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(一)分離原理膠束:表面活性劑在水中的濃度達(dá)到其臨界膠束濃度時(shí),可形成膠束(一)分離原理(一)分離原理(1)保留因子t0
在膠束中無保留的中性物質(zhì)的遷移時(shí)間tmc膠束的遷移時(shí)間t溶質(zhì)的遷移時(shí)間t0和tmc的測(cè)定t0
一般用甲醇或二甲基亞砜作為標(biāo)記物測(cè)定tmc
用疏水性極強(qiáng)的中性物質(zhì)蘇丹III測(cè)定(2)分離因子(3)分離度毛細(xì)管電泳中常用的表面活性劑毛細(xì)管凝膠電泳
CapillaryGelElectrophoresis毛細(xì)管凝膠電泳是在毛細(xì)管中填充凝膠或其它篩分介質(zhì)而建立起來的一種電泳分離分析法。篩分介質(zhì):聚丙烯酰胺凝膠瓊脂糖凝膠Hydrolink膠高聚物溶液分離對(duì)象:生物大分子如蛋白質(zhì)、DNA片段等主要貢獻(xiàn):分析化學(xué)家研究和發(fā)明了96通道毛細(xì)管電泳快速測(cè)序儀(高效分離技術(shù))毛細(xì)管凝膠電泳分離原理一些生物大分子如DNA和被SDS飽和的蛋白質(zhì)分子,其電荷/質(zhì)量之比與分子大小無關(guān),電泳淌度幾乎相同,用CZE模式很難分離。在含有篩分介質(zhì)的毛細(xì)管中,這些分子在電場(chǎng)作用下電泳,受到的阻力不同,遷移速度有差異。DNA片段分離DNA片段分離DNA片段分離21-2毛細(xì)管電色譜毛細(xì)管電色譜是毛細(xì)管電泳與高效液相色譜的融合技術(shù)。毛細(xì)管色譜柱+電驅(qū)動(dòng)流動(dòng)相壓力驅(qū)動(dòng)和電驅(qū)動(dòng)流型的比較毛細(xì)管電色譜的特點(diǎn)分離效率比HPLC高選擇性比毛細(xì)管電泳高毛細(xì)管電色譜的分類按毛細(xì)管柱的類型分類填充柱毛細(xì)管電色譜開管柱毛細(xì)管電色譜連續(xù)床毛細(xì)管電色譜按流動(dòng)相驅(qū)動(dòng)的方式分類電滲流驅(qū)動(dòng)的毛細(xì)管電色譜電滲流和壓力聯(lián)合驅(qū)動(dòng)的毛細(xì)管電色譜毛細(xì)管電色譜儀毛細(xì)管電泳儀加壓裝置梯度系統(tǒng)電滲流和壓力聯(lián)合驅(qū)動(dòng)的毛細(xì)管電色譜儀梯度系統(tǒng)電滲流和壓力聯(lián)合驅(qū)動(dòng)的毛細(xì)管電色譜儀一、毛細(xì)管電色譜的基本原理毛細(xì)管電色譜中的電滲流溶質(zhì)的遷移速度分離效率(一)毛細(xì)管電色譜中的電滲流電滲:指在電場(chǎng)作用下,毛細(xì)管中或固相多孔物質(zhì)內(nèi),液體沿固體表面移動(dòng)的現(xiàn)象。填充毛細(xì)管中電滲流速度E電場(chǎng)強(qiáng)度;
流動(dòng)相介電常數(shù);流動(dòng)相粘度;與填充有關(guān)的無量綱因素(0.4-0.7)(二)溶質(zhì)的遷移速度分離效率H=A+B/u+Cu與HPLC相比,A,C較小分離效率由于多數(shù)采用小粒徑填料(1.5-3m)渦流擴(kuò)散項(xiàng)和傳質(zhì)阻力項(xiàng)較小對(duì)理論塔板高度的貢獻(xiàn)主要來自分子擴(kuò)散項(xiàng)采用柱上檢測(cè),死體積小****CEC分離效率高*****二、毛細(xì)管電色譜實(shí)驗(yàn)條件的選擇操作電壓緩沖溶液pH值背景電解質(zhì)濃度有機(jī)溶劑三、毛細(xì)管電色譜柱開管柱化學(xué)鍵合、吸附溶膠-凝膠填充柱拉制法填充法連續(xù)床柱(整體柱)填充過程整體柱的制備硅膠整體柱:四甲氧基硅烷(TMOS)、水溶性聚合物聚環(huán)氧乙烷(PEO)及催化劑乙酸,在0℃下攪拌形成溶膠,在40℃下水解和縮聚生成凝膠,經(jīng)陳化、堿處理擴(kuò)孔、干燥和焙燒后制成硅膠整體柱。有機(jī)聚
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