液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)質(zhì)量過濾器本文檔共74頁；當(dāng)前第1頁；編輯于星期三\1點18分API

電離源LC/MS-

WatersAllianceZMD系統(tǒng)

本文檔共74頁；當(dāng)前第2頁；編輯于星期三\1點18分Agilent1100SeriesLC/MSD本文檔共74頁；當(dāng)前第3頁；編輯于星期三\1點18分Varian1200LLC/MS&LC/MS/MSProStarBinary210SolventDeliverySystemProStar430AutoSamplerModule1200LLC/MS本文檔共74頁；當(dāng)前第4頁；編輯于星期三\1點18分1200LLC/MS/MSAnalyzerSprayChamberDiverterCapillaryPlug&HexapoleIonGuideQ1Q2Curved185mmPathQ3Multiplier+/-5kVpostaccelerationDualStageTurbo本文檔共74頁；當(dāng)前第5頁；編輯于星期三\1點18分？？LC與MS聯(lián)用面臨的問題？？將常規(guī)LC每分鐘約1ml或數(shù)ml流速的液體流動相引入要求高真空操作的MS儀，引起流速不協(xié)調(diào);經(jīng)典離子化方法的高溫高電壓不適合LC分析的熱不穩(wěn)定性或難揮發(fā)性樣品的離子化;

LC分析常用的難揮發(fā)性緩沖鹽系統(tǒng)易污染MS儀本文檔共74頁；當(dāng)前第6頁；編輯于星期三\1點18分LC/MS聯(lián)用的接口技術(shù)*直接液體導(dǎo)入接口(DirectLiquidIntroduction)*傳送帶技術(shù)(MovingBeltInterface)流出物滴落在傳送帶上，紅外線加熱去溶劑缺點：離子化效率低；記憶效應(yīng)*熱噴霧(Thermospray)流動相經(jīng)過噴霧探針時被加熱，體積膨脹后以超聲速噴出形成霧滴，離子蒸發(fā)；流速1ml/min，水相多缺點：MW200-1000u；熱分解本文檔共74頁；當(dāng)前第7頁；編輯于星期三\1點18分LC/MS：ESI結(jié)構(gòu)圖本文檔共74頁；當(dāng)前第8頁；編輯于星期三\1點18分FinniganESI本文檔共74頁；當(dāng)前第9頁；編輯于星期三\1點18分AgilentESI本文檔共74頁；當(dāng)前第10頁；編輯于星期三\1點18分ABESI本文檔共74頁；當(dāng)前第11頁；編輯于星期三\1點18分WatersESI本文檔共74頁；當(dāng)前第12頁；編輯于星期三\1點18分VarianESISprayChamberCapillaryPlug&HexapoleIonGuide

SampleSprayAssembly本文檔共74頁；當(dāng)前第13頁；編輯于星期三\1點18分ElectrosprayIonization,desolvation,

excessdropletremovalN2GasHeaterN2dryinggasVacuumRestrictionDryinggaspromotesrapiddesolvationandblowslargedropletsawayfromcapillaryinletIonsDropletsDropletsDroplets本文檔共74頁；當(dāng)前第14頁；編輯于星期三\1點18分ElectrosprayMechanism++++++++++++++++DesolvationNeedleChargedDropletAnalyteIonization本文檔共74頁；當(dāng)前第15頁；編輯于星期三\1點18分LC-MSionization本文檔共74頁；當(dāng)前第16頁；編輯于星期三\1點18分LC-MSionization++++++++++HotDryingGas++++++++++solventsolventsolventsolvent本文檔共74頁；當(dāng)前第17頁；編輯于星期三\1點18分LC-MSionization本文檔共74頁；當(dāng)前第18頁；編輯于星期三\1點18分LC-MSionization本文檔共74頁；當(dāng)前第19頁；編輯于星期三\1點18分LiquidNebulizingGasOptimumdependsonliquidflowInnertoouterneedlepositioniscriticaltonebulizationefficiency本文檔共74頁；當(dāng)前第20頁；編輯于星期三\1點18分液滴分布狀態(tài)LargeunchargeddropletsSmallhighlychargeddropletsIntermediatesizedropletsSprayneedleTaylorconeSpreadingduetochargerepulsion本文檔共74頁；當(dāng)前第21頁；編輯于星期三\1點18分ElectrosprayIonization,desolvation,

excessdropletremovalN2GasHeaterN2dryinggasVacuumRestrictionDryinggaspromotesrapiddesolvationandblowslargedropletsawayfromcapillaryinletIonsDropletsDropletsDroplets本文檔共74頁；當(dāng)前第22頁；編輯于星期三\1點18分進入四級桿質(zhì)量分析器3.5mTorr0.8TorrDropletsIonsQ1Dropletdesolvationoccursbeforeentrancetothecapillary.Ion/Solventclustersaredissociatedbycollisionsbeforetheskimmerconeandintheionguide.IonsSmallIons

IonGuide本文檔共74頁；當(dāng)前第23頁；編輯于星期三\1點18分分析物離子化AnalyteformsanioninthemobilephasePositiveIonESICationattachment:H++M(M+H)+

alsoNa+,K+,NH4+NegativeIonESIProtonloss:M(M-H)-+H+Anionattachment:A-+M(M+A)-

本文檔共74頁；當(dāng)前第24頁；編輯于星期三\1點18分示例：穩(wěn)定母離子的確認定量離子對：多烯紫杉醇m/z830→549.0（[TNa]+，圖A）紫杉醇

m/z876→591.0（[TNa]+，圖B）

本文檔共74頁；當(dāng)前第25頁；編輯于星期三\1點18分不同甲酸濃度下多西他賽母離子的穩(wěn)定性與靈敏度考察加鈉離子（m/z830）2.加鉀離子（m/z846）3.加氫離子（m/z808）0‰formicacid0.05‰formicacid0.1‰formicacid0.2‰formicacid本文檔共74頁；當(dāng)前第26頁；編輯于星期三\1點18分不同甲酸濃度下多西他賽子離子的穩(wěn)定性與靈敏度考察0‰formicacid0.05‰formicacid0.1‰formicacid0.2‰formicacid1.加鈉離子（m/z549）2.加鉀離子（m/z565）3.加氫離子（m/z527）本文檔共74頁；當(dāng)前第27頁；編輯于星期三\1點18分LC/MS：APCI結(jié)構(gòu)圖本文檔共74頁；當(dāng)前第28頁；編輯于星期三\1點18分APCI:Nebulization&VaporizationAPCIisagasphasereactionAnalytemustbeavailableasastable,gasphasemoleculeMatrixcomponentsmayormaynotundergonon-destructiveevaporationEvaporationdrivenbyaveryhotauxiliarygasliquidgasQuartzTubeQuartzTubeVortexflowofhotgasgas本文檔共74頁；當(dāng)前第29頁；編輯于星期三\1點18分IonizationintheAPCIChamberCoronaNeedleCIreactionsoccurbetweenthecoronaneedleandthesprayplateNebulizerandauxiliarygasplusgasphasemoleculesofmobilephase,analyteandmatrixfloodintotheAPCIchamber本文檔共74頁；當(dāng)前第30頁；編輯于星期三\1點18分APCI基本原理從液相色譜流出的樣品溶液進入一具有霧化氣套管的毛細管，經(jīng)氮氣流霧化，通過加熱管時被氣化。在加熱管端進行電暈尖端放電．溶劑分子被電離，充當(dāng)反應(yīng)氣，與樣品氣態(tài)分子碰撞，經(jīng)過復(fù)雜的反應(yīng)過程，樣品分子生成準(zhǔn)分子離子：

R+eR+·+2eRH++MMH++R本文檔共74頁；當(dāng)前第31頁；編輯于星期三\1點18分ESIAPCI對象中等至強極性分子非極性/中等極性不適宜極端非極性樣品熱穩(wěn)定性差/非揮發(fā)性流動相

pH對離子化效率影響較大緩沖鹽濃度低緩沖鹽濃度可高些有機相比例不能太低水相比例可高些流速低流速較好高流速比ESI好

本文檔共74頁；當(dāng)前第32頁；編輯于星期三\1點18分LCLC/MS：*多數(shù)色譜柱與LC/MS匹配，離子交換柱除外*使用有機溶劑比例較高的系統(tǒng)*避免使用難揮發(fā)性緩沖鹽，可用醋酸銨、甲酸銨、三氟乙酸；*使用揮發(fā)性離子對試劑：氫氧化四丁基銨（TBAH），七氟丁酸（HFBA）*流量匹配：兼顧色譜分離效果和ESI離子化效率；用1-2mm內(nèi)徑色譜柱，300-500ul/min；柱后分流本文檔共74頁；當(dāng)前第33頁；編輯于星期三\1點18分ScanModes–FullScan全掃描MSModeQ1Q2Q3Fullscan(Q1)Fullscan(Q3)=scanned;=selectedm/z;blank=completetransmission本文檔共74頁；當(dāng)前第34頁；編輯于星期三\1點18分ScanModes–SIM選擇離子監(jiān)測MSModeQ1Q2Q3Selectedionmonitoring(SIM)(Q1)Selectedionmonitoring(SIM)(Q3)=scanned;=selectedm/z;blank=completetransmissionSelectedIonMonitoring本文檔共74頁；當(dāng)前第35頁；編輯于星期三\1點18分ScanModes–SRM選擇反應(yīng)監(jiān)測MSModeQ1Q2Q3Selectedreactionmonitoring(SRM)Selectedreactionmonitoring(SRM)=scanned;=selectedm/z;=CIDCollisioninduceddissociationSelectedReactionMonitoring本文檔共74頁；當(dāng)前第36頁；編輯于星期三\1點18分ScanModes–MRM多反應(yīng)監(jiān)測MSModeQ1Q2Q3Multiplereactionmonitoring(MRM)Multiplereactionmonitoring(MRM)=scanned;=selectedm/z;=CIDMultipleReactionMonitoring本文檔共74頁；當(dāng)前第37頁；編輯于星期三\1點18分本文檔共74頁；當(dāng)前第38頁；編輯于星期三\1點18分ScanModes–PrecursorScan母離子掃描MSModeQ1Q2Q3PrecursorScanMS/MS=scanned;=selectedm/z;=CID本文檔共74頁；當(dāng)前第39頁；編輯于星期三\1點18分ScanModes–ProductScan子離子掃描MSModeQ1Q2Q3ProductScanMS/MS=scanned;=selectedm/z;=CID本文檔共74頁；當(dāng)前第40頁；編輯于星期三\1點18分ScanModes–NeutralLossScan

中性丟失掃描MSModeQ1Q2Q3PrecursorScanMS/MS=scanned;=scannedwithoffset;=CID本文檔共74頁；當(dāng)前第41頁；編輯于星期三\1點18分多種掃描模式設(shè)定Allmodesaretimeprogrammable,withnumeroustimesegmentsavailableforeachmethodFullScanSIMSRMMRMPrecursorScanNeutralLoss本文檔共74頁；當(dāng)前第42頁；編輯于星期三\1點18分Scan:250-500本文檔共74頁；當(dāng)前第43頁；編輯于星期三\1點18分521ESI(-)523ESI(+)本文檔共74頁；當(dāng)前第44頁；編輯于星期三\1點18分XIC521XIC523本文檔共74頁；當(dāng)前第45頁；編輯于星期三\1點18分ProductScanProductScan:523→100~523361本文檔共74頁；當(dāng)前第46頁；編輯于星期三\1點18分NeutralLossScan:400~550→238~388野鳶尾苷本文檔共74頁；當(dāng)前第47頁；編輯于星期三\1點18分LC/MS在中藥研究中的應(yīng)用中藥化學(xué)成分的快速篩選及成分分析質(zhì)譜檢測器可以給出大量的結(jié)構(gòu)信息，結(jié)合同類已知結(jié)構(gòu)化合物的裂解規(guī)律，或結(jié)合其它檢測方法，即可對未知成分進行直接分析，因此在以生物活性為指導(dǎo)的化學(xué)篩選中，可以對目標(biāo)化合物進行靶分析中藥質(zhì)量控制--中藥指紋圖譜研究LC-MS聯(lián)用技術(shù)的應(yīng)用彌補了紫外檢測的不足，還提供了大量的化學(xué)成分信息，可實現(xiàn)對各主要流出組分的定性，從而為藥材及其制劑的鑒別及質(zhì)量評價提供更加全面、可靠的依據(jù)本文檔共74頁；當(dāng)前第48頁；編輯于星期三\1點18分IdentificationofmultiplecomponentsinGuanxinninginjectionusinghydrophilicinteractionliquidchromatography/time-of-flightmassspectrometryandreversephaseliquidchromatography/time-of-flightmassspectrometryRapidCommunicationsinMassSpectrometryXiaofeiChen,ZiyangLou,HaiZhang,GuangguoTan,ZhiruiLiu,WuhongLi,ZhenyuZhuandYifengChai*示例：應(yīng)用親水作用色譜-反相色譜互補策略聯(lián)用飛行時間質(zhì)譜檢測器鑒別冠心寧注射液的主要成分本文檔共74頁；當(dāng)前第49頁；編輯于星期三\1點18分研究背景2009年7月，SFDA針對近年來中藥注射劑頻發(fā)質(zhì)量安全事故這一問題，下發(fā)了《關(guān)于開展中藥注射劑安全性再評價工作的通知》，要求在全國范圍內(nèi)開展中藥注射劑安全性再評價工作，并提出了如下要求：

全面開展生產(chǎn)及質(zhì)量控制環(huán)節(jié)的風(fēng)險排查，切實控制中藥注射劑安全隱患

因此，將注射液中絕大多數(shù)甚至全部成分搞清楚是，并進行針對性的質(zhì)量控制，是保證中藥注射液安全穩(wěn)定的基礎(chǔ)。本文檔共74頁；當(dāng)前第50頁；編輯于星期三\1點18分研究背景冠心寧注射液：收載于衛(wèi)生部部頒標(biāo)準(zhǔn)（1998）由丹參和川芎兩味傳統(tǒng)中藥組成；臨床上主要用于冠心病、心絞痛、腦栓塞等心、腦血管疾病的治療；具有擴張冠狀動脈，促進冠脈側(cè)支循環(huán)，加速缺血心肌的修復(fù)等作用；注射液中主要成分為酚酸類、苯酞類等水溶性成分，——這是通常認為的起作用成分本文檔共74頁；當(dāng)前第51頁；編輯于星期三\1點18分糖、氨基酸、有機酸等成分同樣也起到一定的作用，輔料的含量也應(yīng)得到控制，但由于這些物質(zhì)極性均較強，很難在常規(guī)的C18柱上表征。本文檔共74頁；當(dāng)前第52頁；編輯于星期三\1點18分色譜條件：RPLC分離使用AgilentZorbaxSB-C18柱(100mm×3.0mmI.D.,3.5μm)，柱溫30℃，流動相使用0.4%乙酸水溶液(A)和乙腈(B)，梯度洗脫0-19min，2-23%B；19-27min，23-30%B；27-35min，30-90%B；35-45min，90%B。流速0.5mL/min，為了獲得更好的電噴霧效率，柱后分流保持0.2mL/min進入質(zhì)譜分析，進樣量為5μL。HILIC分離使用SHISEIDOPCHILIC柱(150mm×2.0mmI.D.,5μm)，柱溫40℃，流動相使用5mmoL/L醋酸銨水溶液（A）和乙腈（B），梯度洗脫0-10，90%B；10-20min，90-70%B；20-25min，70%B。流速0.2mL/min，直接進入質(zhì)譜分析，進樣量為2μL。本文檔共74頁；當(dāng)前第53頁；編輯于星期三\1點18分質(zhì)譜條件：

檢測器為Agilent6200TOF/MS裝配ESI離子源。TOF/MS分析使用全掃描模式，質(zhì)核比范圍100-1100，負離子模式。ESI離子源條件如下：干燥氣流速，8L/min；干燥氣溫度，350℃；霧化器壓力，35psig；毛細管壓力，4000V；碎片電壓，130-325V動態(tài)調(diào)節(jié)；skimmervoltage,60V;octopoleRF,250V。本文檔共74頁；當(dāng)前第54頁；編輯于星期三\1點18分化合物鑒別策略樣品處理1、與對照品比對保留時間、碎片信息與已知碎片骨架信息比對LC-TOF/MS分析,獲得色譜峰精確分子量2、在化合物數(shù)據(jù)庫中搜索匹配化合物數(shù)據(jù)庫建立對照品處理3、根據(jù)碎片信息推導(dǎo)可能的結(jié)構(gòu)比對質(zhì)譜標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫，嘗試鑒別非目標(biāo)化合物，個別購買對照品確證誤差<5ppm，利用[M–H]-、[2M–H]-[M–2H+Na]-等分子離子峰信息匹配最有可能的化學(xué)結(jié)構(gòu)式通過查詢注射液藥材相關(guān)的植物化學(xué)和藥理學(xué)相關(guān)文獻獲得，數(shù)據(jù)庫包括化合物的化學(xué)式、精確分子量、名稱、中文名、來源植物，CAS號，紫外信息，質(zhì)譜信息，參考文獻和注釋。與文獻數(shù)據(jù)對比，明確鑒別目標(biāo)化合物目標(biāo)化合物非目標(biāo)化合物本文檔共74頁；當(dāng)前第55頁；編輯于星期三\1點18分C18柱TOFMS總離子流圖HILIC柱TOFMS總離子流圖34個化合物，4組同分異構(gòu)體17個化合物，1組同分異構(gòu)體56本文檔共74頁；當(dāng)前第56頁；編輯于星期三\1點18分非目標(biāo)化合物的鑒別和確證EIC:m/z=130.0609碎片電壓130V128.0351的同位素分布離子12&1、異亮氨酸2、亮氨酸C6H13NO257本文檔共74頁；當(dāng)前第57頁；編輯于星期三\1點18分C12H22O11非目標(biāo)化合物的鑒別和確證[2M-H]—[M+HCOO]—[M-H]—[M-H]—[2M-H]—-162[Glucose-H]—蔗糖58本文檔共74頁；當(dāng)前第58頁；編輯于星期三\1點18分非目標(biāo)化合物的鑒別和確證[2M-2H+Na]—[M-H]—[M-H-NH2]—L-苯丙氨酸C9H11NO259本文檔共74頁；當(dāng)前第59頁；編輯于星期三\1點18分示例：LC-DAD-MS/MS分離鑒定中藥蓮子心中三種生物堿蓮子心中主要有效成分－雙芐基異喹啉類生物堿的藥用價值日趨重視。其中，蓮心堿（Ⅰ）、異蓮心堿（Ⅱ）、甲基蓮心堿（Ⅲ）為蓮子心中雙芐基異喹啉類生物堿的主要成分JPharmBiomedAnal.43(2007)99-104.IF20072.761本文檔共74頁；當(dāng)前第60頁；編輯于星期三\1點18分DriedandpowderedembryooftheseedofN.nuciferaGAERTN.(10kg)wassoakedin1%HClfor1week.Thefiltratewasthenprecipitatedwith10%aquaammoniauntilthepHofthesolutionreached8.5and593gofcrudeextractwerecollectedasbrownprecipitates.Thecrudeextractwasextractedthreetimeswithchloroform,andthentheorganicphasewasextractedtwotimeswith3%NaOH.Finally,theextractsolutionwasprecipitatedwithdilutedHClandoff-whiteprecipitateswerefilteredanddriedtoobtainphenolicalkaloidsample(38.5g).Theprimarystocksolutionsofcrudeextract(1mg/ml)andphenolicalkaloidsample(1mg/ml)werepreparedbydissolvingappropriateamountofsubstancein