1、PPAR激動(dòng)劑非諾貝特對(duì)肺癌A549 細(xì)胞生長(zhǎng)和侵襲轉(zhuǎn)移的影響及其機(jī)制目的 : 觀察過(guò)氧化物酶體增殖因子激活受體 (PPAR) 激動(dòng)劑非諾貝特對(duì)人肺癌 A549 細(xì)胞生長(zhǎng)、侵襲轉(zhuǎn)移的影響, 探討 PPAR、基質(zhì)金屬蛋白酶 (MMPs)及其組織抑制劑 (TIMPs) 在非諾貝特抗腫瘤作用中的意義。方法: 體外培養(yǎng)人肺癌A549細(xì)胞 , 用不同濃度 (0 、 12.5 、 25、50、75、100 mol/L) 非諾貝特干預(yù)細(xì)胞后 , 四甲基偶氮唑藍(lán)比色 (MTT)法檢測(cè)不同藥物濃度作用下肺癌 A549 細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制情況 ; 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞周期的分部情況 ;Hoechest 染色

2、法觀察 A549 細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變 ; 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)觀察 A549 細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)能力的影響 ;Transwell 侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)肺癌 A549細(xì)胞侵襲能力的變化 ; 提取 A549細(xì)胞總RNA及蛋白 ,RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞中 PPAR、 MMP-2、MMP-9、 TIMP-1、TIMP-2 mRNA的表達(dá)情況 ,Wertern blot檢測(cè)細(xì)胞中 MMP-2與 MMP-9蛋白的表達(dá)水平 ; 酶譜法檢測(cè)不同藥物濃度作用下細(xì)胞培養(yǎng)液中MMP-2、MMP-9的酶活性。結(jié)果 :1. 細(xì)胞增殖抑制率 : 與對(duì)照組相比 , 非諾貝特組 A549 細(xì)胞增殖抑制率增大 (P<0.05),且呈時(shí)間

3、- 劑量效應(yīng)。 2. 細(xì)胞凋亡檢測(cè) : 與對(duì)照組比較 , 非諾貝特能夠誘導(dǎo)肺癌A549 細(xì)胞凋亡 , 且高濃度組誘導(dǎo)凋亡作用更加明顯。3. 細(xì)胞周期的檢測(cè) : 與對(duì)照組比較 , 非諾貝特組 G0/G1期 A549 細(xì)胞數(shù)目減少 ,G2/M 期的細(xì)胞數(shù)目增加 , 細(xì)胞阻滯于 G2/M期, 非諾貝特對(duì) a549 細(xì)胞周期阻滯作用有時(shí)間 - 劑量關(guān)系。4.hoechst33258 染色觀察發(fā)現(xiàn)非諾貝特作用下肺癌 a549細(xì)胞體積縮小 , 部分細(xì)胞膜被裂解 , 核固縮 , 呈致密濃染 , 高濃度 (100 mol/l)組伴有凋亡小體出現(xiàn)。5. 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)顯示 : 作用 48 小時(shí)后 , 陰性對(duì)照組細(xì)

4、胞劃痕基本愈合, 隨著非諾貝特濃度的增加 , 劃痕寬度越大 , 各組細(xì)胞遷移率分別為 : 對(duì)照組 :(88.21 ±0.09)%,12.5 mol/l組 :(71.70 ± 0.47)%,25 mol/l組 :(48.23 ± 0.69)%,50 mol/l組:(30.45 ±0.53)%,75 mol/l組:(20.90 ±0.31)%,100 mol/l組 :(16.20 ± 0.29)%,(p<0.05) 。6.transwell 侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示 : 陰性對(duì)照組有大量細(xì)胞穿過(guò)基底膜 , 藥物組有不同數(shù)量的細(xì)胞穿越

5、基底膜 , 各非諾貝特藥物組 (100 、75、50、25、12.5) 的侵襲抑制率分別為 :(65.78 ±0.58)%、(48.50 ± 0.23)%、(40.35± 0.19)%、(30.97±0.45)%、(23.10± 0.62)%,(p<0.05)。7.rt-pcr結(jié)果顯示: 與對(duì)照組相比, 非諾貝特處理48 小時(shí)后 , 隨著藥物濃度的增加a549 細(xì)胞中ppar 、timp-1、timp-2mrna的表達(dá)增加, 而mmp-2與mmp-9mrna的表達(dá)下降。 8.werternblot實(shí)驗(yàn)顯示 : 用非諾貝特干預(yù)a549 細(xì)胞48小時(shí)后細(xì)胞中mmp-2與mmp-9蛋白的表達(dá)水平均下降。9. 酶譜法檢測(cè)進(jìn)一步證實(shí) : 非諾貝特干預(yù)肺癌 a549 細(xì)胞 , 能夠抑制 mmp-2與mmp-9酶活性 , 且隨著非諾貝特藥物濃度的增加, 其抑制作用增強(qiáng)。結(jié)論:1. 非諾貝特能夠抑制肺癌a549 細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖 , 并誘導(dǎo)其凋亡。2. 非諾貝特能夠抑制肺癌 a549 細(xì)胞的遷移、侵襲能力。 3. 非諾貝特抑制肺癌 A549細(xì)胞生長(zhǎng)及侵襲轉(zhuǎn)