犐犆犛１１．２２０

犅４１

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

犌犅／犜２３２３９—２００９

伊氏錐蟲病診斷技術(shù)

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２００９０３０９發(fā)布２００９０５０１實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局

發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

書

犌犅／犜２３２３９—２００９

前言

本標(biāo)準(zhǔn)的制定參照了世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（ＯＩＥ）編寫的《陸生動(dòng)物診斷試驗(yàn)和疫苗手冊(cè)（哺乳動(dòng)物、

禽鳥與蜜蜂）》（第五版，２００４）。

本標(biāo)準(zhǔn)的附錄Ａ、附錄Ｂ和附錄Ｃ為資料性附錄。

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部提出。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)動(dòng)物防疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：周金林、沈杰。

Ⅰ

書

犌犅／犜２３２３９—２００９

伊氏錐蟲病診斷技術(shù)

１范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了新鮮血片、薄血涂片染色、毛細(xì)管集蟲、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物接種等病原鑒定方法和乳膠凝集試

驗(yàn)、間接血凝試驗(yàn)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等血清學(xué)試驗(yàn)技術(shù)。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于伊氏錐蟲病的診斷、檢疫、流行病學(xué)調(diào)查。

２臨床診斷

依家畜種類不同，臨床癥狀表現(xiàn)不同。馬（騾、驢）一般呈急性經(jīng)過，感染后，體溫突然升高到４０℃

以上，稽留數(shù)日，而后經(jīng)短時(shí)間的間隙，再行發(fā)作，體表水腫為常見癥狀，結(jié)膜和第三眼瞼常有出血斑。

黃牛、水牛及駱駝等一般呈慢性經(jīng)過，有不定期的間歇發(fā)熱，食欲不振，消瘦，腫腳和耳、尾干枯癥狀，許

多慢性感染病例無明顯病變。

有以上臨床癥狀者，可以懷疑感染，確診需要實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)。

３病原鑒定

３．１采血樣

可從耳靜脈或尾靜脈采取外周血，從頸靜脈或其他大靜脈采取深部血液，因伊氏錐蟲喜歡寄生于深

部血液，處于低蟲血癥時(shí)，外周血檢出率常低于深部血的５０％。

３．２新鮮血片檢查

在干凈載玻片上滴上一小滴鮮血，蓋上蓋玻片，使血液擴(kuò)散成為細(xì)胞單層，再用光學(xué)顯微鏡（２００倍）

觀察活動(dòng)錐蟲。為防止血液在觀察時(shí)干涸，也可先在載玻片滴血時(shí)加一滴生理鹽水或３％檸檬酸三鈉

生理鹽水。

３．３薄血膜染色檢查

將一小滴血放在清潔載玻片一端約２０ｍｍ處，按常用方法推成薄血膜，迅速風(fēng)干，用甲醇固定

２ｍｉｎ，干燥后，再加姬氏染色液（配法參見附錄Ａ）染色２５ｍｉｎ，傾去染色液，自來水沖洗，干燥后用

４００倍～１０００倍顯微鏡檢查。

３．４毛細(xì)管集蟲檢查

３．４．１材料準(zhǔn)備

肝素處理過的毛細(xì)管（管內(nèi)徑１．５ｍｍ，長(zhǎng)７５ｍｍ的玻璃或無色透明的硬質(zhì)塑料管，在擬進(jìn)血的一

端吸入３％肝素鈉１０ｍｍ，用烤箱７０℃～８０℃烤干后備用），顯微鏡一臺(tái)，離心機(jī)一臺(tái)，載玻片，蓋玻

片，１２號(hào)以上注射針頭（或金屬針），塑泥（橡皮泥）。

３．４．２采集待檢血樣

從動(dòng)物耳靜脈或尾靜脈穿刺獲得血液。先用酒精棉擦凈擬采血處皮膚，干后用針頭穿刺血管，血流

出時(shí)用毛細(xì)管吸入達(dá)４０ｍｍ深（即７０μＬ血），封閉未沾染血的另一端（可用塑泥或火焰加熱封閉）。

３．４．３集蟲

以３０００犵離心１０ｍｉｎ，待紅細(xì)胞全部沉積于毛細(xì)管下半部，上層為黃色血漿時(shí)即可。

３．４．４檢查

在毛細(xì)管的血漿與紅細(xì)胞分界線下１ｍｍ處將管折斷（切斷、剪斷）