1、熒光(ynggung)定量PCR技術(shù) 生化(shn hu)教研室研究生實(shí)驗(yàn)共三十七頁(yè)一、實(shí)驗(yàn)(shyn)目的掌握熒光(ynggung)定量PCR的原理熟悉熒光定量PCR的操作步驟。 共三十七頁(yè)二、實(shí)驗(yàn)(shyn)原理 ABI Prism7500型熒光定量PCR儀7500功能一覽：絕對(duì)定量(Absolute Quantification)自動(dòng)(zdng)計(jì)算基線、閾值、CT值、濃度、百分比相對(duì)定量(Relative Quantification)等位基因分型(Allelic Discrimination)陰陽(yáng)性鑒定(Plus/Minus with IPC)共三十七頁(yè)共三十七頁(yè)實(shí)時(shí)熒光定量(dng

2、ling) PCR技術(shù)原理聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）可對(duì)特定核苷酸片斷進(jìn)行指數(shù)級(jí)的擴(kuò)增，擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束后，可通過(guò)凝膠電泳的方法對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物(chnw)進(jìn)行定性分析，也可以通過(guò)放射性核素?fù)饺霕?biāo)記后的光密度掃描來(lái)進(jìn)行定量分析。無(wú)論定性還是定量分析，分析的都是PCR終產(chǎn)物(chnw)。 共三十七頁(yè)實(shí)時(shí)(sh sh)熒光定量PCR通過(guò)對(duì)PCR擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)產(chǎn)物熒光信號(hào)的實(shí)時(shí)檢測(cè)從而實(shí)現(xiàn)對(duì)起始模板定量及定性的分析。在實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)中，引入一種熒光化學(xué)物質(zhì)，隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì)，熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣我們(w men)就可以通過(guò)

3、熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖 共三十七頁(yè)共三十七頁(yè)共三十七頁(yè)共三十七頁(yè)共三十七頁(yè)共三十七頁(yè)共三十七頁(yè)共三十七頁(yè)共三十七頁(yè)共三十七頁(yè)共三十七頁(yè)共三十七頁(yè)共三十七頁(yè)共三十七頁(yè)三、共三十七頁(yè)共三十七頁(yè)共三十七頁(yè)共三十七頁(yè)共三十七頁(yè)共三十七頁(yè)共三十七頁(yè)共三十七頁(yè)共三十七頁(yè)四、共三十七頁(yè)共三十七頁(yè)共三十七頁(yè)共三十七頁(yè)五、實(shí)時(shí)熒光定量(dngling) PCR技術(shù)的應(yīng)用 共三十七頁(yè)共三十七頁(yè)六、思考題1. 熒光定量PCR的應(yīng)用。2. 使用SYBR Green I作熒光染料，如何提高(t go)熒光定量PCR結(jié)果可靠性？共三十七頁(yè)七、實(shí)驗(yàn)報(bào)告每人寫(xiě)一份實(shí)驗(yàn)報(bào)告，交至：10號(hào)樓10樓1012室包括(boku)：目的、原理、操作注意事項(xiàng)、結(jié)果、討論共三十七頁(yè)內(nèi)容摘要熒光定量PCR技術(shù)。自動(dòng)計(jì)算基線、閾值、CT值、濃度、百分比。陰陽(yáng)性鑒定(Plus/Minus with IPC)。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）可對(duì)特定核苷酸片斷進(jìn)行指數(shù)級(jí)的擴(kuò)增，擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束后，可通過(guò)凝膠電泳的方法對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行定性分析，也可以通過(guò)放射性核素?fù)饺霕?biāo)記后的光密度掃描來(lái)進(jìn)行定量分析。通過(guò)對(duì)PCR擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)產(chǎn)物熒光信號(hào)的實(shí)時(shí)檢測(cè)從而實(shí)現(xiàn)對(duì)起始模板定量及定性的分析。每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣我們就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，從而