抗酸染色臨床微生物學(xué)教研室抗酸染色臨床微生物學(xué)教研室1分枝桿菌的細(xì)胞壁內(nèi)含大量脂質(zhì)（主要是分枝菌酸）包圍在肽聚糖的外面，一般不易著色，要經(jīng)過(guò)加熱和延長(zhǎng)染色時(shí)間來(lái)促使其著色。分枝菌酸與染料結(jié)合后，就很難被酸性脫色劑脫色，故名抗酸染色?？顾崛旧ㄊ窃诩訜釛l件下使分枝菌酸與石炭酸復(fù)紅牢固結(jié)合成復(fù)合物，用3%鹽酸酒精處理也不脫色。當(dāng)再加堿性美蘭復(fù)染后，分枝桿菌仍然為紅色，而其他細(xì)菌及背景中的物質(zhì)為蘭色。實(shí)驗(yàn)原理：分枝桿菌的細(xì)胞壁內(nèi)含大量脂質(zhì)（主要是分枝菌酸）包圍在肽聚糖的2

通過(guò)抗酸染色,可以將抗酸性細(xì)菌和其它非抗酸性細(xì)菌染上不同的顏色，可用于抗酸菌的形態(tài)學(xué)鑒定。通過(guò)抗酸染色,可以將抗酸性細(xì)菌和其它3目的要求掌握結(jié)核分枝桿菌形態(tài)、培養(yǎng)特性和常用鑒定方法。掌握抗酸染色法。目的要求掌握結(jié)核分枝桿菌形態(tài)、培養(yǎng)特性和常用鑒定方法。4儀器和材料菌種：卡介苗.培養(yǎng)基:改良羅氏培養(yǎng)基.試劑:抗酸染色液其他:痰標(biāo)本、顯微鏡、酒精燈等.儀器和材料菌種：卡介苗.5結(jié)核桿菌的培養(yǎng)特點(diǎn)

培養(yǎng)基：羅-琴氏（LowenateinJensen）培養(yǎng)基主要成分：蛋黃、甘油、天門(mén)冬素、馬鈴薯淀粉、無(wú)機(jī)鹽、孔雀綠。蛋黃含脂質(zhì)生長(zhǎng)因子，能刺激生長(zhǎng)，孔雀綠可抑制雜菌生長(zhǎng)結(jié)核桿菌的培養(yǎng)特點(diǎn)6生長(zhǎng)特點(diǎn)：緩慢；固體培養(yǎng)基：2-4周可見(jiàn)菌落，為粗糙型，表面干燥呈顆粒狀，不透明，乳白色或米黃色。如結(jié)節(jié)狀、菜花狀菌落。

液體培養(yǎng)基：菌膜。生長(zhǎng)特點(diǎn)：緩慢；7實(shí)驗(yàn)方法

一、涂片標(biāo)本的制備涂片干燥固定（充分研磨，防止細(xì)菌成團(tuán)）實(shí)驗(yàn)方法一、涂片標(biāo)本的制備8二、染色

初染（5%石炭酸復(fù)紅）

脫色（3%鹽酸酒精）

復(fù)染（堿性美藍(lán)）

吸水紙吸干油鏡鏡檢初染：用木夾夾持玻片，滴加石炭酸復(fù)紅，以蓋滿標(biāo)本為度，在火焰高處徐徐加熱，切勿沸騰，出現(xiàn)蒸汽即暫時(shí)離開(kāi)，如此反復(fù)數(shù)次，染3-5分鐘，若染液蒸發(fā)減少，可再加染液。3～5min冷卻后水沖1min水沖30秒左右水沖脫色：用3%鹽酸酒精脫色，至無(wú)紅色染液流下為止二、染色9三、油鏡觀察結(jié)果抗酸菌：紅色（+）非抗酸菌和背景：藍(lán)色（—）初染脫色復(fù)染初染脫色復(fù)染三、油鏡觀察結(jié)果抗酸菌：紅色（+）初染脫色復(fù)染初染脫色復(fù)染10抗酸染色課件11抗酸染色課件12報(bào)告“—”：仔細(xì)觀察至少300個(gè)視野未發(fā)現(xiàn)抗酸菌.“±”：100—300個(gè)視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1-2條抗酸菌(全部涂膜鏡檢3遍).“﹢”：100個(gè)視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)3-9條抗酸菌(全部涂膜鏡檢1遍).“2﹢”：10個(gè)視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1-9條抗酸菌.“3﹢”：每個(gè)視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1-9條抗酸菌.“4﹢”：每個(gè)視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)9條以上的抗酸菌.報(bào)告“—”：仔細(xì)觀察至少300個(gè)視野未發(fā)現(xiàn)抗酸菌.13注意事項(xiàng)1涂片時(shí)要充分研磨，固定溫度要合適；2染色過(guò)程中染色時(shí)間要掌握好；3加熱過(guò)程中不能讓液體沸騰，沖洗時(shí)要等玻片冷卻后沖洗，避免玻片炸裂。4掌握好脫色的時(shí)間和程度；注意事項(xiàng)1涂片時(shí)要充分研磨，固定溫度要合14抗酸染色臨床微生物學(xué)教研室抗酸染色臨床微生物學(xué)教研室15分枝桿菌的細(xì)胞壁內(nèi)含大量脂質(zhì)（主要是分枝菌酸）包圍在肽聚糖的外面，一般不易著色，要經(jīng)過(guò)加熱和延長(zhǎng)染色時(shí)間來(lái)促使其著色。分枝菌酸與染料結(jié)合后，就很難被酸性脫色劑脫色，故名抗酸染色?？顾崛旧ㄊ窃诩訜釛l件下使分枝菌酸與石炭酸復(fù)紅牢固結(jié)合成復(fù)合物，用3%鹽酸酒精處理也不脫色。當(dāng)再加堿性美蘭復(fù)染后，分枝桿菌仍然為紅色，而其他細(xì)菌及背景中的物質(zhì)為蘭色。實(shí)驗(yàn)原理：分枝桿菌的細(xì)胞壁內(nèi)含大量脂質(zhì)（主要是分枝菌酸）包圍在肽聚糖的16

通過(guò)抗酸染色,可以將抗酸性細(xì)菌和其它非抗酸性細(xì)菌染上不同的顏色，可用于抗酸菌的形態(tài)學(xué)鑒定。通過(guò)抗酸染色,可以將抗酸性細(xì)菌和其它17目的要求掌握結(jié)核分枝桿菌形態(tài)、培養(yǎng)特性和常用鑒定方法。掌握抗酸染色法。目的要求掌握結(jié)核分枝桿菌形態(tài)、培養(yǎng)特性和常用鑒定方法。18儀器和材料菌種：卡介苗.培養(yǎng)基:改良羅氏培養(yǎng)基.試劑:抗酸染色液其他:痰標(biāo)本、顯微鏡、酒精燈等.儀器和材料菌種：卡介苗.19結(jié)核桿菌的培養(yǎng)特點(diǎn)

培養(yǎng)基：羅-琴氏（LowenateinJensen）培養(yǎng)基主要成分：蛋黃、甘油、天門(mén)冬素、馬鈴薯淀粉、無(wú)機(jī)鹽、孔雀綠。蛋黃含脂質(zhì)生長(zhǎng)因子，能刺激生長(zhǎng)，孔雀綠可抑制雜菌生長(zhǎng)結(jié)核桿菌的培養(yǎng)特點(diǎn)20生長(zhǎng)特點(diǎn)：緩慢；固體培養(yǎng)基：2-4周可見(jiàn)菌落，為粗糙型，表面干燥呈顆粒狀，不透明，乳白色或米黃色。如結(jié)節(jié)狀、菜花狀菌落。

液體培養(yǎng)基：菌膜。生長(zhǎng)特點(diǎn)：緩慢；21實(shí)驗(yàn)方法

一、涂片標(biāo)本的制備涂片干燥固定（充分研磨，防止細(xì)菌成團(tuán)）實(shí)驗(yàn)方法一、涂片標(biāo)本的制備22二、染色

初染（5%石炭酸復(fù)紅）

脫色（3%鹽酸酒精）

復(fù)染（堿性美藍(lán)）

吸水紙吸干油鏡鏡檢初染：用木夾夾持玻片，滴加石炭酸復(fù)紅，以蓋滿標(biāo)本為度，在火焰高處徐徐加熱，切勿沸騰，出現(xiàn)蒸汽即暫時(shí)離開(kāi)，如此反復(fù)數(shù)次，染3-5分鐘，若染液蒸發(fā)減少，可再加染液。3～5min冷卻后水沖1min水沖30秒左右水沖脫色：用3%鹽酸酒精脫色，至無(wú)紅色染液流下為止二、染色23三、油鏡觀察結(jié)果抗酸菌：紅色（+）非抗酸菌和背景：藍(lán)色（—）初染脫色復(fù)染初染脫色復(fù)染三、油鏡觀察結(jié)果抗酸菌：紅色（+）初染脫色復(fù)染初染脫色復(fù)染24抗酸染色課件25抗酸染色課件26報(bào)告“—”：仔細(xì)觀察至少300個(gè)視野未發(fā)現(xiàn)抗酸菌.“±”：100—300個(gè)視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1-2條抗酸菌(全部涂膜鏡檢3遍).“﹢”：100個(gè)視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)3-9條抗酸菌(全部涂膜鏡檢1遍).“2﹢”：10個(gè)視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1-9條抗酸菌.“3﹢”：每個(gè)視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1-9條抗酸菌.“4﹢”：每個(gè)視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)9條以上的抗酸菌.報(bào)告“—”：仔細(xì)觀