§4.2Lambert-Beer定律一、透射比和吸光度一束平行光通過均勻液體介質(zhì)I0=Ia+It+Ir

I0---入射光強度；Ia---吸收光強度；

It---透射光強度；Ir---反射光強度被測溶液和參比溶液一般是分別放在同樣材料和厚度的吸收池中,Ir可相互抵消I0=Ia+It（一）透射比(Transmittance)T(%)T=

It/I0（二）吸光度（Absorbance二、Lambert-Beer定律（一）Lambert定律1760年A=k’l（二）Beer定律1852年A=k’’c（三）Lambert-Beer定律A=k·c·l

k---比例系數(shù)（與溶液的性質(zhì)、溫度及入射光波長

等因素有關(guān)）c---溶液的濃度l---液層的厚度

（四）Lambert-Beer定律A=k·c·l----UV-Vis進行定量分析的依據(jù)適用條件：a.<0.01molL-1稀溶液b.溶液中吸光質(zhì)點間沒有相互作用（離解、締合、互變異構(gòu)、配位數(shù)變化）c.非散射的均勻介質(zhì)d.吸光度具有加和性（采用雙波長法進行測量的原因）e.單色光照射（五）A=k·c·l中的k1.吸光系數(shù)a：當c：g/L時，k→aA=a·c·la:dm3·g-1·cm-1(L·g-1·cm-1)2.摩爾吸光系數(shù)ε：當c：mol/L時，k→ε

A=ε·c·lε：dm3·mol-1·cm-1(L·mol-1·cm-1)（1）物理意義：吸光物質(zhì)的濃度為1mol/L，液層厚度為1cm時，溶液的吸光度

（2）定性分析：參考ε（3）定量分析：ε估量靈敏度

（4）ε與λ有關(guān)，表示某物質(zhì)溶液的ε時，應(yīng)注明λ值（ε與溶液的性質(zhì)、溫度和入射光λ有關(guān)）（5）由較稀溶液的吸光度求得（6）比吸光系數(shù):質(zhì)量分數(shù)為1%，l為1cm時的吸光度值

ε=0.1MM---吸光物質(zhì)的摩爾質(zhì)量（7）桑德爾（Sandell）靈敏度a.定義：當吸光度等于0.001時，單位截面積光程內(nèi)所能檢測出的吸光物質(zhì)的最低含量。S：g/cm2b.S與ε關(guān)系A(chǔ)=ε·c·l=0.001→c·l=0.001/ε

偏離Lambert-Beer定律的因素（一）與測定樣品溶液有關(guān)的因素1.溶液濃度<0.01molL-1稀溶液2.試樣中各組分之間沒有相互作用（離解、締合、光化反應(yīng)、互變異構(gòu)、配合物配位數(shù)變化）3.溶劑（不同溶劑，ε不同）4.散射光T↓A↑（正偏差）（二）與儀器有關(guān)的因素非單色光

§4.3紫外-可見分光光度計一、主要組成部件

光源→單色器→

→檢測器→信號指示系統(tǒng)

吸收池（一）光源

可見區(qū)：熱輻射光源鎢燈、鹵鎢燈

紫外區(qū)：氣體放電光源氫燈、氘燈

紫外-可見光區(qū)：高壓氙燈氙燈氫燈鎢燈（二）單色器：色散元件棱鏡和光柵（三）吸收池：石英：用于紫外區(qū)或可見區(qū)玻璃：用于可見區(qū)（四）檢測器：放大、記錄指示光電池：硒光電池對光敏感范圍300-800nm，500-600nm最靈敏藍敏：210-625nm光電管紅敏：625-1000nm光電倍增管（五）信號指示系統(tǒng)二、紫外-可見分光光度計的類型