犐犆犛１１．２２０

犅４１

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

犌犅／犜２３１９７—２００８

雞傳染性支氣管炎診斷技術(shù)

犇犻犪犵狀狅狊狋犻犮狋犲犮犺狀犻狇狌犲狊犳狅狉犪狏犻犪狀犻狀犳犲犮狋犻狅狌狊犫狉狅狀犮犺犻狋犻狊

２００８１２３１發(fā)布２００９０５０１實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局

發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

書

犌犅／犜２３１９７—２００８

前言

本標(biāo)準(zhǔn)對應(yīng)于ＯＩＥ《陸生動物診斷試驗和疫苗手冊》（２００４）２．７．６雞傳染性支氣管炎（ａｖｉａｎｉｎｆｅｃ

ｔｉｏｕｓｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ），其一致性程度為非等效。在此基礎(chǔ)上，根據(jù)國內(nèi)科研成果增加了反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反

應(yīng)和氣管環(huán)組織培養(yǎng)血清中和試驗，用于病原的鑒定和抗體檢測。

本標(biāo)準(zhǔn)的附錄Ａ為規(guī)范性附錄，附錄Ｂ為資料性附錄。

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國動物防疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會（ＳＡＣ／ＴＣ１８１）歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中國動物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心、華南農(nóng)業(yè)大學(xué)。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：吳延功、廖明、王志亮、郭霄峰、劉佩蘭、王永玲、孫承英。

Ⅰ

書

犌犅／犜２３１９７—２００８

雞傳染性支氣管炎診斷技術(shù)

１范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了雞傳染性支氣管炎病毒分離、反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)、微量血凝抑制試驗以及氣管環(huán)

組織培養(yǎng)血清中和試驗等四種診斷方法的技術(shù)要求。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于雞傳染性支氣管炎的診斷和檢疫。

２臨床診斷

２．１雞傳染性支氣管炎是雞的一種急性、接觸性傳染病，臨床上有多種表現(xiàn)形式，根據(jù)病變類型，可將

其分為：呼吸道型、腎型等，但以經(jīng)典的呼吸道型發(fā)生的最為普遍。

２．２呼吸道型表現(xiàn)為呼吸困難，有羅音或喘鳴音，雛雞感染可引起死亡。

２．３青年雞和產(chǎn)蛋雞感染后，可引起產(chǎn)蛋雞停產(chǎn)或產(chǎn)蛋下降。表現(xiàn)為產(chǎn)蛋雞產(chǎn)蛋下降，產(chǎn)軟皮蛋、砂殼

蛋或畸形蛋，蛋清稀薄如水。

２．４腎型表現(xiàn)為病雞排白色稀糞，脫水，死亡率高。

２．５符合上述臨床癥狀之一者，可以懷疑雞群感染雞傳染性支氣管炎病毒，確診需經(jīng)實驗室檢驗。

３病原的分離

３．１樣品的采集

３．１．１對于急性呼吸道型的病雞，應(yīng)采取氣管滲出物；對于剛撲殺的病雞則采取支氣管和肺組織。

３．１．２對于腎型和產(chǎn)蛋下降型的病雞，應(yīng)采取發(fā)病雞的腎臟或輸卵管。也可從大腸，尤其是盲腸扁桃

體或糞便分離病毒，但從消化道分離到的病毒未必與現(xiàn)流行或發(fā)生的病毒有直接關(guān)系。

３．２樣品的處理

３．２．１將病料放在含有１００００ＩＵ／ｍＬ青霉素和１０ｍｇ／ｍＬ鏈霉素的ｐＨ值為７．４的磷酸緩沖鹽水

（ＰＢＳ）內(nèi)，置冰盒內(nèi)送往實驗室。ｐＨ值為７．４的ＰＢＳ的配方見附錄Ａ。

３．２．２將病料磨碎，加含抗菌素的ＰＢＳ制成體積分?jǐn)?shù)為２０％的組織懸液，凍融３次，以３０００犵離心

２０ｍｉｎ，取上清液，加入終濃度為１０００ＩＵ／ｍＬ的青霉素和終濃度為１ｍｇ／ｍＬ的鏈霉素，３７℃下作用

１ｈ后用于雞胚接種。

３．３分離培養(yǎng)

３．３．１取病料上清液，接種于５枚９日齡～１１日齡的ＳＰＦ雞胚尿囊腔內(nèi)，另５枚接種ＰＢＳ，接種量均

為０．２ｍＬ／枚。３７℃孵育。每天照蛋，２４ｈ內(nèi)死亡的雞胚棄去。收集接種后３ｄ～７ｄ的雞胚尿囊液，

將所有尿囊液混合，用含１０００ＩＵ／ｍＬ青霉素和１ｍｇ／ｍＬ鏈霉素的ＰＢＳ稀釋５倍～１０倍，繼續(xù)在雞

胚內(nèi)傳代。典型的野毒株通常在雞胚中傳至第２代或第３代時，可見侏儒胚，傳至第３代，某些雞胚可

出現(xiàn)死亡。含毒尿囊液置－６０℃以下可長期保存，也可以凍干４℃保存。

３．３．２將分離物經(jīng)雞胚傳至３代或３代以上，收獲接種后７ｄ仍存活的雞胚，取胎兒，用剪刀剪除胎兒

體外的附屬物，并用吸水紙吸干胎兒表面的液體。如接種胎兒重量比對照胚最輕胎兒重量少２ｇ以上

者，可初步判定為有病毒感染。

３