《臨床微生物學檢驗實驗》（供四年制醫(yī)學檢驗技術專業(yè)（臨床檢驗方向）使用）教學大綱實驗教學管理中心基礎醫(yī)學實驗教學中心病原生物學與免疫學實驗室2021年10月前言基本信息課程名稱：臨床檢驗微生物學實驗學時學分：共64學時，4學分適用專業(yè)：四年制醫(yī)學檢驗技術先修課程：臨床檢驗微生物學二、課程簡介《臨床微生物學檢驗實驗》是在檢驗實驗醫(yī)學領域中應用的一門重要學科，在醫(yī)學基礎研究、臨床診斷及研究中起著重要作用，也是致力于從事醫(yī)院檢出工作的醫(yī)學檢驗系專業(yè)學生的一門重要的專業(yè)實驗課。近年來，隨著全球公共衛(wèi)生事件的不斷發(fā)生，新的傳染病的流行，微生物學檢驗受到極大重視。通過《臨床微生物學檢驗實驗》，要求學生加深對實驗原理的理解，建立生物安全的理念，無菌觀念，掌握無菌操作的基本技術，常見臨床微生物檢驗的基本技術，了解國家生物安全的相關政策和微生物學檢驗方法的進展，學會自主分析試驗結果。培養(yǎng)學生的動手能力、分析及解決實際問題的能力和創(chuàng)新的思維，為畢業(yè)后從事臨床微生物學檢驗工作打下良好的基礎。三、課程目標1.思想道德與職業(yè)素質目標通過本課程學習，培養(yǎng)學生尊重科學、實事求是、熱愛醫(yī)學事業(yè)、不懼艱苦、求知務實的探索精神和為醫(yī)學健康服務的獻身精神和良好的醫(yī)學職業(yè)素養(yǎng)及高尚的思想品德。2.知識目標通過本課程的學習，使學生掌握原臨床微生物的基本特點，熟悉生物安全規(guī)則，熟悉無菌操作技術，根據(jù)所學的臨床微生物學實驗知識應用于臨床微生物檢查工作。3.技能目標通過本課程的學習，掌握臨床生物學實驗特有的基本操作技術，最終達到培養(yǎng)學生理論聯(lián)系實際、基礎聯(lián)系臨床的思維能力，并具有自主學習能力，為后續(xù)的臨床檢驗工作打下良好的基礎。四、教學要求根據(jù)課程教學大綱及目標，確保課程教學內容、教學過程（環(huán)節(jié)）、知識與能力目標的達成，同時，對學生自主學習能力進行培養(yǎng)。五、考核方式課程考試方式采用形成性評價方式，一般為平時成績30%，期末成績70%。平時成績包括考勤、平時作業(yè)、課堂表現(xiàn)、操作考核、實驗報告等。參與人（排名不分先后）：張光媛，鄧西川，陳婷婷，劉佳執(zhí)筆人（排名不分先后）：張光媛審定人：何永林教材、教輔用書與參考書目一、教材選用教材為樓永良《臨床微生物學檢驗技術實驗指導》，人民衛(wèi)生出版社，2015.該教材是為本課程量身定制，完全符合本課程需要。二、教輔用書及參考書目1.劉運德，樓永良.《臨床微生物學檢驗技術》，人民衛(wèi)生出版社，2015.2.陳東科，孫長貴.《實用臨床微生物學檢驗與圖譜》,人民衛(wèi)生出版社，2011.3.周庭銀，倪語星，胡繼紅，蘇建榮，徐應春等.《臨床微生物標準化操作》（ISO15189認可指導書）第三版，上?？萍汲霭嫔纾?015.目錄實驗一細菌基礎培養(yǎng)基的制備……7實驗二細菌培養(yǎng)的接種方法………7實驗三細菌培養(yǎng)物的觀察…………8實驗四真菌的檢驗…………………8實驗五細菌的藥敏試驗…………9實驗六病原性球菌的檢驗…………10實驗七分枝桿菌的檢驗……………11實驗八腸道桿菌的檢驗……………11實驗九非發(fā)酵革蘭陰性菌的檢驗…………………12實驗十尿液標本的細菌學檢查……13實驗十一血液標本的細菌學檢查…………………14實驗十二臨床標本的細菌學檢驗實驗設計………15實驗十三糞便標本的細菌學檢查…………………15教學時數(shù)分配表（共64學時）實驗序號實驗題目實驗學時實驗類型實驗一細菌基礎培養(yǎng)基的制備3基本方法實驗二細菌的接種方法3基本方法實驗三細菌培養(yǎng)物的觀察2基本方法實驗四真菌的檢驗2驗證型實驗五細菌的藥敏試驗6綜合型實驗六病原性球菌的檢驗6綜合型實驗七分枝桿菌的檢驗2綜合型實驗八腸道桿菌的檢驗8綜合型實驗九非發(fā)酵革蘭陰性菌的檢驗8綜合型實驗十尿液標本的細菌學檢查8綜合型實驗十一血液標本的細菌學檢查6綜合型實驗十一臨床標本的細菌學檢查討論2綜合型實驗十三糞便標本的細菌學檢查8綜合型合計64實驗一細菌基礎培養(yǎng)基的制備【實驗類型】基本實驗方法【目的要求】1.掌握細菌基礎培養(yǎng)基制備所需器材的準備和滅菌；2.掌握細菌基礎培養(yǎng)基制備的方法和技巧。【實驗學時】3學時【實驗內容】1．根據(jù)學生數(shù)量分組，在燒杯內融化培養(yǎng)基粉末，并加入適量瓊脂分別制作：肉膏湯培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基、瓊脂斜面培養(yǎng)基、普通瓊脂培養(yǎng)基（制備兩瓶，一瓶用于下次血平板制備，一瓶用于普通平板制備）。2．傾倒制備肉膏湯管、半固體管、瓊脂斜面管。普通瓊脂培養(yǎng)基傾倒鹽水瓶。3.包裝完畢，將各培養(yǎng)基在高壓蒸汽滅菌器內消毒滅菌。備注：每組做一種培養(yǎng)基；每人需肉膏湯培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基各1支（2ml），普通瓊脂斜面1支（3ml），普通瓊脂固體培養(yǎng)基20ml，用于后續(xù)實驗?！緦嶒灧纸M】2-4人/組實驗二細菌的接種方法【實驗類型】基本實驗方法【目的要求】掌握細菌在液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基、瓊脂斜面、普通瓊脂平板上的接種方法?！緦嶒瀸W時】3學時【實驗內容】1．錄像：細菌的人工培養(yǎng)2.練習平板分區(qū)劃線接種：空白瓊脂練習3．制備普通瓊脂平板(小組作)，用自制的液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基、瓊脂斜面、普通瓊脂平板分別接種大腸桿菌，枯草桿菌。4.將培養(yǎng)基放于37℃孵箱孵育18-24H。備注：每實驗組接種一種菌?！緦嶒灧纸M】2-4人/組實驗三細菌培養(yǎng)物的觀察【實驗類型】基本實驗方法【目的要求】1.掌握細菌在各種培養(yǎng)基上/中的生長現(xiàn)象，細菌在瓊脂平板上的菌落的特點；2.掌握革蘭染色方法；3.掌握輔助判定細菌染色性的方法(拉絲實驗)；【實驗學時】2學時【實驗內容】平板、斜面、液體、半固體等培養(yǎng)物的觀察，記錄。培養(yǎng)物的革蘭染色鏡檢。拉絲實驗：3%KOH與細菌混合同時接種環(huán)拉絲。【實驗分組】2-4人/組實驗四真菌檢驗【實驗類型】經(jīng)典驗證型【目的要求】掌握真菌三種菌落形態(tài)；掌握新生隱球菌、白假絲酵母菌的形態(tài)特征；掌握皮膚真菌的形態(tài)特征?！緦嶒瀸W時】3學時【實驗內容】錄像：真菌的檢驗三種真菌菌落形態(tài)觀察（示教）新型隱球菌墨汁染色圖片形態(tài)觀察（示教）白假絲酵母菌形態(tài)觀察（示教）霉菌涂片觀察：直接壓片法，高倍鏡觀察真菌孢子和菌絲。皮膚真菌的檢察（小組作）?！緦嶒灧纸M】2-4人/組實驗五細菌的藥敏試驗【實驗類型】綜合型實驗【目的要求】掌握細菌藥物敏感性試驗K-B法和微孔板稀釋法的操作方法和結果判斷。熟悉細菌藥物敏感性試驗的方法和臨床意義；熟悉麥氏比濁管的使用方法了解藥敏試驗的質量控制和新方法?！緦嶒瀸W時】共6學時二次課，3學時與3學時【實驗內容】麥氏比濁法制備0.5麥氏濃度的金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌菌液。K-B法測定分別測定青霉素、慶大霉素、新諾明、環(huán)丙沙星四種抗生素對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌的藥物敏感性。微孔稀釋法測定慶大霉素對大腸埃希菌的MIC。微孔稀釋法測定青霉素對金葡菌的MIC。討論藥敏實驗的質量控制和新方法?！緦嶒灧纸M】2-4人/組實驗六病原性球菌的檢驗【實驗類型】綜合型實驗【目的要求】熟悉病原性球菌的分離鑒定程序及臨床意義；掌握血瓊脂平板的制備方法；掌握3種葡萄球菌、草綠色鏈球菌、化膿性鏈球菌、肺炎鏈球菌、淋球菌的形態(tài)特點和鑒定方法；熟悉鑒定細菌的動物實驗?！緦嶒瀸W時】共6學時二次課，3學時與3學時【實驗內容】第一次實驗1.錄像：病原性球菌2.制備血瓊脂平板（小組作,每人一個血平板）3.空白瓊脂練習分區(qū)劃線。4.金葡、表葡、腐葡、草綠色鏈球菌、化膿性鏈球菌、肺炎鏈球菌血瓊脂平板分區(qū)劃線，培養(yǎng)。肺炎鏈球菌Optochin敏感試驗5淋球菌形態(tài)特點觀察（示教片）第二次試驗1細菌菌落觀察，記錄。2.培養(yǎng)物涂片革蘭染色顯微鏡觀察細菌形態(tài)排列和染色性3.培養(yǎng)物生化試驗：觸酶試驗(玻片法)，凝固酶實驗（玻片法)，膽汁溶菌試驗（平板法）4.葡萄球菌檢驗方法討論?！緦嶒灧纸M】2-4人/組實驗七分枝桿菌的檢驗【實驗類型】綜合型實驗【目的要求】掌握結核分枝桿菌的形態(tài)與染色性特征；掌握結核分枝桿菌的菌落特征；掌握肺結核患者痰標本抗酸染色檢查的方法及臨床意義?！緦嶒瀸W時】2學時【實驗內容】1.錄像：結核病的防治2.肺結核患者痰標本抗酸染色鏡檢3.熱觸酶實驗：濃細菌懸液置于68℃水浴20分鐘，然后再加H2O2。非結核分枝桿菌為陽性，有氣泡產(chǎn)生。我增加了一個熱觸酶實驗，不知可否。我增加了一個熱觸酶實驗，不知可否。4.結核分枝桿菌菌落形態(tài)觀察（示教）【實驗分組】2-4人/組實驗八腸道桿菌的檢驗【實驗類型】綜合型實驗【目的要求】1.熟悉腸道桿菌的分離鑒定程序及臨床意義；2.掌握腸道桿菌的生化反應特點和數(shù)值鑒定方法；3.掌握鑒定腸道桿菌的生化反應試驗和血清學試驗的操作方法和結果分析?！緦嶒瀸W時】共8學時三次課，3+3+2學時【實驗內容】第一次實驗1.錄像：腸道桿菌2.革蘭染色觀察細菌形態(tài)排列染色性。三節(jié)課，我增加了革蘭染色的內容三節(jié)課，我增加了革蘭染色的內容3.制備Mac瓊脂平板，SS瓊脂平板。每人倒平板。4.空白瓊脂練習分區(qū)劃線。4.大腸埃希菌、變形桿菌接種Mac瓊脂平板；乙型副傷寒沙門菌、福氏志賀菌接種SS瓊脂平板第二次實驗1.細菌培養(yǎng)后觀察菌落形態(tài)；2.培養(yǎng)物涂片革蘭染色顯微鏡觀察細菌形態(tài)排列和染色性；3.培養(yǎng)物氧化酶試驗，KIA、MIU（2人一套），微量生化管接種第三次實驗1.觀察試驗結果，查編碼手冊鑒定；2.沙門菌及志賀菌的血清學鑒定3.下結論，練習出實驗報告【實驗分組】2-4人/組實驗九非發(fā)酵革蘭陰性菌的檢驗【實驗類型】綜合型實驗【目的要求】1.熟悉非發(fā)酵革蘭陰性菌的分離鑒定程序及臨床意義；2.掌握非發(fā)酵革蘭陰性菌的形態(tài)、生化反應特點和數(shù)值鑒定方法；3.掌握鑒定非發(fā)酵革蘭陰性菌生化反應試驗的操作方法和結果分析?！緦嶒瀸W時】共8學時三次課，3+3+2學時【實驗內容】第一次實驗1.倒普通瓊脂平板，每人一個。2.銅綠假單胞菌、嗜麥芽窄食單胞菌和鮑曼不動桿菌增加鮑曼不動桿菌接種普通瓊脂平板。增加鮑曼不動桿菌第二次實驗1.菌落形態(tài)觀察2培養(yǎng)物涂片革蘭染色鏡檢3培養(yǎng)物氧化酶試驗、接種OF培養(yǎng)基，接種微量生化管第三次實驗1觀察試驗結果2查編碼手冊鑒定3出實驗報告【實驗分組】2-4人/組實驗十尿液標本的細菌學檢查【實驗類型】綜合型實驗【目的要求】1.熟悉尿液標本細菌學檢查的基本程序；2.掌握尿液標本細菌定量檢查的方法和臨床意義；3.掌握尿液標本細菌分離培養(yǎng)鑒定的方法和臨床意義?！緦嶒瀸W時】共8學時三次課，3+3+2學時【實驗內容】第一次課1.制備普通平板（小組作，實驗室準備培養(yǎng)基，學生倒平板，每人需一個平板）2.含金葡、表葡、大腸埃希菌、綠膿桿菌的模擬尿液標本直接涂片染色鏡檢。3.尿液標本定量接種環(huán)法，定量培養(yǎng)。（接種環(huán)法）4.尿液標本傾注平板法三節(jié)課，增加傾注平板法，學生自己稀釋菌尿液液傾倒。，定量培養(yǎng)。三節(jié)課，增加傾注平板法，學生自己稀釋菌尿液液傾倒。第二次課1接種環(huán)法和傾注平板法，瓊脂平板上菌落計數(shù)，比較。2培養(yǎng)物革蘭染色鏡檢3培養(yǎng)物觸媒酶實驗、氧化酶實驗、血漿凝固酶試驗4培養(yǎng)物接種KIA、MIU第三次課1培養(yǎng)結果觀察；2培養(yǎng)物血清學鑒定3出實驗報告【實驗分組】2-4人/組實驗十一血液標本的細菌學檢查【實驗類型】綜合型實驗【目的要求】1.熟悉血液標本細菌學檢查的基本程序；2.掌握血液標本細菌分離培養(yǎng)鑒定的方法和臨床意義。血液標本方法和臨床意義；【實驗學時】共6學時二次課，3+3學時【實驗內容】第一次實驗1含金葡菌、肺炎鏈球菌、草綠色鏈球菌、銅綠假單胞菌的模擬已增菌血標革蘭染色鏡檢2標本接種血瓊脂平板第二次試驗1培養(yǎng)物形態(tài)學檢查；2生化反應：觸酶試驗、凝固酶試驗、膽汁溶菌試驗、氧化酶試驗鑒定【實驗分組】2-4人/組實驗十二臨床標本的細菌學檢驗實驗設計【實驗類型】設計型實驗【目的要求】1.掌握臨床糞便標本檢出的流程，所需器材和試劑。2.擴展糞便標本相關檢驗知識，練習文獻查詢，提高創(chuàng)新性。【實驗學時】2學時【實驗內容】1.學生根據(jù)糞便標本的臨床檢驗程序，自主設計未知糞便標本的病原菌檢出。列出標本檢驗所需準備器材、培養(yǎng)基等。2.分組準備糞便標本相關內容的課件，可為臨床病例，可為最新檢驗技術，可為最新文獻。【實驗分組】2-4人/組實驗十三糞便標本的細菌學檢查【實驗類型】設計型實驗【目的要求】1.學生根據(jù)提供的臨床標本，和自己設計實驗所準備的器材和培養(yǎng)基，將未知糞便標本分離培