植物生理學(xué) 過氧化氫酶的活性的測定_第1頁
植物生理學(xué) 過氧化氫酶的活性的測定_第2頁
植物生理學(xué) 過氧化氫酶的活性的測定_第3頁
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文檔簡介

過氧化氫酶的活性的測定－紫外線吸收法一、原理HO在240nm波長下有強烈吸收，過氧化氫酶能分解過氧化氫，22使反應(yīng)溶液吸光度（A）隨反應(yīng)時間而降低。根據(jù)測量率的變化速240率即可測出過氧化氫酶的活性。二、材料與設(shè)備植物材料：植物的葉實驗材料：紫光分光光度計、離心機、研缽、250ml容量瓶、0.5ml吸管1支、10ml試管1支試劑：0.2mol/LpH7.8磷酸緩沖液0.1mol/HO（用0.1mol/L高錳酸鉀標定）22三、操作步驟1、酶提取液：稱取葉片0.5g置于研缽中，加入pH7.0的磷酸緩沖液研磨成為勻漿，并用緩沖溶液清洗研缽數(shù)次（共用6ml磷酸緩沖液，緩沖液分幾次加入），取上部澄清液在4000rpm下離心15min,上清液即為過氧化氫酶粗提液。保存?zhèn)溆谩?、測定：取10ml試管1支，按表20-2順序加入試劑。紫外線吸收法測定HO樣品配置表22在管中加入0.3ml0.1mol/L的HO，加完后立即計時，并迅速倒入石22英比色杯中，240nm下測定吸光度，每隔一分鐘讀數(shù)一次，共測三分鐘，測完后，按下式計算酶活性。四、結(jié)果計算以lmin內(nèi)減少0.1的酶量為一個酶活單位（U）△AXV240T-過氧化氫酶活性（u/gFW/min）=0?1XVXtXFW=0.043X4.6一0.1一0.2一0.3一3=10.99五、實驗反思1、影響過氧化氫酶活性測定的因素有哪些？過氧化氫酶提取自植物的新鮮葉片中，新葉與舊葉的酶活性存在差異，所以葉片的選擇會影響酶活性的測定。溫度的變化也會引起酶活性的測定研磨是否充分，洗滌是否洗干凈也會影響。2、實驗測得的吸光度較小（吸光度的起始值較低），酶活性較小，可能是選取的葉片較老，實驗中的失誤，用滴定管滴定時，滴定的蒸餾水超過

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