ICS6502001

B16..

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T31809—2015

油棕猝倒病菌檢疫鑒定方法

DetectionandidentificationofPythiumsplendensBraun

2015-07-03發(fā)布2015-11-27實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

中華人民共和國(guó)

國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

油棕猝倒病菌檢疫鑒定方法

GB/T31809—2015

*

中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社出版發(fā)行

北京市朝陽(yáng)區(qū)和平里西街甲號(hào)

2(100029)

北京市西城區(qū)三里河北街號(hào)

16(100045)

網(wǎng)址

:

服務(wù)熱線

:400-168-0010

年月第一版

20159

*

書號(hào)

:155066·1-49880

版權(quán)專有侵權(quán)必究

GB/T31809—2015

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)植物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口

(SAC/TC271)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中華人民共和國(guó)寧波出入境檢驗(yàn)檢疫局中華人民共和國(guó)浙江出入境檢驗(yàn)檢疫

:、

局中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院

、。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人張慧麗張建成顧建鋒鄭煒徐瑛陳先鋒段維軍陳吳健吳志毅杜洪忠

:、、、、、、、、、、

吳品珊

。

Ⅰ

GB/T31809—2015

油棕猝倒病菌檢疫鑒定方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了油棕猝倒病菌的形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)檢疫鑒定方法

。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于油棕猝倒病菌寄主植物的植株插枝等植物材料及介質(zhì)的檢疫鑒定

、。

2儀器設(shè)備

生物顯微鏡具油鏡鏡頭具透射光源的體視顯微鏡最大放大倍數(shù)不低于高壓滅菌鍋天

()、(50×)、、

平感量研缽制冰機(jī)純水儀渦旋振蕩器臺(tái)式離心機(jī)分光光度計(jì)高速冷凍

(1/100g,1/10000g)、、、、、、、

離心機(jī)真空抽干儀低溫冰箱冷藏冷凍冰箱超凈工作臺(tái)普通儀光學(xué)反應(yīng)管計(jì)電

、、、、、PCR、PCR、pH、

泳儀水平電泳槽實(shí)時(shí)熒光儀微量移液器

、、PCR、(0.5μL、2μL、10μL、20μL、100μL、200μL、

反應(yīng)管錐形瓶試管培養(yǎng)皿載玻片蓋玻片

1000μL)、PCR(0.2mL、0.5mL)、、、、、。

3主要試劑和培養(yǎng)基

除另有規(guī)定外所有試劑均采用分析純無(wú)菌雙蒸水液氮蛋白酶氫氧化鈉醋酸銨氯化鉀

,。、、K、、、、

無(wú)水乙醇溴化乙錠三氯甲烷異丙醇異戊醇氨芐青霉素利福平制霉菌素苯菌靈氯化鈉

、、、、、、、、、、

Taq聚合酶混合物緩沖液瓊脂糖分子量標(biāo)準(zhǔn)

CTAB、DNA、dNTP、10×PCR、、DNA、Tris/EDTA/

提取緩沖液緩沖液硼酸鹽緩沖液等培養(yǎng)基及緩

SDS(TES)、Tris/EDTA(TE)、TrisEDTA(TBE)。

沖液配制方法見附錄

B。

4檢疫鑒定

41癥狀檢查

.

仔細(xì)檢查根部根部癥狀是軟化變褐腐爛莖部癥狀是出現(xiàn)灰色或棕黑色水漬狀斑點(diǎn)參見

,,;(

附錄對(duì)可疑植物和繁殖材料的介質(zhì)土應(yīng)取樣做進(jìn)一步檢驗(yàn)

A)。。

42組織分離

.

選萎蔫及根部變褐但沒(méi)有完全腐爛的植物材料用流動(dòng)的自來(lái)水沖洗干凈在根莖病健交界處切取

,,

的小塊組織用次氯酸鈉進(jìn)行表面消毒無(wú)菌水沖洗次滅菌濾紙吸干表面

0.5cm×0.5cm,1%3min,3,

水分后置于選擇性培養(yǎng)基上黑暗培養(yǎng)每天觀察待長(zhǎng)出菌絲后挑取菌絲尖端轉(zhuǎn)移到

,,25℃~30℃,,,

基礎(chǔ)培養(yǎng)基上純化保存?zhèn)溆?/p>

,。

43土壤誘集

.

對(duì)禾本科植物葉片如馬唐狗尾草稗草等進(jìn)行高溫高壓滅菌處理剪成直徑大小的小片

(:、、),1cm

作為誘餌取土壤樣品研磨破碎放入滅菌潔凈燒杯中厚度不超過(guò)緩慢加入無(wú)

。5g~20g50mL,2cm,

菌水沒(méi)過(guò)土表用吸水紙輕輕去掉形成的表面膜和漂浮的有機(jī)物殘?jiān)繜娣胖谜T

1cm~2cm,,