實(shí)驗(yàn)一細(xì)胞的顯微結(jié)構(gòu)——光鏡下的細(xì)胞器CollegeofLifeScienceandTechnology,XINJIANGUnivercity一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)并掌握制作植物細(xì)胞撕片、石蠟切片和涂片技術(shù)。學(xué)會(huì)利用光學(xué)顯微鏡觀察植物細(xì)胞撕片、石蠟切片和涂片。認(rèn)識(shí)并能識(shí)別光學(xué)顯微鏡下的各種細(xì)胞器的形態(tài)、大小、分布特點(diǎn)及數(shù)目。二、實(shí)驗(yàn)原理

光學(xué)顯微鏡的種類很多，一般常用的是復(fù)式顯微鏡。復(fù)式顯微鏡的式樣雖有不同，但它們的基本結(jié)構(gòu)相同，都是由光學(xué)部分和機(jī)械部分構(gòu)成。光學(xué)顯微鏡是利用光學(xué)原理，把人眼所不能分辨的微小物體放大成像，以供人們提取微細(xì)結(jié)構(gòu)信息的光學(xué)儀器。表面為曲面的玻璃或其他透明材料制成的光學(xué)透鏡可以使物體放大成像，光學(xué)顯微鏡就是利用這一原理把微小物體放大到人眼足以觀察的尺寸。

由于光學(xué)顯微鏡的最高分辨力為0.2μm，而細(xì)胞器大部分在0.1μm和10μm之間，所以光學(xué)顯微鏡下可見到一般細(xì)胞器的外部形態(tài)。較大的細(xì)胞器如細(xì)胞核，線粒體，質(zhì)體等還可見到其細(xì)微結(jié)構(gòu)。細(xì)胞器往往由特殊物質(zhì)組成，因而可通過特殊物質(zhì)的特異染色把它們區(qū)別開來。每種細(xì)胞器都有其特殊形態(tài)，大小分布及數(shù)目，這是我們判斷，識(shí)別細(xì)胞器的依據(jù)。而每種細(xì)胞器在不同細(xì)胞，不同發(fā)育時(shí)期和不同生理狀態(tài)下的形態(tài)大小會(huì)有所不同。所以細(xì)胞器的觀察可用來判斷細(xì)胞的生理狀態(tài)和發(fā)育情況。

二、實(shí)驗(yàn)原理三、實(shí)驗(yàn)用品和試劑1．器材：光學(xué)顯微鏡、載玻片、蓋玻片、刀片、無(wú)菌注射針頭、消毒棉球。2．試劑：①Ringer溶液氯化鈉0.85g（變溫動(dòng)物用0.65g）氯化鉀0.25g氯化鈣0.03g蒸餾水100ml

②1%、1/5000詹姆斯綠B溶液稱取50mg詹姆斯綠B溶于5mlRinger溶液中，稍加微熱（30~400C）使之溶解，用濾紙過濾后，即為1%原液。取1%原液1ml加入49mlRinger溶液，即成1/5000工作液，裝入瓶中備用。最好現(xiàn)用現(xiàn)配，以保持它的充分氧化能力。③Wright染液④70%酒精⑤香柏油3．材料：洋蔥、石蠟切片、涂片三、實(shí)驗(yàn)用品和試劑四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1．觀察細(xì)胞核及核仁在不同細(xì)胞中的分布情況：①細(xì)胞核及核仁（肝切片，蛙卵巢切片）(伊紅-蘇木精染色)②多核及多核仁現(xiàn)象（橫紋肌切片，蛙卵巢切片）(伊紅-蘇木精染色)③核形態(tài)差異（血細(xì)胞涂片）(Wright染色)2．中心體（馬蛔蟲受精卵切片）(巴西木素染色)3．線粒體（兔肝切片，腎切片，植物細(xì)胞線粒體撕片）（JanusgreenB染色）

組織離開機(jī)體后很快就會(huì)死亡和產(chǎn)生組織腐敗，失去原有正常結(jié)構(gòu)，因此，組織要經(jīng)固定、石蠟包埋、切片及染色等步驟以免細(xì)胞組織死亡，而能清晰辨認(rèn)其形態(tài)結(jié)構(gòu)。石蠟切片制作基本步驟：包括取材、固定、洗滌和脫水、透明、浸蠟、包埋、切片與粘片、脫蠟、染色、脫水、透明、封片等步驟。一般的組織從取材固定到封片制成玻片標(biāo)本需要數(shù)日，但標(biāo)本可以長(zhǎng)期保存使用，為永久性顯微玻片標(biāo)本。五、實(shí)驗(yàn)相關(guān)技術(shù)3.涂片制作基本技術(shù)概念：涂片是指用從患者身上采集的液體標(biāo)本（如血液，骨髓液等）均勻的涂抹在玻璃片上制成的標(biāo)本，用于實(shí)驗(yàn)室診斷和病理診斷。涂片有很多種類,直接涂片法、厚涂片法等。其實(shí)涂片與裝片差不多是同一概念，只是涂片特指一些液體狀標(biāo)本制成的裝片。方法：耳垂取血，待涂片干，Wright染液染色5min，自來水沖洗后鏡檢。五、實(shí)驗(yàn)相關(guān)技術(shù)

2．中心體：在普通光學(xué)顯微鏡下，在巴西木素特染的動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞核旁邊高爾基區(qū)中央可以看到一對(duì)中心體呈深藍(lán)色球狀。3．線粒體：在普通光學(xué)顯微鏡下，①肝細(xì)胞的線粒體呈藍(lán)綠色，形態(tài)通常為線條狀。②腎小管細(xì)胞的線粒體呈藍(lán)綠色，形態(tài)通常為直棒狀。③因植物細(xì)胞中央大液泡的存在，將細(xì)胞質(zhì)擠到邊緣，胞質(zhì)中線粒體被Janusgreen·B呈藍(lán)綠色，形態(tài)為顆粒狀或線頭狀。六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果七、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

1．在取材和觀察上要注意各種細(xì)胞器在不同細(xì)胞中特殊性。2．觀察細(xì)胞器時(shí)，要注意各種細(xì)胞器在不同細(xì)胞中的形態(tài)、大小分布、位置和數(shù)量。3．觀察植物細(xì)胞線粒體制作撕片時(shí)，要注意①撕片的厚薄要均勻，盡量薄、快；②染色時(shí)要染液少些使材料半露出來；③裝片時(shí)，材料要展平。4．觀察血細(xì)胞制作涂片時(shí)，要注意①涂片盡量快，以防血液凝固；②涂片要稀薄，便于觀察；③注意血紅細(xì)胞無(wú)核及白細(xì)胞核形態(tài)的差異。八、實(shí)驗(yàn)作業(yè)1．簡(jiǎn)述細(xì)胞撕片、石蠟切片和涂片的制作過程。2．能夠辨別光學(xué)顯微鏡下的各種細(xì)胞器的形態(tài)、大小、分布的特點(diǎn)及數(shù)目。3．繪制簡(jiǎn)圖表示各種顯微結(jié)構(gòu)在一個(gè)動(dòng)物細(xì)胞中的分布的情況。4．請(qǐng)查閱資料試述某些細(xì)胞多核及多核仁的原因。肝細(xì)