2023/2/5現(xiàn)代儀器分析

modern

InstrumentalAnalysis

2023/2/52023/2/5第三章

多標(biāo)記分析儀PEVictorTMX4

2023/2/5第三章多標(biāo)記分析儀功能：比色讀數(shù)功能化學(xué)發(fā)光功能熒光讀數(shù)功能時間分辨熒光讀數(shù)功能第一節(jié)、多標(biāo)記分析儀原理2023/2/5一、比色讀數(shù)功能2023/2/5酶聯(lián)免疫檢測ELISA2023/2/5二、化學(xué)發(fā)光功能Luminescence=theemissionoflightfromanysubstanceoccursfromelectronicallyexcitedstatesChemiluminescence=lightemittedbyachemicalreactionBioluminescence=typeofchemiluminescencechemicalreactioniscatalyzedbyanenzymeimportantinstudiesofgeneexpressionandgeneregulation2023/2/5三、熒光讀數(shù)功能分子熒光：基態(tài)(S0)→激發(fā)態(tài)(S1、S2激發(fā)態(tài)振動能級)：吸收特定頻率的輻射。符合什么公式？激發(fā)態(tài)→基態(tài)：多種途徑和方式；速度最快、激發(fā)態(tài)壽命最短的途徑占優(yōu)勢。符合什么公式？分子熒光是激發(fā)光將電子激發(fā)到激發(fā)態(tài)，由激發(fā)態(tài)最低振動能級躍遷到基態(tài)所發(fā)出的輻射光。濃度很低時，熒光強(qiáng)度

If

=2.3I0lc

=Kc

2023/2/5

鑭系元素銪、釤、鋱、鏑的螯合物經(jīng)紫外光激發(fā)后不僅熒光強(qiáng)度高，而且其衰變時間也長，可達(dá)幾百個s，而樣品中蛋白質(zhì)天然本底熒光的衰變時間為1-10ns，相差5-6個數(shù)量級，因此在時間分辨熒光光度計上測量時，利用延遲測量時間，待短半衰期的天然本底熒光完全衰變后測定，所測信號完全為稀土螯合物的熒光，從而消除了非特異干擾的影響。

四、時間分辨熒光讀數(shù)功能2023/2/5背景熒光激發(fā)周期超長衰減時間發(fā)射光強(qiáng)度時間檢測窗口四、時間分辨熒光讀數(shù)功能2023/2/52023/2/5第二節(jié)多標(biāo)記分析儀的光學(xué)系統(tǒng)2023/2/5Photodiode一光吸收模塊光路圖2023/2/5二化學(xué)發(fā)光模塊光路圖2023/2/5三熒光檢測模塊光路圖2023/2/5激發(fā)光源、激發(fā)光單色器或濾光片，樣品池、熒光單色器及設(shè)有門控的檢測器四時間分辨熒光模塊光路圖2023/2/5五與分光光度計不同之處1、光路不同2、樣品池不同3、單色器不同4、通量不同5、樣品量不同6、應(yīng)用學(xué)科不同2023/2/52023/2/5第三節(jié)多標(biāo)記分析儀的應(yīng)用2023/2/5核酸和蛋白質(zhì)的光吸收檢測酶聯(lián)免疫檢測（ELISA）細(xì)胞活性檢測（MTT）酶動力學(xué)分析細(xì)菌內(nèi)毒素檢測濃度測定乙酰膽堿脂酶檢測環(huán)境監(jiān)測一、光吸收主要應(yīng)用2023/2/5報告基因基因檢測化學(xué)發(fā)光免疫分析核酸定量(PCRQuantification)酶活分析活性氧分析二、發(fā)光主要應(yīng)用2023/2/5濃度檢測活性分析熒光ELISA酶聯(lián)免疫檢測（ELISA）研究分子之間相互作用三、熒光主要應(yīng)用2023/2/5時間分辨熒光免疫激素：甲狀腺激素、甾體類激素。病毒性肝炎標(biāo)志物。腫瘤相關(guān)抗原。藥物。多肽類。四、時間分辨熒光主要應(yīng)用2023/2/5

更廣的動力學(xué)范圍更強(qiáng)的靈敏度每孔更少的試劑更少的實驗步驟信號穩(wěn)定性超過