1、臨床各類標本的采集、運送和檢查的方法；2、臨床常見病原體的種類分布及變遷情況；3、耐藥病原體檢測的意義。

醫(yī)院感染常見病原體的檢查。掌握

1、藥敏試驗的原理和方法2、性傳播疾病病原體檢查的內(nèi)容了解熟悉第一頁，共109頁。一、臨床各類標本的采集運送和檢查方法二、病原體耐藥性檢測三、臨床常見病原體檢測四、病毒性肝炎檢測五、性傳播疾病病原體檢測六、醫(yī)院感染常見病原體檢測第二頁，共109頁。一、臨床各類標本的采集運送和檢查方法第三頁，共109頁。標本采集的基本原則根據(jù)病史與臨床表現(xiàn)確定標本采集的類型與部位，盡量采集病變明顯部位標本。在發(fā)病的早期或急性期采集標本，最好在抗生素使用前（如使用過抗生素應在申請單上注明）。采集標本防止污染，并置于無菌容器，加蓋密封、立即送檢。標本必須貼上標簽，與檢驗申請單同時送檢。所有的標本都視為感染性標本，做好安全防護。第四頁，共109頁。（一）血液標本的采集血液菌血癥、敗血癥或膿毒血癥發(fā)熱初期發(fā)熱前2小時發(fā)熱高峰期成人：10-20嬰兒、兒童：524小時內(nèi)采血2~3次

采集頻率采血量（ml）采集時間

需厭氧同時采集可增加陽性率第五頁，共109頁。（二）尿液標本的采集采集量：10-20ml中段尿晨尿注意清潔外生殖器導尿更換新的導尿管穿刺尿考慮厭氧菌感染第六頁，共109頁。（三）糞便標本采集自然排便者：挑取膿、血或粘液部分于清潔容器中送檢排便困難者：采用直腸拭子采集。懷疑霍亂弧菌感染引起的腹瀉，立即接種或?qū)吮局糜趬A性蛋白胨水或卡-布運送培養(yǎng)液送檢。傳染性腹瀉應連續(xù)送檢3次。第七頁，共109頁。（四）呼吸道標本類型：鼻咽拭子、痰經(jīng)氣管采集的標本。合格痰標本鱗狀上皮≤10/LP。上呼吸道存在正常菌群，在采集標本與結(jié)果分析時應予考慮！第八頁，共109頁。（五）腦脊液與其它無菌體液采集胸水腹水心包液無菌采集是培養(yǎng)成功的首要因素!腦膜炎奈瑟菌肺炎鏈球菌流感嗜血桿菌不耐冷！第九頁，共109頁。（六）眼、耳標本采集采樣容器：運送拭子眼部標本：亦可在局部麻醉后取角膜刮屑。耳標本：外耳道癤和中耳道炎用拭子采樣，鼓膜穿刺亦可用于新生兒和老年人。第十頁，共109頁。（七）泌尿生殖道標本采集

女性：外陰糜爛面病灶邊緣分泌物、陰道宮頸口分泌物。生殖道皰疹常穿刺抽取皰疹液。盆腔膿腫患者則于直腸子宮凹陷處穿刺取膿液。注：宮頸拭子采樣時，用拭子插入宮頸3-4cm，輕輕轉(zhuǎn)動并停留時10-15秒后取出第十一頁，共109頁。（七）泌尿生殖道標本采集第十二頁，共109頁。（七）泌尿生殖道標本采集男性：尿道口分泌物：性傳播性疾病前列腺液：前列腺炎尿道拭子：在取材前2小時內(nèi)不應排尿，用男性采樣拭子插入尿道3-4cm，輕輕轉(zhuǎn)動并停留時10-15秒后取出第十三頁，共109頁。（八）創(chuàng)傷、組織和膿腫標本

不同部位采集多份標本

采集膿液及病灶深部分泌物

無菌干燥注射器抽取

取膿液后立即排凈注射器內(nèi)空氣，針頭插入無菌橡皮塞送檢。創(chuàng)傷范圍大開放性膿腫封閉性膿腫疑為厭氧菌第十四頁，共109頁。（九）血清用于檢測患者特異性抗原抗體病毒肝炎性抗原抗體檢測梅毒、艾滋病病毒抗原抗體檢測血清學試驗第十五頁，共109頁。標本送檢一般要求標本采集后2小時內(nèi)送達實驗室。血培養(yǎng)標本、腦脊液標本延遲送檢不應放4℃保存。烈性傳染病標本需專人護送。

第十六頁，共109頁?？赡苜N錯條形碼這樣不對，扭著我腰都酸啦！第十七頁，共109頁。標本的實驗室質(zhì)量評估標準

1、標本信息要全。

2、仔細核對標本采集日期和送檢日期。延誤的標本，一般情況下不接收。通常用于細菌學檢驗的標本的存放不要超過24h。而病毒檢測的標本可于4℃存放2～3天。

3、檢查送檢容器是否完整，有無破損或滲漏等情況，若有則不予接收。4、標本儲存、運送方式不當，不予接收。

第十八頁，共109頁。標本的實驗室質(zhì)量評估標準5、明顯被污染的標本不予接收。6、標本量明顯不足的標本，不予接收。7、同一天申請做同一實驗的重復送檢標本(血培養(yǎng)除外)，不予接收

8、對于烈性傳染病標本的采集和運送應嚴格執(zhí)行相關(guān)規(guī)定，要有完善的防護措施，按規(guī)定包裹及冷藏，附有詳細的采樣及送檢紀錄，由專人護送第十九頁，共109頁。檢查方法（一）直接顯微鏡檢查（二）病原體特異性抗原檢查（三）病原體核酸檢查（四）病原體的分離培養(yǎng)和鑒定（五）血清學試驗第二十頁，共109頁。（一）直接顯微鏡檢查-不染色標本

方法：壓滴法、懸滴法、濕片法。意義：是否有生長、活動方式。部分病原體可借此初步診斷，如梅毒螺旋體。第二十一頁，共109頁。

（一）直接顯微鏡檢查-染色標本

染色標本目的：了解細菌的形態(tài)、染色性或觀察宿主細胞內(nèi)包涵體。方法：革蘭染色、墨汁染色、抗酸染色、熒光染色意義：快速診斷的方法之一第二十二頁，共109頁。革蘭染色陽性：紫色或紫紅色陰性：紅色陰性桿菌真菌孢子陽性球菌第二十三頁，共109頁。墨汁染色

目的：檢查新型隱球菌寬厚莢膜腦脊液標本如不能及時送檢，是否可冷藏保存？為什么？第二十四頁，共109頁。（五）腦脊液與其它無菌體液采集胸水腹水心包液無菌采集是培養(yǎng)成功的首要因素!腦膜炎奈瑟菌肺炎鏈球菌流感嗜血桿菌不耐冷！第二十五頁，共109頁。

抗酸染色

陽性：菌體呈紅色陰性：菌體呈藍色主要用于分枝桿菌（結(jié)核）、奴卡菌鑒別陽性陰性第二十六頁，共109頁。熒光染色用形態(tài)學和免疫學相結(jié)合的方法可特異性地檢測某些病原體的存在陰道加德納菌沙眼衣原體第二十七頁，共109頁。SARS（severeacuterespiratorysyndrome）

病原體的確定。電鏡檢查

電鏡檢查不常規(guī)用于臨床，對某些病毒感染卻有確診的價值第二十八頁，共109頁。(二)病原體特異性抗原檢查原理：利用抗原抗體之間的特異性反應，用已知抗體檢測患者血清及其他體液中的待測抗原。方法：免疫熒光技術(shù)、酶聯(lián)免疫技術(shù)、化學發(fā)光技術(shù)、乳凝集試驗、對流免疫電泳不足：標本中如果存在多種正常寄居微生物，可因交叉抗原存在而不能肯定診斷。第二十九頁，共109頁。(二)病原體特異性抗原檢查

細菌的血清分型：檢測細菌不同的抗原構(gòu)造，還可分析細菌的菌群和血清型，如沙門菌屬、志賀菌屬和霍亂菌屬等第三十頁，共109頁。

（三）病原體核酸的檢測

意義靈敏度高，是檢測病原體微生物最靈敏的方法，但具有一定的假陽性與假陰性。特異性強，陽性只表明存在某種病原體的核酸，是否正被感染應結(jié)合臨床具體分析。特別適用于目前尚不能分離培養(yǎng)或很難分離培養(yǎng)的微生物。適用于核酸變異的病原微生物，如病毒第三十一頁，共109頁。（三）病原體核酸的檢測常用試驗方法有：1、聚合酶鏈式反應PCR（polymerasechainreaction）。2、核酸探針雜交技術(shù)3、實時熒光定量PCR（RealtimePCR）4、基因芯片等第三十二頁，共109頁。（三）病原體核酸的檢測第三十三頁，共109頁。（四）病原體的分離培養(yǎng)和鑒定明確感染病原體提供體外抗微生物藥物敏感試驗結(jié)果第三十四頁，共109頁。1.細菌

分離培養(yǎng)是微生物學檢驗中確診的關(guān)鍵步驟，標本的正確采集尤為重要?。ㄋ模┎≡w的分離培養(yǎng)和鑒定采集合適的標本合適的培養(yǎng)方法/培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件菌落特征、生化反應結(jié)果和血清學實驗進行鑒定第三十五頁，共109頁。（四）病原體的分離培養(yǎng)和鑒定

鑒定的方法：手工法、儀器法（半自動、全自動、快速質(zhì)譜儀）

全自動細菌鑒定儀質(zhì)譜儀第三十六頁，共109頁。2.不能人工培養(yǎng)的病原體將標本接種易感動物、雞胚或行細胞培養(yǎng)（四）病原體的分離培養(yǎng)和鑒定第三十七頁，共109頁。（五）血清學試驗

用已知病原體的抗原檢測患者血清中相應抗體以診斷感染性疾病。

人體感染病原體后經(jīng)過一定時間產(chǎn)生特異性抗體，在體內(nèi)可維持數(shù)月或更長時間。第三十八頁，共109頁。（五）血清學試驗方法：凝集試驗、沉淀試驗、補體結(jié)合試驗、間接免疫熒光、放射免疫、酶聯(lián)免疫吸附試驗。雙份血清檢查：病程早期和晚期分別采血清2-3份檢查，雙份血清的滴度呈4倍或4倍以上升高，考慮病原體感染。單份血清檢查：特異性IgM可作為感染性疾病的早期診斷指標，且可區(qū)分原發(fā)與復發(fā)感染。第三十九頁，共109頁。（五）血清學試驗適用范圍血清學診斷可用于現(xiàn)癥診斷，還可以用于疾病追溯調(diào)查。血清學診斷對于某些病原體不能培養(yǎng)或難以培養(yǎng)的疾病，可以提供診斷的依據(jù)。

不適于疾病的早期診斷，因為抗體檢出最早也需在感染4-5天以后，2周后效價才逐漸增高第四十頁，共109頁。（六）細菌毒素檢測內(nèi)毒素：革蘭陰性桿菌死亡或自溶后釋放。外毒素：葡萄球菌腸毒素、肉毒毒素、霍亂腸毒素。

方法有生物學法、基因探針技術(shù)、免疫血清法、儀器法第四十一頁，共109頁。二、病原菌耐藥性檢測第四十二頁，共109頁。概念及方法藥物敏感性試驗:測定抗感染藥物在體外對病原微生物有無抑菌或殺菌作用的方法稱為簡稱藥敏試驗。方法：1、K-B紙片瓊脂擴散法

2、稀釋法

3、濃度梯度紙條擴散法

4、耐藥篩選試驗

5、折點敏感試驗第四十三頁，共109頁。藥物敏感試驗待檢菌生理鹽水MH平板藥敏試片K-B紙片瓊脂擴散法(Kirby-Bauerdiscagardiffusionmethod）第四十四頁，共109頁。18-24小時培養(yǎng)第四十五頁，共109頁。藥物敏感試驗稀釋法（dilutiontest）瓊脂稀釋法

肉湯稀釋法

第四十六頁，共109頁。藥物敏感試驗濃度梯度紙條擴散法(gradientdiffusionmethod)第四十七頁，共109頁。藥物敏感試驗耐藥篩選試驗：以單一藥物、單一濃度檢測細菌耐藥性。折點敏感試驗：是僅用特定抗生素檢測細菌耐藥性。

第四十八頁，共109頁。藥物敏感試驗報告方法：敏感(susceptible，S)S

：測試菌能被測定藥物常規(guī)劑量給藥后在體內(nèi)達到的血藥濃度所抑制或殺滅。耐藥(resistant，R)R：測試菌不能被在體內(nèi)感染部位可能達到的抗菌藥物濃度所抑制。

第四十九頁，共109頁。藥物敏感試驗中度敏感(intermediate，I)I：測試菌能被測定藥物大劑量給藥后在體內(nèi)達到的血藥濃度所抑制或在測定藥物濃集部位的體液(如尿)中被抑制。最低抑菌濃度（MinimalinhibitoryncentrationMIC)MIC：夠抑制檢測菌肉眼可見生長的最低藥物濃度稱為最低抑菌濃度。

執(zhí)行標準均來自臨床實驗室標準協(xié)會（CLSI）第五十頁，共109頁。（一）概念耐藥性（drugresistance）：是指細菌對藥物所具有的相對抵抗性。固有耐藥性（intrinsicresistance）：是由細菌染色體基因決定而代代相傳的耐藥，如腸道桿菌對青霉素的耐藥。獲得耐藥性（acquiredresistance）：是細菌與藥物反復接觸后對藥物的敏感性降低或消失，大多由質(zhì)粒介導其耐藥性，但亦可由染色體介導。第五十一頁，共109頁。（二）耐藥性病原體1、耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）2.氨基糖苷類抗生素高耐藥和耐萬古的腸球菌（VRE）3.耐青霉素肺炎鏈球菌（PRSP）4、超廣譜β-內(nèi)酰胺酶的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌（ESBL）5、多重耐藥或泛耐藥的銅綠假單胞菌和鮑曼不動相菌6、耐拉米夫定和泛昔洛韋的乙肝病毒。第五十二頁，共109頁。（三）耐藥機制1、細菌水平和垂直傳播耐藥基因的整合子系統(tǒng)；2、產(chǎn)生抗生素滅活酶或鈍化酶；3、改變藥物的作用靶位；4、外膜通透性下降；5、主動外排系統(tǒng)過度表達；6、形成生物膜及外源耐藥基因的獲得。細菌的多種耐藥基因可協(xié)同作用，導致多耐藥菌株的出現(xiàn)。第五十三頁，共109頁。（三）耐藥機制第五十四頁，共109頁。第五十五頁，共109頁。第五十六頁，共109頁。（四）耐藥菌檢測的意義第五十七頁，共109頁。（四）耐藥菌檢測的意義第五十八頁，共109頁。（四）耐藥菌檢測的意義第五十九頁，共109頁。（四）耐藥菌檢測的意義檢出耐藥菌需采取的重要措施：接觸隔離！！第六十頁，共109頁。（五）病原體耐藥基因檢測耐藥基因的產(chǎn)生：1、獲得外源性基因

2、細菌自身基因突變細菌耐藥基因檢測方法：PCR法、生物芯片、PCR-RFLP分析、動測序、PCR-SSCP分析

第六十一頁，共109頁。三、臨床常見病原體檢測

細菌、病毒、真菌、寄生蟲、支原體、衣原體以及立克次體等。第六十二頁，共109頁。（一）細菌感染檢查項目的選擇細菌感染抗原抗體檢測PCR技術(shù)基因探針技術(shù)培養(yǎng)

涂片鏡檢第六十三頁，共109頁。（二）病毒感染檢查項目的選擇電鏡檢查核酸檢測（PCR）細胞培養(yǎng)特異性抗體檢測第六十四頁，共109頁。（三）真菌感染檢查項目的選擇真菌培養(yǎng)

涂片鏡檢抗原檢測災光定量PCR核酸雜交技術(shù)rDNA序列測序基因組核酸電泳核型分析G試驗GM試驗第六十五頁，共109頁。（四）寄生蟲病病原學診斷免疫學診斷寄生蟲

DNA探針技術(shù)

PCR第六十六頁，共109頁。（四）支原體檢測

支原體肺炎支原體：肺炎解脲支原體、人型支原體：泌尿生殖道感染培養(yǎng)法

免疫熒光法光定量PCR和DNA探針技術(shù)第六十七頁，共109頁。（六）螺旋體檢測暗視野顯微鏡檢查：

第六十八頁，共109頁。梅毒血清學試驗（1）過篩試驗：RPR、VDRL、TRUST（2）確診試驗：FTA-ABS、MHA-TP、

TPPATP-PCR：TP—PCR檢測梅毒螺旋體DNA，特異性很強，敏感性很高，是目前診斷梅毒螺旋體的先進方法。PCR檢測梅毒螺旋體的DNA，其敏感性、特異性均優(yōu)于血清學方法

（六）螺旋體檢測第六十九頁，共109頁。（七）立克次體檢測驗專性細胞內(nèi)生長的原核細胞性微生物對多種抗生素敏感引起自然疫源性疾病，且為人畜共患

斑疹傷寒（流行性斑疹傷寒、地方性斑疹傷寒、加拿大斑疹傷寒）立克次體屬斑點熱（洛磯山斑點熱、紐扣熱、昆士蘭熱、立克次體痘、北亞蜱傳斑疹傷寒）第七十頁，共109頁。（七）立克次體檢測外斐試驗：為非特異性血清學診斷試驗，用于斑疹傷寒、斑點熱和恙蟲病的確診特異性血清學試驗：免疫熒光試驗、酶聯(lián)吸附試驗和補體結(jié)合試驗等第七十一頁，共109頁。（八）衣原體感染檢測直接顯微鏡檢查：檢查衣原體包涵體細胞培養(yǎng)：陽性可明確診斷。直接熒光抗體檢測定量PCRDNA探針第七十二頁，共109頁。（九）流感病毒的檢測病毒核酸檢測病毒分離培養(yǎng)病毒抗原檢測血清學診斷第七十三頁，共109頁。（十）嚴重急性呼吸道綜合征（SARS）病毒的檢測免病學方法：免疫熒光試驗（IAF）酶聯(lián)免疫吸咐試驗（ELISA）基因檢測方法細胞培養(yǎng)第七十四頁，共109頁。實驗結(jié)果分析和臨床應用注意點1、分離培養(yǎng)的陰性結(jié)果不能完全排除感染的可能;2、抗原檢測需考慮共同抗原引起的交叉反應；3、核酸檢測由于靈敏度高，影響因素多，容易出現(xiàn)假陽性或假陰性;4、血清學試驗：IgM現(xiàn)期感染,IgG既往感染。第七十五頁，共109頁。四、病毒性肝炎檢測病毒性肝炎主要有7型，甲型(HA)---甲型肝炎病毒(HAV)乙型(HB)---乙型肝炎病毒(HBV)丙型(HC)---丙型肝炎病毒(HCV)丁型(HD)---丁型(HDV)和戊型肝炎病毒(HEV)戊型(HE)---戊型肝炎病毒(HEV)庚型(HG)---庚型肝炎病毒(HGV)、輸血傳播病毒肝炎---輸血傳播病毒(TTV)第七十六頁，共109頁。目前常用的檢測方法酶聯(lián)免疫吸咐試驗（ELISA）實時熒光PCR聚合酶聯(lián)反應（PCR）放射免疫法（RIA）血細胞凝集法斑點雜交法第七十七頁，共109頁。（一）甲型肝炎病毒標志物檢測第七十八頁，共109頁。（一)甲型肝炎病毒標志物檢測標志物名稱檢測方法參考值

抗HAV-IgMELISA陰性

抗HAV-IgGELISA陰性

抗HAV-IgAELISA陰性

HAVAgELISA陰性

HAV-RNART-PCR陰性第七十九頁，共109頁。(二)乙型肝炎病毒標志物檢測第八十頁，共109頁。(二)乙型肝炎病毒標志物檢測第八十一頁，共109頁。(二)乙型肝炎病毒標志物檢測第八十二頁，共109頁。(二)乙型肝炎病毒標志物檢測第八十三頁，共109頁。13452大三陽小三陽第八十四頁，共109頁。(二)乙型肝炎病毒標志物檢測HBVDNA：是HBV感染最直接，最靈敏和最特異的檢測指標，且血清中HBVDNA的水平可作為治療方案與療效觀察的指標。是診斷乙型的佐證，表明HBV復制及有傳染性。也用于HBsAg疫苗后垂直傳播的阻斷效果評價第八十五頁，共109頁。(三)丙型肝炎病毒標志物丙型肝炎病毒（hepatitisCvirus，HCV）為黃病毒屬、單鏈正股RNA病毒。血液為其主要傳播途徑。病情雖較乙型肝炎輕，但更易轉(zhuǎn)為慢性。第八十六頁，共109頁。(三)丙型肝炎病毒標志物檢測方法與參考值標志物檢測方法參考值

HCV-RNART-PCR陰性

抗-HCVIgMELISA陰性抗-HCVIgGELISA陰性

第八十七頁，共109頁。(三)丙型肝炎病毒標志物第八十八頁，共109頁。(三)丙型肝炎病毒標志物第八十九頁，共109頁。五、性傳播疾病病原體檢測傳播途徑：

性行為傳播間接接觸傳染血液與血制品傳播對胎兒與新生兒的傳播

職業(yè)性傳播第九十頁，共109頁。常見的性病有哪些？第九十一頁，共109頁。疾病種類：20余種

1、艾滋病2、梅毒------螺旋體

3、淋病

4、軟下疳

5、生殖器皰疹尖銳濕疣

6、非淋病性尿道炎—支原體、衣原體（一）流行病學

病毒細菌國家乙類傳染病第九十二頁，共109頁。中國愛滋病村里的病人第九十三頁，共109頁。愛滋病家庭遺孤第九十四頁，共109頁。正規(guī)醫(yī)療機構(gòu)是性病患者的正確選擇第九十五頁，共109頁。（六)醫(yī)院感染常見病原體檢查醫(yī)院感染：又稱院內(nèi)感染或醫(yī)院獲得性感染。是指住院患者在醫(yī)院內(nèi)獲得的感染，包括住院期間發(fā)生的感染