ICS6502001

B16..

中華人民共和國國家標(biāo)準

GB/T31798—2015

油菜黑脛病菌檢疫鑒定方法

DetectionandidentificationofPlenodomusbiglobosus

Shoemaker&HBrunGruyterAveskamp&Verkley

(.),

2015-07-03發(fā)布2015-11-27實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布

中國國家標(biāo)準化管理委員會

GB/T31798—2015

前言

本標(biāo)準按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別這些專利的責(zé)任

。。

本標(biāo)準由全國植物檢疫標(biāo)準化技術(shù)委員會提出并歸口

(SAC/TC271)。

本標(biāo)準起草單位中華人民共和國湖北出入境檢驗檢疫局中國檢驗檢疫科學(xué)研究院中華人民共

:、、

和國上海出入境檢驗檢疫局中華人民共和國江蘇出入境檢驗檢疫局華中農(nóng)業(yè)大學(xué)

、、。

本標(biāo)準主要起草人趙暉王振華曾憲東易建平李彬李國慶吳品珊蔡翔

:、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T31798—2015

油菜黑脛病菌檢疫鑒定方法

1范圍

本標(biāo)準規(guī)定了油菜黑脛病菌Plenodomusbilobosus的檢疫鑒定方法

(g)。

本標(biāo)準適用于油菜種子植株及其產(chǎn)品中油菜黑脛病菌的檢疫和鑒定

、。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

GB/T6682

3儀器設(shè)備和主要試劑

31儀器設(shè)備

.

生物顯微鏡體視顯微鏡高速冷凍離心機純水儀超凈工作臺滅菌鍋制冰機儀凝膠成

、、、、、、、PCR、

像系統(tǒng)電泳儀培養(yǎng)箱超低溫冰箱常規(guī)冰箱渦旋振蕩器

、、、、、。

32主要試劑

.

除另有規(guī)定外所有試劑均為分析純或生化試劑試驗用水符合

,,GB/T6682。

3211%次氯酸鈉

..

322提取試劑提取試劑盒異丙醇無水乙醇尿素提取液

..DNA:DNA,,。(7mol/LUrea、50mmol/L

蛋白酶苯酚三氯甲烷異戊醇

Tris-HClpH8.0、62.5mmol/LNaCl、1%SDS),K(20mg/mL),∶∶

溶液

(25∶24∶1),3mol/LNaAc(pH5.2)。

323試劑緩沖液含Taq酶

..PCR:10×PCR(25mmol/LMgSO4),,dNTPs。

324凝膠電泳試劑瓊脂糖緩沖液

..:,TAE,Loading,EB。

325培養(yǎng)基蔬菜汁公司瓊脂粉蒸餾

..20%V8:V8(CampbellSoup)200mL,CaCO30.75g,13.0g,

水定容至調(diào)整至高壓滅菌

1000mL,pH5.8,121℃20min。

326馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基馬鈴薯浸粉葡萄糖氯霉素瓊脂蒸

..(PDA):5.0g,20.0g,0.1g,13.0g,

餾水定容至調(diào)整至高壓滅菌

1000mL,pH5.6,121℃20min。

4病菌的鑒定

41癥狀檢查

.

411種子癥狀檢查

..

取樣品量若樣品少可適量增大比例的種子在解剖鏡下挑選皺縮干癟變色殘缺的

1%~5%(),、、、

種子或有霉變的籽?；虿報w每份種子樣品挑選不少于