1、編寫者：沈繼錄審核者： 批準(zhǔn)人： 文件發(fā)放范圍：微生物組文件年度審核審核者：審核者：審核者：審核者：日期：日期：日期：日期：糞便標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1目的規(guī)范糞便標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保檢驗結(jié)果準(zhǔn)確可靠。2適用范圍糞便培養(yǎng)。3標(biāo)本3.3.1 標(biāo)本類型 糞便、直腸拭子。3.2 標(biāo)本采集3.2.1 自然排便采集 自然排便后，挑取其膿血、黏液部分23 g，液體糞便取絮狀物23 ml，盛于滅菌容器內(nèi)，或置于保存液(運送培養(yǎng)基)、增菌培養(yǎng)基中送檢。3.2.2 直腸拭子 如不易獲得糞便時，或排便困難病人及嬰兒，可用直腸拭子采取，即以無菌棉拭用保存液或生理鹽水濕潤后，插入肛門內(nèi)45 cm（幼兒

2、 23 cm)輕輕轉(zhuǎn)動取出，插入卡一布(CaryBlair)運送培養(yǎng)基內(nèi)或無菌容器內(nèi)送檢。3.2.3 糞便標(biāo)本應(yīng)該立即送檢，室溫保存不能超過2小時，如不能及時送檢可以放人磷酸鹽甘油(pH 7 0)或轉(zhuǎn)運培養(yǎng)基，但不能超過24小時。培養(yǎng)艱難梭菌的標(biāo)本保于-20以下。培養(yǎng)沙門菌和志賀菌的標(biāo)本應(yīng)放置磷酸鹽甘油溶液中保存。保存彎曲桿菌和弧菌的標(biāo)本，需加CaCl2(100mgL)試劑。3.3 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn) 3.3.l 糞便標(biāo)本放置時間超過2小時。3.3.2 送檢的糞便標(biāo)本混有尿液。33 3直腸拭子未置于運送培養(yǎng)基中。 4試劑、儀器4.1 革蘭染液、氧化酶試劑、麥康凱平板、SS平板、TCBS平板及相關(guān)生化

3、試劑等。4.2 VITEK鑒定系統(tǒng)；革蘭陰性菌鑒定卡(GNI+)、革蘭陰性細(xì)菌藥敏卡(GNS)、革蘭陽性菌鑒定卡(GPI)、革蘭陽性細(xì)菌藥敏卡(GPS)、真菌鑒定卡(YBC)、藥敏紙片、ATB板條等，有效期及儲存條件參見試劑說明書。4.3 接種針、接種環(huán)、電熱灼燒器、顯微鏡、孵育箱、C02培養(yǎng)箱等。4.4診斷血清。5細(xì)菌鑒定和藥敏質(zhì)控參見質(zhì)量管理程序。6檢驗步驟接收標(biāo)本后，立即對標(biāo)本進行編號、登記。6.1 涂片檢查 糞便標(biāo)本因各種正常菌群含量甚多，僅以染色性和形態(tài)無法分辨是否為病原菌。因此，糞便標(biāo)本一般不作涂片檢查。只有懷疑霍亂弧菌及菌群失調(diào)所致腹瀉時，才作直接涂片檢查(觀察動力和菌群比例)。

4、6.2 培養(yǎng)6.2.1 沙門志賀菌培養(yǎng) 參見沙門菌屬檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程、志賀菌屬檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。6.2.2 致病性大腸埃希菌培養(yǎng) 參見致病陛大腸埃希菌檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。6.2.3 霍亂弧菌培養(yǎng) 參見霍亂弧菌檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。6.2.4 副溶血弧菌培養(yǎng) 參見副溶血弧菌檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。6.2.5 小腸結(jié)腸炎耶爾森菌培養(yǎng) 參見耶爾森菌屬檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。6.2.6 空腸彎曲菌培養(yǎng) 參見彎曲菌屬檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。6.2.7 金黃色葡萄球菌培養(yǎng) 參見葡萄球菌屬檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。6.2.8 艱難梭菌培養(yǎng) 取水樣或黏液樣糞便立即接種于環(huán)絲氨酸頭孢西丁果糖瓊脂(簡稱CCFA)平板上，并將糞便作102106稀

5、釋后定量接種。35厭氧環(huán)境下培養(yǎng)48小時后，選擇粗糙型黃色菌落，移種于葡萄糖庖肉培養(yǎng)基作毒素測定；同時制涂片，懸滴檢查動力、革蘭染色及生化鑒定。6.2.9 真菌培養(yǎng) 參見分枝桿菌屬檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。6.2.10 氣單胞菌和鄰單胞菌的培養(yǎng) 參見氣單胞菌屬檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程和鄰單胞菌屬檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。6.2.11 結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng) 參見分枝桿菌屬檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。7操作流程糞便或肛拭 根據(jù)臨床需求需氧培養(yǎng) 分離致病性大SS，XLD或HE平板 分離彎曲菌 分離弧菌 腸埃希菌O15735培養(yǎng)1824h 觀察菌落特征 Campy-BA平板，35 TCBS平板 山梨醇麥涂片，染色 微需氧培養(yǎng)48 h 康凱平板雙糖鐵或三糖鐵 觀察菌落特征 觀察菌落特征及、 涂片、染色 涂片、染色血清學(xué)鑒定 血清學(xué)鑒定儀器或手工細(xì)菌 儀器或手工