克隆抗體作玻板凝集，或用免疫熒光，ELISA等作其它血清學(xué)方法鑒定，也可用MRH及其抑制試驗(yàn)MRHI以及體外腸上皮細(xì)胞吸附與吸附抑制試驗(yàn)加以鑒定。8．對(duì)ETEC腸毒素的檢測(cè)：①LT檢測(cè)方法有Y1小鼠腎上腺細(xì)胞或中國倉鼠卵巢細(xì)胞（CHO）培養(yǎng)法，平板免疫溶血試驗(yàn)，夾心紅細(xì)胞免疫試驗(yàn)，夾心ELISA，兔回腸結(jié)扎試驗(yàn)，兔皮膚藍(lán)斑試驗(yàn)法。②ST檢測(cè)方法有乳鼠胃內(nèi)投服試驗(yàn)GM1-ELISA。9．對(duì)SLT-2e檢測(cè)：用該毒素的粗提或純化物作Vero細(xì)胞毒性試驗(yàn)和小鼠神經(jīng)毒性試驗(yàn)，并以STI-2e血清或單抗作中和試驗(yàn)鑒定之。（七）防治1．以抗粘附毒素免疫為基礎(chǔ)的含單價(jià)或多價(jià)菌毛抗原的滅活菌苗或亞單位苗。2．以抗腸毒素免疫為主的類毒素苗或LI-B亞單位苗。3．表達(dá)一種或兩種粘附素的基因工程苗K88K99雙價(jià)基因工程苗。二、沙門氏菌屬沙門氏菌屬是腸桿菌科一個(gè)大屬，有2500多個(gè)血清型，寄生于人及動(dòng)物腸道，引起各種疾病。（一）形態(tài)染色特征G－中等大小桿菌，除雞白痢和雞傷寒沙門氏菌外，都有鞭毛，能運(yùn)動(dòng)，無芽胞，無莢膜。（二）培養(yǎng)特性麥康凱平板：無色菌落，伊紅美藍(lán)瓊脂：無色（大腸桿菌黑色帶金屬光澤）運(yùn)騰氏：無色（大腸桿菌為紅色帶金屬閃光菌落）。（三）生化特性：三糖鐵斜面：斜面紅色/底部黃色（若有H2S產(chǎn)生，底部為黑色）5生化試驗(yàn)：G蔗麥乳IMViC⊕－⊕－-+-+（四）抗原及變異具有O，H，K和菌毛4種抗原。O和H抗原是其主要抗原，構(gòu)成血清型鑒定的物質(zhì)基礎(chǔ)。1．O抗原：細(xì)胞壁表面的耐熱多糖抗原，100℃2.5h不被破壞，一個(gè)菌體可有幾種O抗原，以小寫阿拉伯?dāng)?shù)字表示。將具有共同O抗原的各個(gè)血清型菌歸入一群，以大寫英文字母表示，如A（含有共同O2抗原），B（O4），C1~C4，D1~D3……H…Z共計(jì)51個(gè)O群，包括58種O抗原。2．H抗原：蛋白質(zhì)性質(zhì)的鞭毛抗原，有63種。H抗原可分為第1相和第2相兩種。第1相H抗原用小寫英文字母表示，特異性高故稱特異相；第2相抗原用阿拉伯?dāng)?shù)字表示，為許多沙門氏菌所共有故稱非特特異相。多數(shù)沙門氏菌有第1和第2兩相H抗原稱為雙相菌，常發(fā)生位相變異。例如將一個(gè)雙相菌在平板上劃線在所得菌落中，有的有第1相H抗原，有的有第2相H抗原。若任意挑取1個(gè)菌落，在培養(yǎng)基上多次傳代，其后代又可出現(xiàn)部分是第1相而另一部分是第2相的菌落，這種兩個(gè)相的H抗原可以交相產(chǎn)生的現(xiàn)象稱為位相變異。在鑒別對(duì)只能檢出1個(gè)相，而測(cè)不出另一個(gè)相。3．K抗原：被膜抗原，與毒力有關(guān)，又稱Vi抗原，60℃1h破壞其凝集性和免疫原性。有K抗原的菌株不能相應(yīng)的抗O血清凝集。在多次傳代后K抗原會(huì)丟失。用已知的沙門氏菌O和H單因子血清作玻板凝集試驗(yàn)，確定一個(gè)沙門氏血清型或抗原，對(duì)有K抗原的還須用K抗血清鑒定之。如鼠傷寒沙門氏菌血清型為：1，4，[5]，12∶i∶1，2表示該菌有O抗原：1,4,[5],12四種；第1相H抗原為I，若轉(zhuǎn)變?yōu)榈?相H抗原，則是1，2；括號(hào)中抗原表示該抗源可能無。（五）致病性1．是一種人畜共患病，最常侵害幼、青年動(dòng)物使之發(fā)生敗血癥，胃腸炎及其他組織局部炎癥。成年動(dòng)物為散發(fā)性或局限性，發(fā)生敗血癥的懷孕母畜可表現(xiàn)流產(chǎn)。主要傳播途徑為消化道。據(jù)其對(duì)宿主的嗜好不同分3種類型①有廣泛嗜性沙門氏菌：能引起人和各種動(dòng)物的沙門氏菌病，如鼠傷寒和腸炎沙門氏菌。②專嗜性沙門氏菌：只對(duì)人或某種動(dòng)物產(chǎn)生特定的疾病，如雞白痢和雞傷寒沙門氏菌僅使雞和炎雞發(fā)病。③偏嗜性沙門氏菌：如豬霍亂和都柏林沙門氏菌分別是豬和牛羊的強(qiáng)適應(yīng)性菌，但也能感染其它動(dòng)物。（六）免疫性體液免疫和細(xì)胞免疫都起重要作用。動(dòng)物注射疫苗后，母牛的初乳和奶中含有特異抗體，阻斷了細(xì)菌對(duì)腸道上皮的吸附和穿入，為后代提供抗感染能力。用無毒性