大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備與質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備與質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備與質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備與質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)試劑實(shí)驗(yàn)步驟注意事項(xiàng)初中化學(xué)是一門“以實(shí)驗(yàn)為基礎(chǔ)”的學(xué)科，實(shí)驗(yàn)教學(xué)對(duì)化學(xué)教學(xué)起著促進(jìn)作用，是初中化學(xué)教育的重要輔助手段，尤其是初中學(xué)習(xí)階段，好的實(shí)驗(yàn)教學(xué)可以激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)化學(xué)的興趣，還可以加深學(xué)生對(duì)化學(xué)概念、規(guī)律的記憶，并培養(yǎng)實(shí)踐能力、創(chuàng)新意識(shí)。生動(dòng)形象的實(shí)驗(yàn)活動(dòng)，讓學(xué)生在參與的過程中受益良多。因此提高化學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)的有效性是極其重要的。本文從初中化學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)的重要性出發(fā)，談?wù)劤踔谢瘜W(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)現(xiàn)狀及相應(yīng)的解決辦法。一、初中化學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)的重要性《初中化學(xué)課程標(biāo)準(zhǔn)》明確指出，作為義務(wù)階段的化學(xué)課程是科學(xué)教育的重要組成部分，要重視其基礎(chǔ)性和啟蒙性，教學(xué)工作要以兩方面內(nèi)容為標(biāo)準(zhǔn)展開：一方面，提供基礎(chǔ)的化學(xué)知識(shí)和技能，讓學(xué)生從化學(xué)角度認(rèn)識(shí)物質(zhì)世界，并能利用化學(xué)知識(shí)展開一些基礎(chǔ)解答。另一方面，帶領(lǐng)學(xué)生體驗(yàn)科學(xué)實(shí)驗(yàn)，在實(shí)驗(yàn)活動(dòng)中認(rèn)識(shí)和研究物質(zhì)，從而啟迪思維、拓寬視野，激發(fā)交流協(xié)作，提升創(chuàng)新意識(shí)和實(shí)踐能力?？梢哉f，實(shí)驗(yàn)教學(xué)以其直觀、生動(dòng)的教學(xué)特點(diǎn)，成為學(xué)習(xí)化學(xué)知識(shí)、鞏固概念規(guī)律、升華基礎(chǔ)理論的重要途徑和有效方法。而且在實(shí)驗(yàn)的過程中，在這個(gè)動(dòng)手動(dòng)腦的過程中，學(xué)生的收獲是非常多的，脫離了現(xiàn)實(shí)世界的實(shí)驗(yàn)體驗(yàn)，刺激了學(xué)生的感官享受，開始了對(duì)未知世界的探索和認(rèn)識(shí)?；瘜W(xué)是有用的、真實(shí)的。在實(shí)驗(yàn)活動(dòng)中，學(xué)生鍛煉了探究的意識(shí)和能力，并享受到了獲取真知的樂趣。學(xué)生不僅對(duì)化學(xué)知識(shí)有了更豐富立體的認(rèn)識(shí)，還培養(yǎng)了其嚴(yán)謹(jǐn)、認(rèn)真的科學(xué)態(tài)度，增強(qiáng)了對(duì)提出問題、解決問題的意識(shí)，因此必須充分重視初中化學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)，不要讓這一技能性學(xué)科失去意義，淪為形式。[1]二、初中化學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)現(xiàn)狀（一）理論知識(shí)教學(xué)內(nèi)容偏重。當(dāng)前初中化學(xué)實(shí)驗(yàn)存在一個(gè)制約實(shí)驗(yàn)教學(xué)效果的問題，即教師比較重視化學(xué)理論知識(shí)的教導(dǎo)和傳授，固化、強(qiáng)化了學(xué)生的理論知識(shí)記憶，學(xué)生對(duì)實(shí)驗(yàn)教學(xué)的感受就是記住實(shí)驗(yàn)藥品和實(shí)驗(yàn)步驟，但實(shí)際上化學(xué)實(shí)驗(yàn)最重要的是過程的探索問題，學(xué)生要形成科學(xué)態(tài)度、科學(xué)品質(zhì)，并在試驗(yàn)中不斷總結(jié)方法，豐富學(xué)習(xí)內(nèi)容。（二）學(xué)生的實(shí)驗(yàn)觀察和技能訓(xùn)練機(jī)會(huì)較少。部分教師根據(jù)教學(xué)進(jìn)度和學(xué)科考試時(shí)間，在設(shè)置教學(xué)內(nèi)容時(shí)，把實(shí)驗(yàn)教學(xué)時(shí)間壓縮，從而把很多應(yīng)該學(xué)生自己做實(shí)驗(yàn)，出實(shí)驗(yàn)報(bào)告的教學(xué)內(nèi)容改成演示實(shí)驗(yàn)，草草展示試驗(yàn)流程，重點(diǎn)讓學(xué)生記住步驟，從而能順利答出考卷上或是練習(xí)中一些數(shù)據(jù)、操作、現(xiàn)象等內(nèi)容的標(biāo)準(zhǔn)答案，失去了在實(shí)驗(yàn)中獲取寶貴觀察和技能訓(xùn)練的機(jī)會(huì)，使學(xué)生雖然懂流程但無法熟練操作真實(shí)實(shí)驗(yàn)。（三）重視實(shí)驗(yàn)結(jié)果，忽略交流討論。一些教師在實(shí)驗(yàn)教學(xué)過程中，只關(guān)注學(xué)生的實(shí)驗(yàn)結(jié)果或是上交的實(shí)驗(yàn)報(bào)告，而沒有對(duì)實(shí)驗(yàn)過程中學(xué)生的實(shí)驗(yàn)操作進(jìn)行細(xì)致的觀察，并分析學(xué)生出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)錯(cuò)誤的具體原因，根據(jù)對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的片面描述，無法了解問題出現(xiàn)原因，而且學(xué)生沒有獨(dú)立思考、發(fā)現(xiàn)解決問題能力的鍛煉。在實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蛯?shí)驗(yàn)內(nèi)涵都不清楚的情況下，學(xué)生彼此間的交流被忽視，無法清楚地表達(dá)自己的想法。三、提升初中化學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)有效性的對(duì)策（一）更新教學(xué)觀念，重視實(shí)驗(yàn)教學(xué)的作用。教師要根據(jù)新課改的要求，更新教學(xué)觀念，以學(xué)生為主體，讓學(xué)生成為學(xué)習(xí)的主人、實(shí)驗(yàn)的主人，重視實(shí)驗(yàn)教學(xué)的作用，重視實(shí)驗(yàn)教學(xué)對(duì)學(xué)生的積極影響，以探索性實(shí)驗(yàn)為重點(diǎn)，巧妙設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)活動(dòng)，激發(fā)學(xué)生對(duì)實(shí)驗(yàn)的興趣和熱情，為學(xué)生發(fā)散思維，培養(yǎng)創(chuàng)新意識(shí)和創(chuàng)新能力打好基礎(chǔ)。[2]（二）增加探究成分，鼓勵(lì)學(xué)生互相交流討論。增加探究成分是指讓學(xué)生重視整個(gè)化學(xué)實(shí)驗(yàn)過程，學(xué)會(huì)發(fā)現(xiàn)問題、提出假設(shè)、設(shè)計(jì)并開展實(shí)驗(yàn)，然后根據(jù)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象做好數(shù)據(jù)記錄、歸納分析，從而得出結(jié)論，并最后展開評(píng)估和交流。這樣的實(shí)驗(yàn)流程能激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，使學(xué)生各方面的能力得到鍛煉，提升科學(xué)素養(yǎng)，樹立創(chuàng)新精神。教師還要重視實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)，多為學(xué)生創(chuàng)造探究與思考的空間，并營(yíng)造學(xué)生創(chuàng)新的突破空間。[3]（三）重視實(shí)驗(yàn)報(bào)告，加強(qiáng)教師與學(xué)生間的溝通。重視實(shí)驗(yàn)報(bào)告，不是單一地看實(shí)驗(yàn)報(bào)告，而是結(jié)合學(xué)生實(shí)驗(yàn)過程之后的實(shí)驗(yàn)報(bào)告的評(píng)閱，從而對(duì)學(xué)生展開思維活動(dòng)的全過程，并和實(shí)驗(yàn)活動(dòng)結(jié)合，給予學(xué)生系統(tǒng)全面的評(píng)價(jià)。教師評(píng)價(jià)意見要以高度的責(zé)任感和負(fù)責(zé)的態(tài)度書寫，引導(dǎo)學(xué)生對(duì)實(shí)驗(yàn)活動(dòng)展開科學(xué)的總結(jié)和反思，而且在評(píng)價(jià)過程中要根據(jù)學(xué)生的學(xué)習(xí)狀況和性格特點(diǎn)做出情感引導(dǎo)，比如說對(duì)做事馬虎的學(xué)生要嚴(yán)肅中肯地建議其認(rèn)真仔細(xì)，對(duì)于很有自己想法的學(xué)生要鼓勵(lì)表揚(yáng)，提升其自信心。綜上所述，提升初中化學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)的有效性，不僅可以啟發(fā)學(xué)生主動(dòng)思維，更可以鍛煉學(xué)生獨(dú)立思考問題、解決問題的能力，是提高其綜合素質(zhì)，掌握知識(shí)和應(yīng)用能力的一個(gè)有效方法?？梢哉f在實(shí)行素質(zhì)教育的今天，在新課程改革形勢(shì)下，重視初中化學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)以提升教學(xué)的有效性、提高學(xué)生的綜合素質(zhì)，為社會(huì)輸送更多的復(fù)合型、創(chuàng)新型人才極其重要。語文課堂教學(xué)，方法多種多樣，有導(dǎo)讀法、講讀法、邊讀邊練，不管用什么方法，課堂上都要?jiǎng)?chuàng)設(shè)最佳的情境，才能讓學(xué)生學(xué)到更多的知識(shí)。創(chuàng)設(shè)情境教學(xué)，對(duì)理解課文內(nèi)容，掌握課文知識(shí)，提高語文水平起著十分重要的作用。它具有“形真”、“情切”、“意深”、“理蘊(yùn)”的特點(diǎn)，激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，，能喚起學(xué)生相應(yīng)的情感，其情感與作者、教師融會(huì)貫通，激發(fā)仰之不滅的興趣，產(chǎn)生神圣的好奇心與驚人的創(chuàng)造力。中學(xué)生的心理還處在一個(gè)未成熟的階段，多數(shù)性格好動(dòng)，沒有耐力，有的還有一種依賴心理。因此，教師在課堂上要運(yùn)用恰當(dāng)?shù)姆椒?，?chuàng)造最好的課堂氣氛，把他們的思維牽動(dòng)起來，帶到課文的情境中，在情境中接受教育，學(xué)到知識(shí)。課堂的教學(xué)內(nèi)容不同，運(yùn)用的方法也不同，教師要結(jié)合學(xué)生特點(diǎn)，根據(jù)文章體裁、內(nèi)容制定恰當(dāng)?shù)姆椒?，?chuàng)設(shè)最佳的課堂情境，讓學(xué)生全身心投入其中，從中收到最好的效果。本學(xué)年，筆者就在教學(xué)實(shí)踐中作了如下幾點(diǎn)嘗試：一、表情朗讀，即現(xiàn)情景選編中學(xué)語文課本的文章，都有明確的中心，根據(jù)中心選擇相應(yīng)的材料，然后運(yùn)用準(zhǔn)確生動(dòng)的語言把材料組織起來，把事情的來龍去脈清楚地再現(xiàn)在讀者面前。目的就是要使讀者更好地把握文章的中心及藝術(shù)特點(diǎn)。所以，有感情的朗讀比生硬的講解收效更佳。教師可以在課堂上動(dòng)情地范讀課文，然后指定朗讀能力較強(qiáng)的學(xué)生有表情地朗讀課文，這樣，學(xué)生理解起來會(huì)更迅速，更準(zhǔn)確，收到事半功倍的效果。在學(xué)習(xí)課文前，教師一定要輔導(dǎo)學(xué)生，注意課文中的語感，掌握好準(zhǔn)確的節(jié)奏，在課堂上能把文字的情感準(zhǔn)確地表達(dá)出來，使學(xué)生一接觸到新的課文時(shí)，就能進(jìn)入課文的情景中，從而激發(fā)學(xué)生的強(qiáng)烈感情，一開始就受到課文情境的熏陶。這樣就會(huì)引起學(xué)生學(xué)習(xí)課文的興趣，為學(xué)好本文奠定了思想基礎(chǔ)。二、分角色朗讀，體會(huì)人物性格特點(diǎn)一篇課文，特別是記敘文，作者除了交代記敘的要素外，主要是通過各方面的描寫渲染氣氛，表現(xiàn)人物的性格特點(diǎn)，根據(jù)文章中不同的人物，分角色朗讀。如寫人記事的文章，有的側(cè)重寫人物的行為動(dòng)作；有的側(cè)重寫人物的語言，對(duì)話；有的側(cè)重寫人物的心理活動(dòng)；有的側(cè)重人物外貌特征等。因此，要根據(jù)課文的具體情況，按課文的人物角色，分角色地朗讀課文，由于學(xué)生自己進(jìn)入了角色，產(chǎn)生了親切感，強(qiáng)化了感知，必能收到很好的效果。在分角色讀課文時(shí)，如能結(jié)合學(xué)生對(duì)人物的愛好情況去扮演角色，他的積極性會(huì)更高，他的感情會(huì)更深。這樣既增加了學(xué)生的語言實(shí)踐機(jī)會(huì)，又能準(zhǔn)確地把握人物的性格特點(diǎn)，真是兩全其美。三、使用掛圖，再現(xiàn)場(chǎng)景在教材中，有部分記敘文或說明文要盡可能使用掛圖教學(xué)，使用掛圖，增加課堂教學(xué)的直觀性，使課文的語言、內(nèi)容形象化。學(xué)生一看就懂，易理解，易記憶。有現(xiàn)成掛圖的，教師要充分利用。沒有現(xiàn)成掛圖，教師可根據(jù)內(nèi)容，自行畫圖，指導(dǎo)學(xué)生理解，引導(dǎo)學(xué)生思考，使學(xué)生思維進(jìn)入課文的意境后，在知識(shí)海洋中游弋，獵取。這樣可使學(xué)生加深課文內(nèi)容的理解，避免了枯燥乏味的講解。四、合理板書，表現(xiàn)情景在進(jìn)行新課程教學(xué)的過程中，教師一邊引導(dǎo)學(xué)生理解課文，一邊要板書課文中關(guān)鍵的詞語或重點(diǎn)內(nèi)容，通過板書，輔助學(xué)生掌握文章的重點(diǎn)內(nèi)容，掌握文章特點(diǎn)及文章的中心思想。如果板書得當(dāng)，會(huì)收到很好的效果。如何做到板書得當(dāng)，這要根據(jù)文章具體內(nèi)容而定。以記敘文為例，有的著重板書故事的線索，層次結(jié)構(gòu)；有的著重板書人物的外貌、語言、動(dòng)作或心理活動(dòng)等，有的突出場(chǎng)面、景物的描寫等?？傊?，教師要結(jié)合課文的重點(diǎn)，抓住文中最能表現(xiàn)中心的詞句，寫在黑板上，使之構(gòu)成一幅最完美的圖景，易于學(xué)生理解。五、使用多媒體，創(chuàng)設(shè)最佳情境語文課要?jiǎng)?chuàng)設(shè)出最佳的課堂情境，就要盡量運(yùn)用直觀、形象生動(dòng)的多媒體教學(xué)手段，創(chuàng)設(shè)情境，營(yíng)造氣氛，盡快把學(xué)生帶入特定的環(huán)境中，激發(fā)他們興趣。如高爾基的《海燕》一課，可根據(jù)課文內(nèi)容，搜集資料，制成課件。在學(xué)生面前呈現(xiàn)了暴風(fēng)雨來臨之前，烏云翻滾的天空，波濤蕩漾的大海，洶涌澎湃的波浪拍擊岸邊的巖石，勇敢的海燕迎風(fēng)沖向大海，沖向天空與暴風(fēng)雨搏斗的雄壯場(chǎng)面。接著請(qǐng)同學(xué)們?cè)谡n文中找出描繪海燕形象的句子，理解海燕的象征意義等。在放影片的同時(shí)，一邊放錄音，將畫面與播音范讀配合起來，加上老師有感情的解說，向?qū)W生提供了直觀生動(dòng)的形象與聲音信息。這樣，學(xué)生不僅產(chǎn)生了濃厚的學(xué)習(xí)興趣，喚起了強(qiáng)烈的求知欲望，更使他們置身于課文內(nèi)容的情景中，從中掌握知識(shí)，收到良好的教學(xué)效果。語文的課堂教學(xué)，教師要根據(jù)教學(xué)內(nèi)容，采取最恰當(dāng)?shù)慕虒W(xué)方法，運(yùn)用最先進(jìn)的教學(xué)手段，創(chuàng)造最好的課堂氛圍，把學(xué)生的思維帶到課文的情景中，讓他們受到課文情感的感染，從中鍛煉能力，增長(zhǎng)知識(shí)，從而提高語文教學(xué)水平。大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備與質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備與質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)試劑實(shí)驗(yàn)步驟注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、?shí)驗(yàn)?zāi)康牧私廪D(zhuǎn)化的概念及其在分子生物學(xué)研究中的意義學(xué)習(xí)氯化鈣法制備大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的方法。學(xué)習(xí)將外源質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)入受體菌細(xì)胞并篩選轉(zhuǎn)化體的方法、實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩?shí)驗(yàn)原理感受態(tài)細(xì)胞Competentcells受體細(xì)胞經(jīng)過一些特殊方法(如:電擊法,CaCl2等化學(xué)試劑法)的處理后,細(xì)胞膜的通透性發(fā)生變化,成為能容許外源DNA的載體分子通過的感受態(tài)細(xì)胞(competentcell)。二、實(shí)驗(yàn)原理轉(zhuǎn)化(transformation)是將異源DNA分子引入一細(xì)胞株系,使受體細(xì)胞獲得新的遺傳性狀的一種手段,是基因工程等硏究領(lǐng)域的基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)。進(jìn)入細(xì)胞的DNA分子通過復(fù)制表達(dá),才能實(shí)現(xiàn)遺傳信息的轉(zhuǎn)移,使受體細(xì)胞出現(xiàn)新的遺傳性狀。轉(zhuǎn)化過程所用的受體細(xì)胞一般是限制一修飾系統(tǒng)缺陷的變異株,即不含限制性內(nèi)切酶和甲基化酶的突變株轉(zhuǎn)化(transformation)轉(zhuǎn)化的方法:化學(xué)方法(熱擊法):使用化學(xué)試劑(如CaCl2)制備的感受態(tài)細(xì)胞,通過熱擊處理將載體DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞電轉(zhuǎn)化法:使用低鹽緩沖液或水洗制備的感受態(tài)細(xì)胞,通過高壓脈沖的作用將載體DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞轉(zhuǎn)化的方法:CaCl法是目前常用的感受態(tài)細(xì)胞制備方法,簡(jiǎn)便易行,且其轉(zhuǎn)化效率完全可以滿足一般實(shí)驗(yàn)的要求,制備出的感受態(tài)細(xì)胞暫時(shí)不用時(shí),可加入占總體積15%的無菌甘油于-70℃保存(半年),因此CaC法使用更廣泛。CaCl法是目前常用的感受態(tài)細(xì)胞制備方克隆的篩選主要用不同抗生素基因篩選。常用的抗生素有:氨芐青霉素、卡那霉素、氯霉素、四環(huán)素、鏈霉素等?？寺〉暮Y選RecombinantDNAplasmidnedNAsequencoPlasmidorcosmidTransformEtw.iwithrecombinantDNAclone重組DNA轉(zhuǎn)化細(xì)菌過程示意圖PlateonselectivegrowwthRecombinantDNAplasmid三、實(shí)驗(yàn)試劑材料大腸桿菌E.coliDh5a、pBS質(zhì)粒、1.5ml離心管(又稱eppendorf管)試劑LB培養(yǎng)基、O0.1mol/LCacI2、無菌水氨芐青霉素(Amp)三、實(shí)驗(yàn)試劑大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備與質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化共22張課件大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備與質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化共22張課件大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備與質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化共22張課件大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備與質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化共22張課件大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備與質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化共22張課件大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備與質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化共22張課件大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備與質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化共22張課件大腸桿