犐犆犛１１．２２０

犅４１

中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)

犖犢／犜６８０—２００３

禽白血病病毒狆２７抗原

酶聯(lián)免疫吸附試驗方法

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２００３０７３０發(fā)布２００３１００１實施

中華人民共和國農(nóng)業(yè)部發(fā)布

書

犖犢／犜６８０—２００３

前言

本標(biāo)準(zhǔn)的附錄Ａ為規(guī)范性附錄。

本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)部畜牧獸醫(yī)局提出并歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)診斷中心。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：陳西釗、蘇敬良、王宏偉、田克恭、吳清民、王傳彬。

Ⅰ

書

犖犢／犜６８０—２００３

禽白血病病毒狆２７抗原

酶聯(lián)免疫吸附試驗方法

１范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了禽白血病病毒（ＡＬＶ）ｐ２７抗原酶聯(lián)免疫吸附試驗方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于檢測雞蛋蛋清以及雞胚組織細胞培養(yǎng)物中的ＡＬＶｐ２７蛋白抗原。

２狆２７抗原酶聯(lián)免疫吸附試驗

２．１試驗材料

２．１．１試劑

２．１．１．１抗ｐ２７蛋白抗體：應(yīng)用提純的禽成髓細胞性白血病病毒ｐ２７蛋白免疫家兔制備。

２．１．１．２陽性抗原：含雞白血病／肉瘤病毒群特異性ｐ２７蛋白抗原的雞蛋清。

２．１．１．３陰性抗原：無雞白血?。饬霾《救禾禺愋裕穑玻返鞍卓乖模樱校齐u蛋清。

２．１．１．４酶結(jié)合物：辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗ｐ２７蛋白抗體。

２．１．１．５磷酸鹽緩沖液（ＰＢＳ）：配制見第Ａ．１章。

２．１．１．６包被液：配制見第Ａ．２章。

２．１．１．７洗滌液：配制見第Ａ．３章。

２．１．１．８樣品稀釋液：配制見第Ａ．４章。

２．１．１．９底物溶液：配制見第Ａ．６章。

２．１．１．１０終止液：配制見第Ａ．７章。

２．１．２器材

ａ）酶聯(lián)檢測儀；

ｂ）聚苯乙烯板；

ｃ）微量加樣器，容量５０μＬ～２００μＬ；

ｄ）３７℃恒溫培養(yǎng)箱。

２．１．３樣品

２．１．３．１雞蛋樣品：將待檢雞蛋小的一端朝上放置，打碎蛋殼，用移液器無菌吸取蛋清，密裝于滅菌小

瓶內(nèi)。

２．１．３．２細胞培養(yǎng)物：用移液器無菌吸取細胞培養(yǎng)物，密裝于滅菌小瓶內(nèi)，４℃或－３０℃保存或立即送

檢。試驗前將送檢樣品統(tǒng)一編號，試驗時不做稀釋。

２．２操作方法

２．２．１用包被液將抗ｐ２７蛋白抗體作４０００倍稀釋，每孔１００μＬ加入９６孔聚苯乙烯板中，４℃過夜。

２．２．２取出包被好的聚苯乙烯板，將液體倒棄，每孔加２５０μＬ洗滌液漂洗三次，每次２ｍｉｎ，甩干。

２．２．３每孔加１５０μＬ質(zhì)量濃度為１％的明膠封閉液，３７℃反應(yīng)６０ｍｉｎ。

２．２．４重復(fù)２．２．２。

２．２．５在Ａ１、Ａ２孔各加１００μＬ標(biāo)準(zhǔn)陰性對照，Ａ３、Ａ４孔各加１００μＬ標(biāo)準(zhǔn)陽性對照。