1、基因工程實驗流程植物總DNA的提取（作為PCR的模板）質粒的提取與酶切檢測（pET28a及pET28a-SRP）PCR產(chǎn)物從瓊脂糖凝膠上的回收PCR產(chǎn)物與T載體的連接6月23號6月24號6月25號PCR產(chǎn)物及pET28a雙酶切、純化回收（電泳、凝膠回收）原核表達載體的誘導表達及目的蛋白的檢測6月27號6月29號重組載體轉化大腸桿菌DH5陽性克隆檢測菌落PCR6月26號6月28號目的基因的克?。≒CR擴增）PCR雙酶切回收產(chǎn)物與pET28a載體的連接（連接后可在4C保存）重組載體轉化大腸桿菌M15或DL21重組載體的檢測菌落PCR、雙酶切等6月30號-7月2號實驗一 丹參總DNA的提取實驗目的：

2、掌握從植物或動物的組織（細胞）中抽提DNA的方法。實驗材料：丹參葉片實驗器材：臺式離心機，恒溫水浴鍋，電泳儀，研缽和杵，離心管，微量移液器，槍頭實驗步驟：第一次使用前請先在漂洗液WB和結合液PQ中加入指定量的無水乙醇，充分混勻，加入后請及時在方框打鉤標記已加入乙醇，以免多次加入! 取所需適量裂解液PL放置在65預熱，使用前加入-巰基乙醇到終濃度2%。1.取適量植物組織（新鮮組織100mg 或干重組織30 mg）在研缽中加入液氮充分碾磨成細粉。2.轉移細粉到一個1.5ml離心管，不要解凍，加600l 65預熱的裂解液PL (確認已加入-巰基乙醇至2%)，劇烈渦旋振蕩混勻，用大口徑槍頭輕柔吹打幫助

3、裂解。如果組織裂解困難，可根據(jù)需要加一個輕柔勻漿10秒的步驟幫助裂解。3.65水浴20-60分鐘，在水浴過程中顛倒離心管以混合樣品數(shù)次?？蛇x如果組織干燥或者產(chǎn)量低，可以適當延長水浴時間。如RNA殘留多，可在水浴前加入6lRNA酶（20mg/ml）。4.加入700l氯仿/異戊醇（體積比24：1混合），顛倒充分混勻幾分鐘（或者渦旋混勻），13,000rpm 離心5分鐘。若提取的植物組織富含多糖多酚，可以在第4步前用等體積酚/氯仿 （1：1）抽提一遍。5.小心吸取上清到一個新的1.5ml離心管，注意不要吸到界面物質。如上清比較渾濁，則需要重復步驟4一遍，直到得到透亮上清。6.較精確估算上清量，加入1

4、.5倍體積結合液PQ （請先檢查是否已加入無水乙醇!）后立刻渦旋，充分混勻。此時可能出現(xiàn)沉淀，但不影響實驗結果。7.將上一步所得混合物（包括可能出現(xiàn)的沉淀）加入一個吸附柱AC中，（吸附柱放- 5 - 入收集管中）13,000rpm離心30秒，倒掉收集管中的廢液（先加700l離心，棄廢液，再加入剩余的溶液，再次離心）。8.加入500l抑制物去除液IR，12,000rpm 離心30秒，棄廢液。9.加入700l漂洗液WB（請先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000rpm 離心30秒，棄掉廢液。10.加入500l漂洗液WB，12,000rpm離心30秒，棄掉廢液。11.將吸附柱AC放回空收集管中，1

5、3,000rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應。12.取出吸附柱AC，放入一個干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加100l洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在65-70水浴中預熱），室溫放置3-5分鐘12,000rpm 離心1分鐘。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置2分鐘，12,000rpm離心1分鐘。洗脫體積越大，洗脫效率越高，如果預計和需要產(chǎn)量高，可增大洗脫體積，如果需要DNA濃度較高，可以適當減少洗脫體積，但是最小體積不應少于50l，體積過小降低DNA洗脫效率，減少DNA產(chǎn)量。13.DNA可以存放在2-8，如果要長時間存放，可以放置在20。按照植物總DN

6、A提取試劑盒操作說明。1%瓊脂糖凝膠電泳檢測注意事項：1.所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉速可以達到13,000rpm的傳統(tǒng)臺式離心機，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機。2.開始實驗前將需要的水浴先預熱到65備用。3.需要自備氯仿/異戊醇（體積比24：1混合）、無水乙醇和-巰基乙醇。4.結合液PQ 和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚、眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。5.不同來源的植物組織材料中提取DNA的量會有差異，一般100mg新鮮組織典型產(chǎn)量可達3-25g。6.洗脫液EB不含有螯合劑EDTA，不影響下游酶切

7、、連接等反應。也可以使用水洗脫，但應該確保pH大于7.5，pH過低影響洗脫效率。用水洗脫DNA應該保存在20。實驗結果：本組實驗結果是第九孔和第十孔，其中第九孔的DNA提取效果較第十孔提取效果好。兩空之間的差異可能是由于兩個離心管中添加的植物量不一樣，所以最后提取的量不一樣。實驗結果分析：1.在液氮研磨葉片的時候，研磨不夠充分，且在向離心管中添加的時候，添加的量不多，速度慢，導致氧化，對提取效率造成很大影響。2.可能是因為在提取DNA的最后步驟向吸附管中添加的洗脫液太多150ul，導致DNA的濃度過低，所以條帶不亮。3.在第九步中，將吸附柱放置室溫晾干，可能晾置時間不足，導致添加的有機溶劑沒有

8、完全揮發(fā)，而有機溶劑影響了DNA的提取。實驗二 質粒DNA的提取及酶切檢測實驗目的：學習和掌握小量提取質粒的方法。實驗原理：質粒提取（堿裂解法）根據(jù)共價閉合環(huán)狀質粒DNA與線性染色體DNA在拓撲學上的差異來分離它們。在的堿性條件下，線性的染色體DNA變性，雙螺旋解開，而共價閉環(huán)質粒DNA仍保持雙鏈緊密纏繞的狀態(tài)。將pH調至中性并保持高鹽濃度的條件下，染色體DNA之間形成不溶性網(wǎng)狀結構，大部分DNA和蛋白質在去污劑SDS作用下形成沉淀，而共價閉環(huán)質粒DNA保持可溶狀態(tài)，經(jīng)離心可將大部分細胞碎片、染色體DNA、RNA及蛋白質除去，質粒DNA留在上清液中，用酚、氯仿抽提，可進一步純化質粒DNA。實驗

9、材料：含有pET28a質粒的大腸桿菌H5；構建好的含有目的基因SRP的pET28a-SRP質粒的大腸桿菌DH5實驗器材：離心機、水浴鍋、電泳儀、離心管，微量移液器，槍頭，等實驗步驟：質粒提取按照試劑盒操作說明。1用1.5ml離心管收集1-5ml菌液。12,000rpm離心1min，棄上清。應根據(jù)所培養(yǎng)菌體的濃度與質粒的拷貝數(shù)，確定收集的菌液量。菌量過大可能導致溶菌不充分，純化時會影響質粒純度。菌體的體積與質?？截悢?shù)參見注意事項。2250l溶液/RNaseA混合液，漩渦劇烈振蕩直至菌體完全重新懸浮。室溫靜置1-2min。初次使用本試劑盒時，請將RNaseA全部加入到溶液中，均勻混合后于4保存?？?/p>

10、保存6個月。不要殘留細小菌塊。菌體懸浮充分與否將決定質粒DNA得率的高低。室溫靜置1-2min是為使溶液中的RNA被充分降解。3加入250l溶液，輕柔地反復顛倒混勻6-10次。室溫放置1-2min，使菌體充分裂解，直至形成澄清的裂解溶液。若溶液出現(xiàn)沉淀，請于37保溫溶解。待恢復至室溫后使用。沉淀的出現(xiàn)不會影響質粒DNA的純化結果。不可劇烈混和，否則會使染色體DNA斷裂。此步驟不宜超過5min。4加入350l溶液，立即輕柔地反復顛倒混勻5-6次。此時會出現(xiàn)白色絮狀沉淀。5.12,000rpm室溫離心10min，收集上清。6將上清置于DNA純化柱中，靜置1-2min。如果收集的上清液過多，超過DN

11、A純化柱容積（800l），可將上清分次加入DNA純化柱中。7.12,000rpm離心1min，棄濾液。此時質粒DNA被吸附于DNA純化柱的硅膠膜上。8加入500l溶液PB/PE（去蛋白液），12,000rpm離心1min，棄濾液。此步驟的作用是將硅膠膜上吸附的蛋白、鹽等雜質洗脫，以獲得高質量質粒DNA。9加入500l溶液WB，12,000rpm離心1min，棄濾液。溶液W初次使用前用無水乙醇按1:1.5稀釋，即含60%乙醇。10加入500l溶液W，12,000rpm離心1min，棄濾液。11.12,000rpm離心3min，以徹底去除純化柱中殘留的液體。12將DNA純化柱置于新的離心管中。向純

12、化柱中央處，懸空滴加50-100l溶液Eluent，室溫放置2min。12,000rpm離心1min，管底即為高純度質粒DNA。質粒DNA于-20保存溶液Eluent可用無菌雙蒸水代替，但其pH需為8.0-8.5。溶液Eluent的加入體積視質?？截悢?shù)多少、用戶對質粒濃度要求而定。酶切反應體系：載體pET28a-SRP 30ulXho I 1ulHind III 1 ul雙酶切buffer 5 ul超純H2O 13ul37度， 3小時。電泳檢測分析注意事項;1.使用前往準備好的solution中加入RNaseA；2濃縮的wash buffer用乙醇稀釋；3所有步驟都在室溫下操作。實驗結果：實驗

13、結果分析實驗三 目的基因的克隆實驗目的 通過本實驗學習PCR反應的基本原理與實驗技術。實驗原理多聚酶鏈式反應(polymerase chainreaction，PCR)的原理類似于DNA的天然復制過程。在待擴增的DNA片段兩側和與其兩側互補的兩個寡核苷酸引物，經(jīng)變性、退火和延伸若干個循環(huán)后，DNA擴增 2n 倍。 1，變性：加熱使模板DNA在高溫下(94)變性，雙鏈間的氫鍵斷裂而形成兩條單鏈，即變性階段。 2退火：使溶液溫度降至50-60，模板DNA與引物按堿基配對原則互補結合，即退火階段。 3延伸：溶液反應溫度升至72，耐熱DNA聚合酶以單鏈DNA為模板，在引物的引導下，利用反應混合物中的4

14、種脫氧核苷三磷酸(dNTP)，按5，+3，方向復制出互補DNA，即引物的延伸階段。上述3步為一個循環(huán)，即高溫變性、低溫退火、中溫延伸3個階段。從理論上講，每經(jīng)過一個循環(huán)，樣本中的DNA量應該增加一倍，新形成的鏈又可成為新一輪循環(huán)的模板，經(jīng)過25-30個循環(huán)后DNA可擴增106-109 倍。典型的PCR反應體系由如下組分組成：DNA模板、反應緩沖液、dNTP、MgCl2、兩個合成的DNA引物、耐熱Tag聚合酶。儀器、材料與試劑 (一)儀器 1PCR熱循環(huán)儀 2瓊脂糖凝膠電泳系統(tǒng) 3. 吸頭、0.2ul PCR管，微量移液器，(二)材料：質粒(三)試劑12PCR Master Mix (含dNTP

15、，Tag酶，緩沖液) 2質粒DNA 3引物（ 上、下游引物濃度均為約10umol/ul）F:5-CCCAAGCTTCTTTTTAATCCTTCCCTCAAATATC-3（Hind III）R: 5-CCG CTCGAG GGGACAATGAAAAAGCTGATAAC-3 (Xho I)4滅過菌的millipore 水5瓊脂糖6DNA相對分子質量標準物 DL2000實驗方法1學習PCR儀的使用，設定反應程序：反應程序為：94變性3 min；94變性30 s，57退火30 s，72延伸1min20s，30個循環(huán)；72延伸8 min。4保存2加樣（冰上操作）：50ul反應體系，其中上游引物1ul，下

16、游引物1ul，丹參DNA模板2 ul或質粒DNA模板1ul，2PCR Master Mix 25ul, 滅菌水 21或22ul。3瞬時離心后在PCR儀上進行擴增反應。4電泳檢測。注意事項：在PCR儀設定的時候要注意時間與溫度，不要設置錯誤；在加樣的時候要確保加入的量準確，在冰上加樣；操作時設立陰陽性對照和空白對照，即可驗證PCR反應的可靠性，又可以協(xié)助判斷擴增系統(tǒng)的可信性；PCR之后最好能立刻電泳，不要隔夜。實驗四 PCR產(chǎn)物從瓊脂糖凝膠上的回收儀器：水浴鍋，離心機，電子天平，微量移液器試劑：瓊脂糖凝膠回收試劑盒耗材：Eppendorf管，大小槍頭 實驗步驟：按照DNA瓊脂糖凝膠回收提取試劑盒

17、操作說明。在長波紫外燈下，用干凈刀片將所需回收的DNA條帶切下，盡量切除不含DNA的凝膠，得到凝膠體積越小越好。將切下含有DNA條帶凝膠放如1.5ml離心管，稱重。先稱一個空1.5ml離心管重量，然后放入凝膠塊后再稱一次，兩次重量相減，得到凝膠的重量。加一到二倍體積溶膠/結合液DB。如果凝膠重為0.1g,其體積可視為100l，則加入100200l溶膠液。凝膠塊最大不能超過400mg，如果超過400mg，請用多個離心柱，進行回收。4.56水浴放置5min（或直至膠完全溶解）。每1-2min渦旋震蕩一次幫助加速溶解。5.將上一步所得溶液加入吸附柱AC中（吸附柱放入收集管中），12000rpm離心3

18、0-60s，倒掉收集管中的廢液。如果總體積超過750l，可分兩次將溶液加入同一個吸附柱AC中。6.加入700l漂洗液WB12000rpm離心min，棄掉廢液。7.將吸附柱AC放回空收集管中，12000rpm離心2min，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應。8.取出吸附柱AC，放入一個干凈的離心管中。在吸附膜的中間部位加50l洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在65-70水浴中加熱效果更好），室溫放置2min，12000rpm離心1min。如果需要較多量DNA，可將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，離心1min。洗脫體積越大，洗脫效率越高，如果需要DNA濃度較高，可以適當減少洗脫體積，但

19、是最小體積不應少于30l，體積過小降低了DNA洗脫效率，減少產(chǎn)量?；厥盏腜CR產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳檢測，20保存或直接用于后續(xù)試驗。 注意事項：1：保證是新膠新緩沖液濃度大小合適2：割膠大小要對，不要割錯了條帶，這很重要，3：短波紫外線（254）會引起DNA的斷裂或是形成TT二聚體，前者會使以后的鏈接與轉化等實驗失敗，后者肯能造成基因突變，給克隆工作帶來麻煩，波紫外線，回收DNA時也要盡量短時照射，避免連續(xù)長時間照射4：回收時要盡量的柔緩，避免將DNA鏈弄斷5：做膠時要盡量小薄，回收時割膠盡量少提高回收效率乙醇對回收的影響較大應注意吸干。實驗結果 ：本組為第五孔。實驗結果分析：本組為第五孔。

20、DNA的提取量較大，且PCR較成功。電泳中條帶很亮很清晰，說明目的DNA 已經(jīng)被大量克隆，可以進行下一步PCR產(chǎn)物與T載體的連接。 PCR產(chǎn)物從瓊脂糖凝膠上的回收這一步驟比較成功，主要因為：1.PCR的結果比較好，獲得了大量的目的基因； 2跑膠的時間以及膠自身制備好； 3.在切膠的時候，切得大小比較合適，所以提取的回收率較高。實驗五 PCR產(chǎn)物與T載體的連接實驗目的 將通過PCR獲得的目的基因與載體進行連接，可進一步用于測序和克隆等。實驗原理所用的T載體為線裝載體，其兩端分別有突出的一個T；而PCR產(chǎn)物在其兩端各有一個A末端，因此，可將目的基因與載體連接起來。而且T載體中含有LacZ基因，如果

21、有外源基因的插入，則LacZ基因被破壞，便于通過藍白斑進行后面的篩選。實驗試劑pGEM-T 載體、T4 DNA 連接酶、T4 DNA 連接酶緩沖液、回收的PCR產(chǎn)物實驗方法將pGEM-T 載體于離心機上進行短暫的離心，使載體都位于管低；于Eppendorf管中加入5ul T4 DNA 連接酶緩沖液、1ul pGEM-T 載體、1ul T4 DNA 連接酶、3ul 回收的PCR產(chǎn)物；將所加的物質于離心機上稍加離心，充分混勻，室溫保育3小時或4過夜（效果更好）。注意事項：使用之前，將pGEM-T 載體于離心機上進行短暫的離心。所有的樣品再添加的時候都應該在冰上操作，保持樣品的活性。加量的時候要準確

22、。將所有的物質充分混勻，使其充分接觸，提高連接效率。放在PCR儀中過夜，使其充分連接。實驗六 重組載體轉化大腸桿菌實驗目的 將質粒DNA轉化到大腸桿菌中。實驗試劑 LB培養(yǎng)基(固體和液體) Amp（10mg/mL）X-Gal（20 mg/ml） IPTG（0.2 mg/ml） 感受態(tài)細胞DH5實驗器材 搖床，離心機、水浴鍋實驗步驟 1取感受態(tài)細胞DH5（100uL）用時在冰上緩慢解凍10 min后立即使用。2每管中加入PCR與T載體的連接產(chǎn)物（10uL）。于冰上保溫40min。3于42熱激80s，中間保持靜止。4迅速在冰上冷卻2min，而后加入400-500ulLB液體培養(yǎng)基，37 10012

23、0 rpm振蕩培養(yǎng)40-60min。5將細菌鋪布于含IPTG/X-Gal（4 ul/40 ul）的LB固體培養(yǎng)基（含Amp 50 ug/ml）上，在37培養(yǎng)過夜。于24小時內挑取白色單菌落，在含Amp 50 ug/ml的LB液體培養(yǎng)基中過夜培養(yǎng)。注意事項：制備感受態(tài)細胞的全部操作均須至于冰浴操作，同時注意近火無菌操作，防止感受態(tài)細胞受雜菌污染；42熱處理時很關鍵，轉移速度要快且溫度要準確；菌液涂皿操作時，避免反復來回涂步，因為感受態(tài)細胞壁發(fā)生了變化，過多的機械擠壓會使細胞破裂，影響轉化率。實驗結果：LB固體培養(yǎng)基（含Amp 50 ug/ml）上，在37培養(yǎng)過夜之后沒有長出單菌落，實驗失敗。實驗

24、結果分析：單菌落沒長出來，原因可能有（1）PCR產(chǎn)物與T載體的連接實驗沒有做好，產(chǎn)物沒有很好與載體連接，導致重組載體轉化大腸桿菌失敗；（2）感受態(tài)細胞需要在冰上加樣，可能在實驗過程中將感受態(tài)細胞取出，使其感受態(tài)受到影響；（3）實驗在混勻的時候使用漩渦混勻器，可能對細胞有破壞。實驗七 陽性克隆檢測菌落PCR實驗目的 將通過PCR檢測重組大腸桿菌的正確性。實驗原理 菌落PCR與我們通常的普通的PCR的不同在于，不用提取基因組DNA，而是直接以菌體熱解后暴露的DNA直接為模板進行PCR擴增，是一種可以快速鑒定菌落是否為含目的質粒的實驗方法。該方法操作簡單，快捷，陽性率較高，常用于在轉化鑒定中。實驗試

25、劑 12PCR Master Mix (含dNTP，Tag酶，緩沖液) 2菌液 3引物（ 引物溶液濃度10pmolL） F: 5-CCC AAGCTT CTTTTTAATCCTTCCCTCAAATATC-3（Hind III）R: 5-CCG CTCGAG GGGACAATGAAAAAGCTGATAAC-3 (Xho I)4滅過菌的millipore 水5瓊脂糖6DNA相對分子質量標準物DL2000實驗操作1取菌液20ul， 100水浴10min（或在PCR儀（反應程序為：100變性10min；4保存）。2PCR體系配制加樣（冰上操作）：20ul反應體系，其中上游引物0.5 ul，下游引物0.

26、5 ul，煮沸后菌液 2 ul，2PCR Master Mix 10ul, 滅過菌的millipore 水 7 ul。3設定PCR反應程序：反應程序為：94變性3 min；94變性30 s，57退火30 s，72延伸1min20s，30個循環(huán)；72延伸8 min。4保存4瞬時離心后在PCR儀上進行擴增反應。5電泳檢測。實驗八 原核表達載體pET28a-SRP的構建實驗目的：學習和掌握原核表達載體的構建方法與流程。實驗原理：通過目的基因及表達載體的酶切、酶連反應，構建重組表達載體pET28a-SRP并將其導入大腸桿菌M15菌株。實驗材料：重組載體pGEM-T-SRP，目的基因PCR克隆的凝膠回收

27、產(chǎn)物，載體pET28a。實驗步驟：雙酶切(50 ul 反應體系) (1) PCR凝膠回收產(chǎn)物 30ul, Xho I 1ul, Hind III 1 ul, buffer 5 ul, H2O 13ul（2）載體pET28a 30ul, Xho I 1ul, Hind III 1 ul, buffer 5 ul, H2O 13ul37度，反應3小時。 2. 電泳檢測，凝膠回收（按照凝膠回收試劑盒操作說明） 注：雙酶切體系（1）回收約1000bp的目的基因，（2）將雙酶切的pET28a回收。 3. 連接反應于Eppendorf管中加入1ul T4 DNA 連接酶緩沖液、1ul T4 DNA 連接酶

28、、5ul 酶切后回收的pET28a載體、3ul 回收的目的基因，瞬時離心。16度，3小時或4度，過夜。4. 連接產(chǎn)物轉化大腸桿菌M15(方法參照實驗六) 實驗九 原核表達載體的誘導表達及目的蛋白的檢測目的: 學習原核表達的誘導原理和方法。原理：將外源基因克隆在含有l(wèi)ac啟動子的pET28a表達載體中，讓其在E.coli中表達。先讓宿主菌生長，lacI產(chǎn)生的阻遏蛋白與lacI操縱基因結合，從而不能進行外源基因的轉錄與表達，此時宿主菌正常生長。然后向培養(yǎng)基中加入lac操縱子的誘導物IPTG(異丙基硫代-D-半乳糖 )，阻遏蛋白不能與操縱基因結合，則DNA外源基因大量轉錄并高效表達。表達蛋白可經(jīng)SD

29、S檢測。材料與試劑：含目的基因表達載體的M15菌株， IPTG （0.2 mg/ml），LB 培養(yǎng)基，Amp（10mg/mL），Kan（10mg/mL），SDS-上樣緩沖液，（1）4TrisCl/SDS pH8.8300mlH2O中溶解91gTris堿，用1mol/L HCl調校至pH8.8，補加H2O至整體積為500ml，加入2g SDS，可4保存一個月。（2）8TrisCl/SDS pH6.840 ml H2O中加入6.05gTris堿，用1mol/L HCl調校至pH6.8，補加H2O至整體積為100ml，加入0.4g SDS， 4保存。（3）2SDS 加樣緩沖液25ml 4Tris.C

30、l/SDS pH8.820ml 甘油4g SDS1mg 溴酚藍加H2O至100ml，混勻（4）SDS電泳緩沖液 515.1g Tris堿72.0g 甘氨酸5.0g SDS加水至1000ml,用前稀釋至1SDS電泳緩沖液（5）10% 過硫酸銨（AP）(現(xiàn)用現(xiàn)配)10g 過硫酸銨，加水至100ml（6）30%聚丙烯酰胺/0.8%亞甲雙丙稀酰氨丙烯酰胺 29g甲雙丙稀酰氨 1gH2O 100ml避光4保存（7）考馬斯亮藍染色液50%（v/v）甲醇0.05%（v/v）考馬斯亮藍R-250(Biorad 或 Pierce)10%（v/v）乙酸40% 水用去離子水配制在加乙酸和水之前應將考馬斯亮藍R-25

31、0溶于甲醇。溶液可保存6個月。（8）脫色液 7%（v/v）乙酸5%（v/v）甲醇88%水聚丙烯酰胺分離膠與積層膠配方分離膠貯液分離膠中丙烯酰胺的終濃度（%）（ml）56775891012131530%聚丙烯酰胺/0.8%亞甲雙丙稀酰氨2.503.003.503.754.004.505.006.006.507.504Tris.Cl/SDS pH8.83.753.753.753.753.753.753.753.753.753.75H2O8.758.257.757.507.256.756.255.254.753.7510%過硫酸銨0.050.050.050.050.050.050.050.050.050.05四甲基乙二胺（TEMED）0.010.010.010.010.010.010.010.010.010.01SDS凝膠的有效分離范圍丙烯酰胺濃度（%）1512.5107.55.0線性分離范圍15-43