標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 34728-2017 無乳支原體PCR檢測(cè)方法》是一項(xiàng)國家標(biāo)準(zhǔn)，旨在規(guī)范無乳支原體（Mycoplasma agalactiae）的聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測(cè)技術(shù)。該標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)規(guī)定了從樣本采集到結(jié)果分析的一系列步驟和技術(shù)要求，適用于動(dòng)物源性材料中無乳支原體DNA的定性檢測(cè)。

首先，在采樣方面，標(biāo)準(zhǔn)指出了不同類型的樣品應(yīng)該如何正確地收集與保存，確保所取得的樣本能夠準(zhǔn)確反映被檢測(cè)對(duì)象的真實(shí)情況。對(duì)于液體樣本如血液或奶液，推薦使用無菌容器直接采集；而對(duì)于固體組織，則需先進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶幚砗笤偃?。所有樣本均?yīng)在低溫條件下盡快送至實(shí)驗(yàn)室，并按照特定條件儲(chǔ)存以防止目標(biāo)DNA降解。

接著是核酸提取環(huán)節(jié)，這是整個(gè)PCR檢測(cè)流程中的關(guān)鍵步驟之一。標(biāo)準(zhǔn)提供了多種有效的DNA提取方法供選擇，包括但不限于酚/氯仿抽提法、硅膠膜吸附法等。無論采用哪種方式，最終目的都是要獲得高純度且足夠用于后續(xù)擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)的模板DNA。

然后進(jìn)入PCR擴(kuò)增階段。根據(jù)《GB/T 34728-2017》，應(yīng)選用特異性引物針對(duì)無乳支原體特有的基因序列進(jìn)行擴(kuò)增。此外，還對(duì)反應(yīng)體系組成、循環(huán)參數(shù)設(shè)置等方面給出了具體指導(dǎo)，確保實(shí)驗(yàn)過程可控且結(jié)果可靠。

最后，在結(jié)果判定上，《GB/T 34728-2017》明確了陽性對(duì)照和陰性對(duì)照的重要性，通過比較待測(cè)樣品與這些對(duì)照之間的電泳條帶差異來確定是否存在目標(biāo)病原體。同時(shí)，也強(qiáng)調(diào)了重復(fù)性和再現(xiàn)性的要求，保證每次檢測(cè)都能得到一致的結(jié)果。


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....

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  • 2017-11-01 頒布
  • 2018-05-01 實(shí)施
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文檔簡(jiǎn)介

ICS11220

B41.

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T34728—2017

無乳支原體PCR檢測(cè)方法

PCRforMycoplasmaagalactiae

2017-11-01發(fā)布2018-05-01實(shí)施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T34728—2017

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出

。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國動(dòng)物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口

(SAC/TC181)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所

:。

本標(biāo)準(zhǔn)起草人儲(chǔ)岳峰趙萍高鵬程陳勝利賀英逯忠新

:、、、、、。

Ⅰ

GB/T34728—2017

無乳支原體PCR檢測(cè)方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了無乳支原體檢測(cè)方法的技術(shù)要求

PCR。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于檢測(cè)羊山羊和綿羊臨床樣品和分離培養(yǎng)物中無乳支原體的核酸

()。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T6682

3縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

接觸傳染性無乳癥

CA:(ContagiousAgalactia)

Maa無乳支原體Mcolasmaaalactiae

g:(ypg)

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

PCR:(PolymeraseChainReaction)

核酸電泳緩沖液

TAE:(Tris-Aceticacid-EDTA)

顏色變化單位

CCU:(Colorchangeunit)

Taq酶Taq聚合酶Taq

:DNA(DNAPolymerase)

脫氧核糖核酸

DNA:(DeoxyribonucleicAcid)

脫氧核糖核苷三磷酸

dNTPs:(DeoxyribonucleosideTriphosphates)

堿基對(duì)

bp:(BasePair)

4儀器器材

41儀器

.

高速冷凍離心機(jī)擴(kuò)增儀核酸電泳儀水平電泳槽恒溫水浴鍋普通冰箱低溫冰箱

、PCR、、、、、(-70℃)、

凝膠成像系統(tǒng)高壓滅菌鍋組織勻漿設(shè)備

、、。

42器材

.

微量加樣器無菌濾

(0.5μL~10μL、2μL~20μL、20μL~200μL、100μL~1000μL)、0.22μm

器無菌棉拭子滅菌采樣容器

、、。

5試劑

51反應(yīng)預(yù)混合液含Taq酶和上樣緩沖液

.2×PCR(、dNTPs

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