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文檔簡介
藥品分析技術第1課時-第1章節(jié)液相色譜法的類型1.吸附色譜2.分配色譜3.離子交換色譜4.空間排阻色譜5.親和色譜第1課時-第1章節(jié)液相色譜法的主要類型吸附色譜分配色譜離子交換色譜空間排阻色譜親和色譜第1課時-第1章節(jié)1吸附色譜以多孔的固體吸附劑為固定相,利用溶質分子和流動相分子在吸附劑表面的吸附活性中心上進行的競爭吸附能力的不同進行分離以極性固定相為例:溶質分子上官能團極性的或數目的增加,都會導致其在固定相上的保留時間增加溶質的保留值大小與空間效應有關,還與吸附中心的幾何排布有關,因此非常適合結構異構和異族化合物的分離制備色譜常用第1課時-第1章節(jié)固體吸附劑極性非極性氧化鋁與氧化鎂硅酸鎂分子篩硅膠(酸性)多孔微?;钚蕴慷嗫资己诒揭蚁?二乙烯基苯共聚物的單分散多孔小球碳多孔小球第1課時-第1章節(jié)流動相硅膠、氧化鋁等極性固定相,應該選擇戊烷、己烷等弱極性溶劑做主體,適當加入二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯等中極性或四氫呋喃、乙腈、異丙醇等極性溶劑改性,以調節(jié)洗脫強度,實現不同組分的良好分離效果苯乙烯-二乙烯基苯共聚微球等非極性固定相,則應以水、甲醇等極性溶劑做主體,適當加入乙腈、四氫呋喃等改性第1課時-第1章節(jié)2分配色譜分離模式:正相色譜:固定相極性>流動相極性,適于極性組分分離反相色譜:固定相極性<流動相極性,適于非極性組分分離第1課時-第1章節(jié)正相色譜低極性流動相反相色譜高極性流動相中等極性流動相中等極性流動相時間時間時間時間待測物極性:A>B>C正、反相色譜中極性和保留時間的關系第1課時-第1章節(jié)流動相的選擇對于正相色譜:流動相的選擇類似固定相為極性吸附劑的液固色譜。流動相主體為己烷、庚烷,可以加入小于20%的改性劑如1-氯丁二醇、異丙醚、二氯甲烷......乙腈、甲醇等,可以使得k減小,洗脫能力增強。對于反相色譜:流動相的選擇類似固定相為非極性吸附劑的液固色譜。流動相主體為水,可以加入四氫呋喃、甲醇、乙腈等改性,使得k減小,洗脫能力增強。第1課時-第1章節(jié)
離子交換色譜原理:固定相(離子交換劑)表面具有帶電荷的基團。該基團帶負電荷(如磺酸基和羧酸基)可用于陽離子的分離;帶正電荷(如季胺鹽)可用于陰離子的分離。不同離子與固定相的靜電作用力大小不同,因此被保留的時間長短亦不同,從而實現分離。固定相:硅膠(表面鍵合帶電荷基團):合成樹脂或纖維素(表面修飾帶電荷基團)流動相:以水相緩沖溶液為主,有時加少量的有機改性劑;改變pH和鹽種類及其濃度,可改變選擇性。第1課時-第1章節(jié)4空間排阻色譜原理:以多孔性物質作固定相,樣品分子受固定相孔徑大小的影響而實現按分子量大小分離,又稱凝膠色譜。外水相分子(分子量)越大的物質在通過色譜柱時所走的途徑越短,因此越先流出,反之亦然。第1課時-第1章節(jié)分類凝膠過濾色譜(GFC):采用親水性固定相,以水或緩沖溶液作流動相的凝膠色譜法。主要適合于水溶性高分子的分離。凝膠滲透色譜(GPC):采用疏水性固定相,以有機溶劑作流動相的凝膠色譜法。主要適合于脂溶性高分子的分離。如甲苯和四氫呋喃能很好地溶解合成高分子。GPC主要用于合成高分子的分子量(分布)的測定第1課時-第1章節(jié)5親和色譜親和特異性:
抗原-抗體;酶-底物;激素-受體;RNA-互補DNA作用原理:
在載體表面先鍵合具有一般反應性能的環(huán)氧或聯氨(間隔臂),然后再連接上配基(酶、抗原或激素)。當含有復雜混合試樣的流動相流經這種經固定化的配基時,具有親合力特性的生物大分子與配基相互作用而被保留,而無此作用的則被洗出;隨后改變流動相pH或
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