掌握細胞融合的方學習使用PEG促進細胞融合的方二．實驗原的細胞合并形成一個細胞的過程。由于體外培養(yǎng)的細胞很少會發(fā)生自發(fā)融合融合頻率大10?4-10?6之間，因此要采用生物、化學或物理的方法人為地促使細胞融合。生物方法： ，Newcastle ，Vaceine（DMSO從而使細胞發(fā)生融合。在眾多的化學試劑中，PEGPEG更易和控制、活性穩(wěn)定、使用方便、而且促進細胞融合的能力更強。2080置精巧，方法簡單，可在顯微鏡下觀察或錄象融合過程：免去PEG誘導后的洗滌過程，誘導過程可控制性強。三．實驗材料及實驗材料50%PEG混合雞紅細胞懸生理鹽Hanks實驗設備普通光學顯微載玻片若干，注射燈、恒溫水浴離心管若干、吸水紙、滴管、剪刀、白瓷四．實驗方法及取細胞懸液1mL，移入10mL4mL0.85%生理鹽水混勻。1200r/min離心5min。棄上清液（用吸管吸去0.85%生理鹽水5mL，混收集最后一次離心沉淀的血細胞，加入適量Hanks910%的紅細胞懸液（濃度約為3-4萬個/mL）取上述懸液1mL到一個試管中，加入0.5-0.8mL五．實驗結(jié)13在光鏡下可見單個橢圓狀的雞血紅細胞，在經(jīng)由PEG接觸的雞血紅細胞發(fā)生融合，可見相互接觸的紅細胞逐漸融合組成一PEG以可見大量細胞而成的褐紅色團塊。六．實驗討實驗結(jié)論討論一：細胞融合方法主要有哪幾類？各有何優(yōu)缺點幾類細胞融合方法的優(yōu)缺點如下好；缺點為PEG對細胞性，處理不好則會直接影響融合細胞討論二：本實驗中所用的PEG融合方法能否用于植物細胞？為本實驗所用PEG融合方法不能直接用于未脫壁植物細胞的融合，因為植物細胞具有細胞壁，PEG無法介導其細胞融合；但是，如果將PEG討論三：和其他同學比較，為什么出現(xiàn)了較多褐色團塊？影響PEG融合的因素還有哪些？管，導致被PEG其他影響因素PEG的分子量與濃度:細胞融合效果與PEG的分子量及其PEGPEG1000~4000，濃度一般為40~60%。PEG的pH經(jīng)驗證，PEGpH8.0~8.2之間融合PEG的處理時間:處理時間越長，融合效果越好,但對細胞的毒害也就越大。故一般將處理時間限制在1分鐘之內(nèi)。本實果,在細胞可能承受的溫度范圍內(nèi)可適當提高處理的溫度。對于哺乳動物的細,一般采用的溫度為38~40℃。七．參考文[1]DOSREMEDIOSCG,CHHABRAD,KEKICM,etal.Actinbindingproteins:regulationofcytoskeletalmicrofilaments.[J].2(2):433-473[3],,,等.PEG介導細胞融合最適條件的探討[J].動物醫(yī)學