1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上核酸擴增熒光檢測實驗和結(jié)果分析標準操作程序1目的保證擴增及結(jié)果分析的標準化、規(guī)范化。2使用范圍使用LightCycler型擴增儀的核酸擴增熒光檢測實驗室。3操作人XXX4標準程序4.1 核酸提取、純化、擴增、產(chǎn)物分析的具體操作見項目SOP文件及儀器使用SOP文件；注：目前，SOP文件的主要依據(jù)是生產(chǎn)廠家提供的檢測試劑盒說明書。4.2 核酸提取、純化、加模板在樣本處理區(qū)完成；4.3 擴增反應體系的配制、分裝在試劑處理區(qū)進行；4.3 制備好的擴增混合液由傳遞窗轉(zhuǎn)移至擴增區(qū)，上機擴增；4.5 擴增程序的編程：日常檢測活動中，操作者必須遵循儀器使用SOP文件規(guī)定的路徑。編程或

2、修改路徑參照儀器說明書；4.6 標本標識的傳遞：以標本唯一性標識中的“序列號”作為檢測過程中的“檢驗號”進行傳遞；4.7 工作安排：每一項目每周至少完成一個批次的檢測；4.8 在移取所需體積的血清及痰液后，立即蓋緊原始標本管蓋，將標本繼續(xù)保存于-20冰箱；4.8.1原始標本保存一周后丟棄；4.8.2如患者及醫(yī)生對標本結(jié)果有異議，則需在一周內(nèi)及時提出意見，以便重新檢測復核結(jié)果；4.9結(jié)果分析標準程序 對于LightCycler結(jié)果曲線的分析，應按以下步驟進行：全部曲線陰性對照陽性對照陽性室內(nèi)質(zhì)控品陽性標準品逐個分析（標出陽性標本和可疑標本）調(diào)整參數(shù)，獲得較好的標準曲線，顯示定量結(jié)果登記，發(fā)報告。

3、4.9.1整體曲線的觀察將所有曲線選中進行整體觀察a）觀察是否存在污染情況（包括標本污染和試劑污染），特別應注意大量曲線在同一Ct值出現(xiàn)上漲的情況。b）觀察是否有光路傳導阻滯或電壓波動等機器原因形成的異常曲線。4.9.2陰性對照的分析陰性對照：試劑中加入與待檢標本進行同樣處理的已知陰性標本。作用：用以監(jiān)測實驗室和前處理過程中是否存在污染。4.9.3陽性對照的分析陽性對照：試劑中加入與待檢標本進行同樣處理的已知陽性標本。作用：用以監(jiān)測實驗能否正常檢出陽性標本，避免假陰性的出現(xiàn)。4.9.4陽性室內(nèi)質(zhì)控品的分析陽性室內(nèi)質(zhì)控品：試劑中加入與待檢標本進行同樣處理的已知或未知濃度的陽性室內(nèi)質(zhì)控血清。作用：

4、用以監(jiān)控日常實驗的精密度。4.9.5陽性標準品的分析a）各梯度曲線的分布是否均勻，若各梯度曲線均未分開，則表明陽模稀釋可能存在問題，提示實驗中存在較大人為誤差。b）觀察各曲線的Ct值是否在平日的正常位置。情況1：若出現(xiàn)低拷貝標準品做不出，而各曲線Ct 值均后移，則判斷是否為試劑擴增效率下降（如試劑過期或保存條件不合格）。情況2：出現(xiàn)低拷貝標準品做不出，而高拷貝曲線Ct值均正常，則提示可能存在低拷貝陽性標準品的降解情況。c）每日必做103標準品，用作以下三方面監(jiān)控：一是否存在操作誤差，如加樣量過少等原因?qū)е?03標準品未能檢出；二是否存在稀釋后的梯度放置過久，低拷貝標準品降解的情況；三是若高拷貝

5、標準品出現(xiàn)Ct值后移，且能排除情況a、b，則判斷是否為試劑靈敏度下降。4.9.6單個曲線的判斷逐個分析每條曲線，判斷曲線的陰陽性或?qū)倏梢汕€。（可疑標本是指曲線在37個Ct值后出現(xiàn)上漲且平臺趨勢不明顯或上漲幅度比較低的標本?？梢蓸吮疽诙熘刈觯瑑纱谓Y(jié)果一致則報陽性，否則結(jié)果報陰性。）曲線觀察內(nèi)容：在基線選擇28時觀察Rn值大?。ㄊ欠裼腥谔卣鳎?。在基線選擇00時觀察Rn值曲線形狀。4.9.7得出定量結(jié)果調(diào)節(jié)基線和閾值以得到一較好的標準曲線。電腦據(jù)此曲線給出陽性結(jié)果值。此時應排除某些陰性標本因熒光曲線假性上揚而得出的假陽性結(jié)果和某些弱陽性標本因終末熒光值過低而顯示的假陰性。4.9.8發(fā)放報告及時登記檢測結(jié)果記錄，發(fā)放臨床報