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實(shí)驗(yàn)三組織分離法組織分離法(離析法)組織分離法:是利用物理(機(jī)械)的方法或化學(xué)的方法(如藥品或者酶的作用)把生物細(xì)胞間的胞間層溶解,使生物組織間的細(xì)胞分離開(kāi)來(lái),從而得到單個(gè)完整細(xì)胞,以便在顯微鏡下觀察細(xì)胞的立體形態(tài)結(jié)構(gòu)。缺點(diǎn):由于組織的細(xì)胞間彼此分離,細(xì)胞間的關(guān)系無(wú)法顯示,也就不可能了解整個(gè)組織的結(jié)構(gòu)。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)物理(機(jī)械)分離制片方法;學(xué)習(xí)化學(xué)分離制片方法。二、實(shí)驗(yàn)材料及用品實(shí)驗(yàn)材料:葉片(新鮮和固定)、南瓜莖。實(shí)驗(yàn)用具:載、蓋玻片;顯微鏡;鑷子;離心機(jī)等。實(shí)驗(yàn)藥品:蒸餾水、梯度酒精、?二甲苯+?純酒精,Naocl,?10%鉻酸+?10%硝酸離析液,二甲苯,I-KI染液,1%番紅水溶液,1%番紅酒精溶液、加拿大樹(shù)膠。三、實(shí)驗(yàn)步驟(一)——表皮制片步驟臨時(shí)裝片法選材
撕取下表皮
染色
封固
鏡檢
新鮮材料,靠近中脈部分1(I-KI染色2min)加蓋玻片置載玻片,加一滴水,充分展開(kāi)三、實(shí)驗(yàn)步驟(一)——表皮制片步驟永久制片法選材固定(FAA固定液,24h)清洗Naocl撕取下表皮染色(1%番紅水溶液30min-1.5h)水洗(洗去浮色,一次即可)
(I-KI染色)分色(用鹽酸水)水洗(洗去酸液)粘片、烘片脫水(50%,70%,80%,95%,100%,?二甲苯+?100%酒精,各2min)透明(二甲苯)封固鏡檢
靠近中脈部分染色期間觀察如染色液干涸,再滴加載玻片上滴一滴蛋白黏貼劑,期間加入一滴水,移入葉表皮,水分吸干后放入烘箱烘干2345放入30-40度溫箱,周邊泛白三、實(shí)驗(yàn)步驟(二)——離析制片步驟取材加熱離析(10%鉻酸:10%硝酸=1:1離析液)水洗染色(1%番紅的50%酒精溶液4-24h或更長(zhǎng))水洗(7%AL,1-2次)脫水(50%,70%,85%,95%AL各5min,100%AL,兩次,每次5min)透明(?二甲苯+?100%酒精,二甲苯各5min)封藏將莖切成1cm長(zhǎng),撕成細(xì)絲狀離析液為材料的20倍,30-40℃的溫箱中24-48h水洗數(shù)次,在離心管中進(jìn)行四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果表皮制片:表皮細(xì)胞的形態(tài)?氣孔器的類(lèi)型?離析制片:南瓜莖的導(dǎo)管及木纖維形態(tài)?氣孔器
氣孔器類(lèi)型無(wú)規(guī)則型不等型平列型橫列型離析法楊莖的木纖維和導(dǎo)管分子五、作業(yè)實(shí)驗(yàn)完畢
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