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A80..

中華人民共和國國家標準

GB/T35520—2017

化學品胚胎毒性胚胎干細胞試驗

Chemicals—Embryotoxicity—Embryonicstemcelltest

2017-12-29發(fā)布2018-07-01實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

GB/T35520—2017

前言

本標準按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由全國危險化學品管理標準化技術(shù)委員會提出并歸口

(SAC/TC251)。

本標準起草單位中國檢驗檢疫科學研究院中國化工經(jīng)濟技術(shù)發(fā)展中心常州進出口工業(yè)及消費

:、、

品安全檢測中心寧波出入境檢驗檢疫局

、。

本標準主要起草人李海山陳會明韓輝崔媛王曉兵劉君峰陳小青程艷艾文超謝文平

:、、、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T35520—2017

引言

小鼠胚胎干細胞在不同的培養(yǎng)條件下會分化為不同的胚胎組織因

(Embryonicstemcells,ES)。

此一些研究小組使用小鼠細胞進行體外胚胎毒性試驗等[1]比較了細胞和小鼠纖

,ES。LaschinskiES

維母細胞的細胞毒性以評估致畸物的潛在胚胎毒性等[2-3]比較了細胞的細胞毒性和分化

,。HeuerES

抑制和[4]測定了培養(yǎng)后致畸物對細胞的細胞毒性和集落形成能力的影響

。NewallBeedles7d,ES,

這適用于常規(guī)測試因為集落形成這一終點可自動化完成在所有這些試驗中只有一些胚胎毒性物能

,。,

夠被正確分類這可能是由于在試驗中選擇個終點不足以評估胚胎毒性

。ES2。

為克服上述細胞試驗的限制等[5]確定了個不同的試驗終點半數(shù)分化抑制濃度

ES,Spielmann3(、

細胞半數(shù)生長抑制濃度和細胞半數(shù)生長抑制濃度根據(jù)這些終點可導出個變量所得的

D33T3)。3。

個變量作為受試物分為個體內(nèi)胚胎毒性等級的依據(jù)這種方法有利于給出胚胎組織與成體組織之

33。

間對化合物細胞毒性損傷的敏感性差異事實上利用判別分析已將種受試化學品正確歸入已知的

。,16

種體內(nèi)胚胎毒性等級[5-6]這是第一個不處死妊娠動物而獲得體外培養(yǎng)所需胚胎組織的體外胚胎毒

3。

性測試

。

在本標準中為驗證研究制定的標準操作程序克服了實驗室中狀態(tài)維持的問題細胞通常傾

ES,ES

向于自發(fā)分化

。

此外根據(jù)制定的性能標準歐盟替代方法驗證中心

,,(EuropeanCentrefortheValidationofAlter-

驗證研究表明體外數(shù)據(jù)和體內(nèi)數(shù)據(jù)之間具有較好的相關(guān)性準確性

nativeMethods,ECVAM)(78%)。

據(jù)報道強胚胎毒性化學品的預測性極好精確度良好據(jù)報道無胚胎毒性物質(zhì)和胚胎

,(100%)、(81%)。,

毒性弱的物質(zhì)的預測性分別為和和無胚胎毒性物質(zhì)的精確度較高[7]

(72%70%)(70%)(≥65%)。

然而一個特例出現(xiàn)于強胚胎毒性化學品氯化甲基汞的錯誤分類在個試驗中的個試驗里被

,,84,

預測為無胚胎毒性的化學品而不是強胚胎毒性的化學品這種誤分類出現(xiàn)的原因可能是用于建立預

,。

測模型的訓練集未包括具有類似細胞毒性模式的化學品[6]

。

Ⅱ

GB/T35520—2017

化學品胚胎毒性胚胎干細胞試驗

1范圍

本標準規(guī)定了化學品胚胎毒性胚胎干細胞試驗的術(shù)語和定義試驗原理試驗方法質(zhì)量控制和結(jié)

、、、

果評價

。

本標準適用于應(yīng)用胚胎干細胞試驗測試化學品的胚胎毒性

。

2術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件

。

21

.

半數(shù)分化抑制濃度medianinhibitionofdifferentiation

ID50

化學品抑制細胞分化為心肌細胞的濃度

50%ES。

22

.

D3細胞半數(shù)生長抑制濃度medianinhibitionofgrowthofD3

IC50D3

化學品抑制細胞系生長和活性的濃度

50%ESD3。

23

.

3T3細胞半數(shù)生長抑制濃度medianinhibitionofgrowthof3T3

IC503T3

化學品抑制細胞生長和活性的濃度

50%3T3。

3試驗原理

胚胎毒性測試或用妊娠動物進行體內(nèi)試驗或用培養(yǎng)的胚胎以及取自妊娠動物的胚胎組織細胞進

,、

行體外試驗不管體內(nèi)還是體外測試都得處死妊娠動物[8]利用胚胎干細胞體外培養(yǎng)無限增殖與分

。,。

化的潛能提出了一種利用小鼠永生化細胞系的體外胚胎毒性測試即胚胎干細胞試驗[9]

,,。

本試驗是基于胚胎毒性作用中最重要的指標即受試物對胚胎組織和成體組織的毒性損傷存在敏

,

感性差異這種差異與胚胎分化抑制密切相關(guān)使用兩個永生化小鼠細胞系細胞和纖維母細

,。,ES(D3)

胞細胞分別表示胚胎組織和成體組織只有在添加小鼠白血病抑制因子的培養(yǎng)條件下