1、第五次普通微生物學(xué)實驗第1頁，共26頁，2022年，5月20日，22點13分，星期日二、實驗原理1.培養(yǎng)基的概念是根據(jù)微生物滿足生長的營養(yǎng)需求，人工配制的混合營養(yǎng)基質(zhì)。 必需的養(yǎng)分 適合的環(huán)境不同類的微生物因生理類型不同而表現(xiàn)出不同的營養(yǎng)需求所以不同類的微生物一般采用不同的培養(yǎng)基。 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基細菌專用 馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基 真菌專用 高氏一號培養(yǎng)基 放線菌專用第2頁，共26頁，2022年，5月20日，22點13分，星期日2.培養(yǎng)基的分類（1）按存在的物理狀態(tài)分 液體培養(yǎng)基 （不含凝固劑） 半固體培養(yǎng)基（凝固劑瓊脂含0.2-0.5%） 固體培養(yǎng)基 （凝固劑瓊脂含1.5-2.0%）。（2）按照

2、培養(yǎng)基的用途差異分 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 加富培養(yǎng)基 選擇培養(yǎng)基 鑒別培養(yǎng)基第3頁，共26頁，2022年，5月20日，22點13分，星期日（3）按組成成分分天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基半合成培養(yǎng)基瓊脂的特性：成分是多縮半乳糖，絕大多數(shù)微生物不能分解利用。96溶解，45凝固對微生物生長沒有毒害作用培養(yǎng)基的作用：微生物分離、培養(yǎng)、增殖、保藏及鑒定。第4頁，共26頁，2022年，5月20日，22點13分，星期日3.培養(yǎng)基配制原則選擇適宜的營養(yǎng)物質(zhì)營養(yǎng)物質(zhì)濃度及配比合適控制pH條件控制氧化還原電位原料來源的選擇根據(jù)培養(yǎng)目的不同調(diào)配滅菌處理第5頁，共26頁，2022年，5月20日，22點13分，星期日4.配制培養(yǎng)基的步驟

3、原料的預(yù)處理計算用量稱量溶解調(diào)pH過濾 分裝：試管：固體：1/5試管；液體：1/4-1/5。三角瓶：1/3-1/2包扎滅菌：一般培養(yǎng)基， 121 0C, 15-30min；含糖培養(yǎng)基： 112 0C, 15-30min；易產(chǎn)生沉淀的物質(zhì)：分別滅菌后再混合擺斜面（固體，試管）無菌檢查第6頁，共26頁，2022年，5月20日，22點13分，星期日第7頁，共26頁，2022年，5月20日，22點13分，星期日四、作業(yè)2人1組配制阿須貝培養(yǎng)基2000ml（全班），每組用250ml三角瓶裝120ml；裝蒸餾水3支，每支4.5 ml 第8頁，共26頁，2022年，5月20日，22點13分，星期日注 意 事

4、 項1、稱取藥品時嚴防藥品混雜，一把牛角匙稱一種藥品；2、蛋白胨極易吸濕，稱取時動作要迅速；3、配制固體培養(yǎng)基時，先將其他藥品加熱溶解到快沸時，再將稱好的瓊脂加入，繼續(xù)加熱至瓊脂完全熔化，此過程要不斷攪拌，以免瓊脂糊底，并控制火力，防止沸騰外溢； 4、分裝量根據(jù)試管大小和實際需要而定，固體培養(yǎng)基裝量約為管高的1/5，液體培養(yǎng)基的裝量約為管高的1/4，三角瓶的裝量不超過瓶體的1/2 ； 5、分裝過程中注意不要將培養(yǎng)基沾在管（瓶）口上，以免沾污棉塞而引起污染。第9頁，共26頁，2022年，5月20日，22點13分，星期日實驗12 滅菌和消毒 一、實驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)微生物實驗的一些準(zhǔn)備方法（滅菌培養(yǎng)皿的準(zhǔn)

5、備、滅菌吸管的準(zhǔn)備、無菌水的準(zhǔn)備、培養(yǎng)基平板和斜面的準(zhǔn)備等），為后續(xù)實驗做準(zhǔn)備。了解消毒與滅菌應(yīng)用范圍及基本原理，學(xué)習(xí)并掌握實驗室常用消毒與滅菌的方法第10頁，共26頁，2022年，5月20日，22點13分，星期日二、實驗原理 滅菌是應(yīng)用理化方法殺滅物體上所有微生物 消毒是應(yīng)用理化方法殺滅物體上部分微生物（主要是病原微生物）。三、滅菌的常用方法 物理法：高溫滅菌、紫外線滅菌、過濾除菌 化學(xué)法：化學(xué)藥劑殺菌第11頁，共26頁，2022年，5月20日，22點13分，星期日高溫滅菌干熱滅菌(dry heat sterilization)1.火焰滅菌：酒精燈、接種環(huán)2.干燥熱空氣箱滅菌：干燥熱空氣箱1

6、60-170,2小時（利用熱空氣滅菌) 適用范圍：金屬器皿、玻璃器皿第12頁，共26頁，2022年，5月20日，22點13分，星期日濕熱滅菌(moist heat sterilization) 利用飽和熱蒸汽滅菌。高壓蒸汽滅菌鍋采用高壓蒸汽滅菌法是濕熱滅菌的一種。利用水的沸點隨水蒸氣壓力的增加而上升以達到高溫滅菌目的的方法a 方法：一般121（1kg/cm2或15磅/英寸2）20-30min。b 適用：耐高溫物品如培養(yǎng)基，無菌水，培養(yǎng)皿。c 注意事項：滅菌開始排凈冷空氣；滅菌終了，自然緩慢降壓回零；滅菌結(jié)束，趁熱取出物品。第13頁，共26頁，2022年，5月20日，22點13分，星期日高壓蒸汽

7、滅菌鍋原理：利用飽和熱蒸汽滅菌。利用水的沸點隨水蒸氣壓力的增加而上升以達到高溫滅菌的目的。方法：一般121（1kg/cm2或15磅/英寸2）20-30min。適用：耐高溫物品如培養(yǎng)基，無菌水，培養(yǎng)皿。注意事項：滅菌開始，外筒加水，桶蓋對稱擰緊，排凈冷空氣； 滅菌終了，自然緩慢降壓回零； 滅菌結(jié)束，趁熱取出物品。第14頁，共26頁，2022年，5月20日，22點13分，星期日四、高壓蒸汽滅菌操作步驟(1)滅菌前的準(zhǔn)備：將高壓蒸汽滅菌鍋的內(nèi)桶取出，向外鍋內(nèi)加入適量的水，將內(nèi)桶放入。(2)裝放待滅菌物品：將已包扎好的物品放入內(nèi)桶。蓋上鍋蓋，以兩兩對稱方式同時旋緊螺栓，勿使漏氣。(3)加熱排氣：接通電

8、源，同時打開排氣閥，待見有大量水汽排出時，維持3-5min，鍋內(nèi)空氣排盡，關(guān)上排氣閥。(4)升溫保壓：壓力為1.05kg/cm2,121.3,2030min(5)出鍋；隔斷熱源，自然降溫，待壓力表指針回到零，打開排氣閥，稍等一些時間，再開蓋取物。第15頁，共26頁，2022年，5月20日，22點13分，星期日實驗13 微生物的純系分離 1 了解土壤微生物的分離純化及測數(shù)的基本原理。2 學(xué)習(xí)并掌握微生物分離純化技術(shù)方法。3 學(xué)習(xí)并掌握微生物平板菌落計數(shù)的技術(shù)方法。第16頁，共26頁，2022年，5月20日，22點13分，星期日二、基本原理 土壤是微生物生活的大本營，其中含有大量不同類型的微生物，

9、可按照一定的方法將各類微生物通過分離進行純培養(yǎng)，并能對特定類群進行數(shù)量測定。 基本原理是通過稀釋使菌體細胞充分分散，單細胞得以生長發(fā)育形成菌落，可使用稀釋法或平板劃線法進一步純化，還可通過平板菌落計數(shù)，推算單位重量土壤樣品含有微生物的數(shù)量。第17頁，共26頁，2022年，5月20日，22點13分，星期日圖14-1 從土壤中分離微生物操作過程第18頁，共26頁，2022年，5月20日，22點13分，星期日三、實驗步驟土壤樣品采集在待測田塊上，若田塊面積小于50平方米則按對角線三點采樣；若田塊面積大于50平方米按對角線五點采樣。采樣一般定點于耕作層0-20cm，先除去表土1-2cm，以無菌鏟采土足

10、量充分混勻后用無菌塑料袋分裝。第19頁，共26頁，2022年，5月20日，22點13分，星期日固氮菌的分離純化及測數(shù)1.制備土樣稀釋液2.培養(yǎng)基的準(zhǔn)備3.傾注法接種4.保溫培養(yǎng)5.分區(qū)劃線法純化6.計數(shù)第20頁，共26頁，2022年，5月20日，22點13分，星期日1 制備土樣稀釋液吹吸三次混勻，無菌操作第21頁，共26頁，2022年，5月20日，22點13分，星期日2 培養(yǎng)基的準(zhǔn)備 融化阿須貝培養(yǎng)基，融化后保溫在48。并取3個無菌培養(yǎng)皿，分別在皿底貼好標(biāo)簽，注明10-2、10-3、 10-4 。3 傾注法接種 先按10-4 、10-3 、 10-2 的順序?qū)⒉煌♂尪染鷳乙航尤雽?yīng)平皿中（每個平皿接入1ml），再向每個平皿傾注約15 ml的阿須貝培養(yǎng)基（50）待冷凝，混合均勻。4 保溫培養(yǎng) 將已經(jīng)接種的平皿靜置10min后，放入溫箱倒置培養(yǎng)7日（30），觀察結(jié)果。 第22頁，共26頁，2022年，5月20日，22點13分，星期日第23頁，共26頁，2022年，5月20日，22點13分，星期日5