1、美國疾病控制與預防中心(CDC)自50年代開始研究和推行血脂測定 標準化。多年來，他們的血脂測定參考方法和參考材料一直作為美國和許多其 他國家血脂測定的準確性基礎；他們的血脂標準化計劃為美國和世界上許多心 血管病研究的血脂標準化和臨床實驗室血脂分析質量的提高做出了突出貢獻。 了解他們的血脂標準化工作有助于我國血脂標準化的開展。一、概述 血脂標準化的核心是準確性的可溯源性。要開展標準化工作，首先要建立一個 可靠的參考系統(tǒng)作為準確性基礎，然后再將準確性轉移到常規(guī)分析中去，或使 常規(guī)分析的準確性可溯源到參考系統(tǒng)所提供的準確性基礎上。完整的參考系統(tǒng) 包括決定性方法、一級參考物質、參考方法和二級參考物質

2、。目前美國已有總 膽固醇(TC)和甘油三酯(TG)決定性方法，而高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和低密 度脂蛋白膽固醇(LDL-C)由于被分析物存在形式的復雜性和目前技術水平的限 制，則只有參考方法。TC TG決定性方法是由國家標準與技術研究所(NIST)建 立的1, 2, CDC建立并維持TC TG HDL-C和LDL-C參考方法，其中TC參 考方法是國家臨床實驗室標準委員會(NCCLS的國家膽固醇參考系統(tǒng)(NRS/CHOL) 的組成部分，TG HDL-C和LDL-C參考方法也已為國家膽固醇教育計劃(NCEP) 所推薦46。決定性方法由于其技術和成本的高要求，一般只用于參考方 法的評價和監(jiān)督

3、，而參考方法往往是日常標準化工作的主要角色。目前CDC的 TC TG HDL-C和LDL-C參考方法和用參考方法準確定值的冰凍血清參考物質 實際上在為美國和世界上許多國家的血脂分析提供準確性基礎。轉移準確 性需制定轉移計劃，亦即標準化計劃。CDC與國家心肺血液研究所(NHLBI)的血 脂標準化計劃是世界上最早的血脂標準化計劃。此計劃主要通過經(jīng)參考方法準 確定值的冰凍血清物質轉移準確性。使用定值血清轉移準確性是最簡便 最經(jīng) 濟的標準化方法，但適合大規(guī)模生產(chǎn) 貯存和運輸?shù)难咫y免要經(jīng)過一定的處 理，如冰凍 凍干等，而這些處理會在一定程度上改變血清性質，使某些分析 系統(tǒng)的分析結果出現(xiàn)偏差，即產(chǎn)生基質

4、效應。為此，CDC于 1988年建立膽固醇 參考方法實驗室網(wǎng) (CRMLN，) 以便儀器 試劑生產(chǎn)廠家和臨床實驗室直接用新鮮 血清與參考方法對比分析結果。下面將分別對CDC參考方法、參考血清、 CDC-NHLB血脂標準化計劃和CRML作簡單介紹。另外，質控調查計劃在血脂 標準化中也起重要作用，它們與 CDC參考系統(tǒng)的關系也將作簡單介紹。 二、CDC血脂參考方法1.TC: TC參考方法為 Abell-Levy-Brodie- Kendall(ALBK) 法，包括皂化 提取 顯色和比色等步驟。此法移液步驟多，提 取和顯色也需嚴格控制，一般情況下難以得到可靠結果。CDC能成功地用作參 考方法是由于他

5、們在以下方面做了改進。 (1)取樣和各部移液均用高性能自動稀 釋器操作，保證了移液精密度。 (2) 在取樣過程中使用了沖洗程序，即用醇性氫 氧化鉀(皂化劑)將標準和樣品沖入試管中，避免了樣品 (血清)和標準(乙醇溶液) 由于基質不同而對取樣準確度的影響。 (3) 確保提取完全。由于標準和樣品的基 質不同，膽固醇在提取系統(tǒng)的兩相間的分配速度不同，故提取是ALBK法的關鍵 步驟之一。 (4) 用計算機將標準 樣品和質控的分析順序隨機化，以便明察各分 析步驟出現(xiàn)任何系統(tǒng)性漂移。經(jīng)此改進的 ALBK法精密度能達到變異系數(shù)(CV)小 于 1%，一次最多可分析 120個試管，與決定性方法之間的偏差約 +1

6、.6%。此法 用NIST的膽固醇一級標準物質SRM 911b作標準。此法除用于TC測定外，也用 于HDL-C和LDL-C參考方法中的各項膽固醇測定。2.TG: TG不是單一化 合物，其測定比膽固醇復雜得多。目前 CDC勺TG參考方法分兩部分，一部分為 “凈” TG的化學測定法，另一部分為游離甘油的同位素稀釋氣相色譜質譜法。 TG化學法中用二氯甲烷提取TG用硅酸吸附各種鄰羥基化合物和磷脂，用醇性 氫氧化鉀水解TG為甘油，用高碘酸氧化甘油，使生成的甲醛與變色酸反應后用 比色法測定。取樣、提取和皂化中的各步液體轉移用稀釋器操作，氧化、還 原、顯色和比色在流動注射分析儀上進行。每次分析的流動注射分析部

7、分都包 括一套甘露醇標準，以便結果出現(xiàn)問題時判斷問題的來源。此法用 Supelco 的 三油酸甘油酯和NIST的三軟脂酸甘油酯 標準物質SRM1595勺2 ：1混合物作標 準。此法的精密度為 公6%與決定性方法的初步對比結果顯示，此法的測定 值不僅是TG還包括（或部分包括）甘油二酯和甘油一酯。游離甘油的測 定用1, 3-13C2甘油作內標，用甲醇沉淀蛋白并提取甘油，用正己烷洗去甲醇 提取液中的少量脂質，將甲醇提取液揮發(fā)干，經(jīng)衍生后用氣相色譜分離、質譜 檢測甘油衍生物。此法是 1992年建立的，建立此法的原因是目前絕大多數(shù) TG 常規(guī)分析用酶法測總甘油，測游離甘油的試劑尚不十分可靠，單獨一個測凈

8、 TG 的參考方法難以滿足TG標準化的需要。3.HDL-C和LDL-C:血清不同脂蛋 白之間沒有明確的界限，其理化性質存在一定重疊，準確測定他們的膽固醇含 量十分困難。HDL-C和LDL-C標準化首先要定義HDL和LDL，其依據(jù)應是目前血 脂與心血管病關系研究資料中 HDL和LDL的定義。目前CDC勺HDL-C和 LDL-C 參考方法為超速離心-化學沉淀法（B定量法）。用超速離心法去除血清中密度 小于 1.006 的組分（頂部組分，主要為乳糜微粒和極低密度脂蛋白 ），測定底部 組分（BF）膽固醇（BFC），用肝素-錳離子試劑沉淀BF中的LDL，測定上清液中的 HDL-C，從BFC中減去HDL-

9、C得LDL-C。BFC和hDL-C的測定均采用 ALBK法。 LDL-C中包括脂蛋白（a）和中間密度脂蛋白。4.血清參考物質：CDC血清參 考物質一直是CDC血脂參考系統(tǒng)的重要組成部分，絕大多數(shù)準確性轉移都是通 過這些物質實現(xiàn)的。CDC血清參考物質是經(jīng)參考方法準確定值的冰凍混合血 清。這些物質已有幾十年的應用歷史，而且應用范圍廣，是目前性質明確、質 量好的血脂分析物質。它們以往的應用主要是TC TG和HDL-C LDL-C的標準 化工作剛剛開始，初步研究證明 LDL-C對冰凍比其它血脂指標敏感，血清冰凍 后LDL-C下降，但在參考方法中LDL-C下降發(fā)生在冰凍初期，在以后的貯存中 不再下降，說

10、明冰凍血清用于 LDL-C參考方法的標準化是可行的。CDO清參 考物質的制備過程大致如下。取來自不同個體的血清，測定血脂后冰凍（-70C） 保存，按血脂水平需要將適當水平的血清化凍后混合。高膽固醇血清用添加血 清脂蛋白（乙醇沉淀法制備）的方法制備，高TG血清添加蛋黃提取物?；旌涎?濾過0.22卩m的濾膜后分裝于玻璃小瓶中，冰凍保存。隨機取一定數(shù)量的小 瓶，用參考方法分析血脂 12次，每次分析兩瓶，每瓶分析兩份，用所得 48個 結果檢驗均勻性和計算參考值。三、CDC-NHLB血脂標準化計劃此 計劃始于 1957年。建立此計劃的最初原因是當時許多血脂水平與冠心病關系研 究要求血脂分析的可靠性和實驗室間分析結果的可比性。到目前為止己為 100 多個美國和國際心血管病研究提供血脂分析標準化。除此之外，它還為血脂分 析方法學研究實驗室、質控調查計劃中的參考實驗室和血脂分析儀器試劑生產(chǎn) 廠家實驗室中血脂分析的質量提高與保證做出了突出貢獻。此計劃的目前版本 如下。1. 對象:美國國內的血脂研究實驗室、參加流行病學和臨床研究的 實驗室、公共衛(wèi)生實驗室、質控調查計劃